血清miR-27b在老年左心室肥厚病人中的表達(dá)及診斷意義

左心室肥厚(LVH)是心血管病發(fā)生率和死亡率升高的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,隨著老齡化進(jìn)程,該問題愈加顯著。近幾年來研究表明，microRNAs(miRNAs)在心臟發(fā)育與疾病過程中扮演著極其重要的角色[1-2]。在對(duì)人類心臟疾病和各種心肌肥厚動(dòng)物模型的標(biāo)本進(jìn)行差異表達(dá)miRNAs篩選時(shí)發(fā)現(xiàn)miR-27b在這些病理標(biāo)本中表達(dá)水平明顯升高,提示其在心臟疾病發(fā)生過程中可能發(fā)揮了重要功能[3-5]。本研究擬觀察血清miR-27b在老年LVH病人中的表達(dá),并探討其能否作為篩查LVH的新指標(biāo)。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象 選取2015年1月至2016年12月在我院老年科門診就診的老年高血壓病人,年齡60～80歲。應(yīng)用超聲心動(dòng)圖中左心室重量指數(shù)(LVMI)診斷LVH(男性LVMI≥125 g/m2,女性LVMI≥110 g/m2),選取LVH病人150例為LVH組、單純高血壓病人150例為高血壓組;另選無心血管疾病(包括高血壓、心臟瓣膜病、冠心病、心肌病等,且超聲心動(dòng)圖明確排除LVH)的老年人100例作為對(duì)照組。所有入選者均排除惡性腫瘤、周圍動(dòng)脈硬化閉塞癥、免疫和風(fēng)濕性疾病、精神性疾病及骨關(guān)節(jié)疾病等。

1.2 方法

1.2.1 觀察指標(biāo)：記錄入選病人的血壓、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、糖尿病情況;空腹抽血檢測(cè)空腹血糖、膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、血紅蛋白、血肌酐、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)等指標(biāo)。

1.2.2 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)miR-27b:(1)提取總RNA,采用miRVana RNA Isolation kit試劑盒,按操作說明書提取血清總RNA,置-80 ℃保存。

(2)采用miRNA莖環(huán)引物合成cDNA,miR-27b 莖環(huán)引物如下:5′-GTCGTATTCAGTG CAGGGTCCGTGGTATFCGCACTGGATAGGACTCATGA-3′。(3)采用SYBR GreenI法進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增反應(yīng),添加融解曲線。然后以U6為內(nèi)參,用2-ΔΔCt公式計(jì)算各組miR-27b的相對(duì)表達(dá)量。Universal primer為各miRNA通用引物。以上引物均由上海生物工程有限公司合成。各miRNA及內(nèi)參U6實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增反應(yīng)所用引物見表1。

表1 miR-27b及內(nèi)參U6實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增反應(yīng)所用引物

2 結(jié)果

2.1 3組研究人群的臨床特征比較 3組在年齡、性別、空腹血糖、ALT等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在BMI、總膽固醇、LDL-C、血肌酐、糖尿病比例方面,LVH組和高血壓組均高于對(duì)照組(P<0.05),但LVH組和高血壓組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。LVH組的收縮壓明顯高于高血壓組(P<0.05)。見表2。

表2 3組臨床特征比較

注:與對(duì)照組比較,*P<0.05;與高血壓組比較,△P<0.05

2.2 3組miR-27b的表達(dá) LVH組miR-27b的表達(dá)為2.94(2.34～3.38),明顯高于高血壓組[1.98(1.71～2.51),P<0.05]和對(duì)照組[1.25(0.73～2.11),P<0.01]。

2.3 miR-27b對(duì)老年LVH的診斷意義 miR-27b鑒別老年高血壓病人發(fā)生LVH的ROC曲線下面積(AUC)為0.818,95%CI0.770～0.866(P<0.05);miR-27b診斷的最佳臨界值為2.27,敏感度為79.1%,特異度為70.3%;miR-27b鑒別老年人群發(fā)生LVH的AUC為0.885,95%CI: 0.844～0.926(P<0.05);miR-27b診斷的最佳臨界值為1.98,敏感度為91.0%,特異度為73.0%。見圖1。

注:A:在老年高血壓病人中,應(yīng)用ROC曲線評(píng)價(jià)miR-27b對(duì)LVH的診斷價(jià)值;B:在老年人群中,應(yīng)用ROC曲線評(píng)價(jià)miR-27b對(duì)LVH的診斷價(jià)值圖1 miR-27b診斷LVH的ROC曲線圖

3 討論

心肌肥厚是常見的心血管疾病臨床癥狀,是多種生理和病理因素引起的長期血流動(dòng)力學(xué)改變和神經(jīng)體液因素等綜合作用的結(jié)果。目前已明確心肌肥厚是心力衰竭、腦卒中、冠心病和心源性猝死的重要危險(xiǎn)因素,是引起心血管疾病發(fā)生率和死亡率顯著升高的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,心肌肥厚者發(fā)生心血管事件的概率是無心肌肥厚者的2～4倍[6]。所以及早準(zhǔn)確地診斷心肌肥厚具有非常重要的臨床意義。

目前臨床上診斷心肌肥厚的方法有:心電圖、超聲心動(dòng)圖、CT和MRI等。心電圖診斷心肌肥厚簡單易行,但電壓之高低除受心室肌群的影響外,尚受心外因素如胸壁厚薄、心腔在胸腔的位置、組織導(dǎo)電性能、某些疾病等影響,所以敏感性和特異性差。CT和MRI檢查敏感性和特異性較高,但費(fèi)時(shí)、花費(fèi)大。而且病人在CT檢查時(shí)會(huì)受到X線輻射,故不作為常規(guī)檢查手段。超聲心動(dòng)圖是目前臨床上最常采用的方法，但受儀器的性能和操作者的技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)影響,診斷指標(biāo)的獲得需要病人的基本信息和較復(fù)雜的計(jì)算過程,給臨床診斷帶來了麻煩。因而臨床上需要一種簡單、靈敏度和特異度高的檢查方法。

miRNA是一類19～25個(gè)堿基的內(nèi)源性非編碼RNA,通過識(shí)別靶向mRNA的3’非轉(zhuǎn)錄區(qū),調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后基因沉默,促進(jìn)mRNA降解或抑制其轉(zhuǎn)錄發(fā)揮蛋白水平的調(diào)節(jié)功能。超過三分之一的人類基因都受miRNA的控制。近來研究提示多種miRNA在心肌肥厚發(fā)生發(fā)展的病理生理過程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用,尤其引人關(guān)注的是miR-27b[3-6]。

Jian等[3]研究表明，在敲除Smad4致心肌肥厚小鼠的心肌中miR-27b表達(dá)增加;在體外實(shí)驗(yàn)中miR-27b過表達(dá)能夠促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大,抑制miR-27b的表達(dá)能夠改善去甲腎上腺素所致的心肌細(xì)胞肥大;在體內(nèi)研究中,單純過表達(dá)miR-27b的轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生了心肌肥厚,在壓力過負(fù)荷心衰小鼠模型中,敲除miR-27b即可明顯改善心肌肥厚和心功能不全。其他研究也發(fā)現(xiàn)在壓力過負(fù)荷導(dǎo)致的肥厚心臟心肌組織中miR-27b表達(dá)水平顯著升高[7-8]?？梢妋iR-27b在心肌肥厚發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用,有望成為心肌肥厚診斷和治療的新靶點(diǎn)。

本研究發(fā)現(xiàn)在老年LVH病人中血清miR-27b表達(dá)明顯增高,再次佐證miR-27b可能參與心肌肥厚的發(fā)生和發(fā)展過程。miR-27b用于鑒別老年高血壓病人發(fā)生LVH的ROC曲線下面積為0.818,敏感度79.1%,特異度70.3%;而miR-27b鑒別老年人發(fā)生LVH的ROC曲線下面積為0.885,敏感度達(dá)91.0%,特異度為73.0%。因此,miR-27b可作為臨床篩查老年LVH的新的切入點(diǎn),對(duì)臨床及時(shí)發(fā)現(xiàn)LVH、改善心腦血管疾病預(yù)后有著重要的意義。

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