IL-17啟動子區基因多態性與宮頸鱗狀細胞癌易感性的相關性研究

劉素芹，孟 麗，金 瑋，祁 新，章建國

(1.江蘇省淮安市淮陰醫院婦科 223300；2.南通大學附屬醫院病理科，江蘇南通 226000)

在婦科惡性腫瘤中以宮頸癌最為常見，病因尚未完全明了，90%以上的宮頸癌組織人乳頭狀瘤病毒(HPV)呈陽性[1]，HPV已被認為是宮頸癌及其癌前病變的主要病因，其中高危型HPV持續性感染與宮頸癌的發病密切相關[2]。HPV感染是慢性炎癥過程，在宮頸癌的發生、發展中起重要作用。目前認為宮頸癌是一種炎癥性腫瘤，對宮頸癌的研究多集中在炎癥因子方面。

白細胞介素(IL)-17是一種具有促炎作用的前炎癥細胞因子，與宮頸癌有著非常緊密的關系,IL-17能促進血管生成，加速腫瘤侵襲性及生長速度，同時IL-17 可促進宮頸癌細胞IL-8 和IL-6 的分泌，這兩種白細胞介素均能加速血管生成、促進宮頸腫瘤細胞生長[3]。HPV感染的人群中，宮頸組織內IL-17含量高的也只有部分個體最終會發展為宮頸癌，提示了可能存在個體遺傳易感性因素。機體間炎癥因子差異主要取決于炎癥因子基因多態性，炎癥因子的基因多態性同腫瘤的發生密切相關。本研究采用分子流行病學病例-對照的研究方法，并結合生活習慣、環境危險因素暴露量進行綜合分析，用TaqMan探針法檢測IL-17啟動子區rs2275913(G/A)、rs8193037(G/A)和 rs763780(C/T)基因型,探討其基因多態性與宮頸鱗狀細胞癌易感性的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2012年7月至2015年7月在淮陰醫院就診的宮頸鱗狀細胞癌患者239例為研究組,年齡31～78歲，平均(45.0±9.4)歲，所有病例均經宮頸活檢或手術病理檢查證實。隨機選自同時期在淮陰醫院體檢的且未檢出宮頸病變的健康女性247例為對照組，年齡29～76 歲，平均(44±8.9)歲。兩組年齡分布比較差異無統計學意義(P>0.05)。所有入選對象為漢族，簽署知情同意書，獲得了淮陰醫院醫學倫理委員會的批準。

1.2方法

1.2.1標本收集 用EDTA抗凝管采集外周靜脈血5 mL，在半小時內離心、分裝，置于EP管-20 ℃凍存。

1.2.2DNA的提取 采用沉淀法提取DNA(天根)，吸取500 μL，添加750 μL細胞裂解液(CL)，顛倒混勻 15 次，12 000 r/min離心 2～3 min 棄去上清液，添加500 μL CL渦旋混勻15 s，12 000 r/min離心2～3 min棄去上清液。加入250 μL緩沖液 FG 和蛋白酶 K(100∶1) 的混合液后渦旋混勻，65 ℃水浴15 min，添加 250 μL異丙醇，充分顛倒混勻10 min，12 000 r/min離心倒掉上清液，加入250 μL無水乙醇，12 000 r/min離心棄去上清液，干燥DNA沉淀，加入適量的洗脫緩沖液，低速渦旋5 s，在室溫放置3～4 d，紫外分光光度法測量濃度后置于-20 ℃ 冰箱保存。

1.2.3基因分型 TaqMan方法對IL-17 rs2275913、rs763780和rs8193037進行基因分型。采用 TaqMan?Universal PCR Master Mix和合適濃度的引物及探針進行PCR反應，使用7900FAST 型熒光定量PCR 儀完成目的片段擴增和基因型檢測。

1.3統計學處理 采用SAS9.1.3統計軟件進行分析。計數資料以率表示，采用χ2檢驗進行比較。單因素和多因素Logistic回歸計算比值比(OR)及其95%CI，構建遺傳評價模型，分析各基因型與宮頸鱗狀細胞癌發生危險性的關系，并對各因素進行分層分析。所有的統計檢驗均為雙側檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1研究組與對照組一般資料比較 兩組在年齡構成、吸煙、飲酒及腫瘤家族史方面差異無統計學意義(P>0.05)，在初產年齡構成上的差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 研究組與對照組的一般資料比較[n(%)]

注：-為無數據

2.2rs2275913、rs8193037和rs763780基因型與宮頸鱗狀細胞癌易感性的關聯分析 經多因素Logistic回歸分析，對照組基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P=1.000)。結果顯示：(1)攜帶rs2275913 AG基因型個體宮頸鱗狀細胞癌的風險性為1.11(P>0.05，95%CI：0.74～1.67)。顯性模型中攜帶AG/AA基因型個體患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為1.05(P>0.05，95%CI：0.71～1.55)。相加模型中攜帶A基因型個體患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為0.97(P>0.05，95%CI：0.74～1.25)，rs2275913 基因型與患宮頸鱗狀細胞癌的風險性無相關性。(2)攜帶rs8193037 AG基因型者患宮頸鱗狀細胞癌風險性升高，患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為1.77(P<0.05，95%CI：1.13～2.76)。顯性模型中攜帶AG/AA等位基因型個體患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為1.70(P<0.05，95%CI：1.10～2.63)。相加模型中攜帶A等位基因型個體罹患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為1.55(P<0.05，95%CI：1.03～2.34)。(3)攜帶rs763780 CT基因型者患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為1.05(P>0.05，95%CI：0.65～1.69)。顯性模型中攜帶CT/CC基因型個體患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為0.98(P>0.05，95%CI：0.62～1.56)；相加模型中攜帶C等位基因個體患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為0.92(P>0.05，95%CI：0.60～1.40)，rs763780基因型與患宮頸鱗狀細胞癌的風險性無相關性。見表2。

表2 兩組中各基因型位點的遺傳評價模型的風險性

注：a調整變量年齡后P值

2.3攜帶rs8193037 AG/AA基因型與宮頸鱗狀細胞癌危險性的分層分析 初產年齡≤24歲及年齡> 45歲者攜帶rs8193037 A基因型者患宮頸鱗狀細胞癌的危險性均升高，危險性分別為1.20(P<0.05，95%CI：1.03～1.39)、1.18(P<0.05，95%CI：1.00～1.39)。有吸煙、飲酒和腫瘤家族史者攜帶A基因型罹患宮頸鱗狀細胞癌的危險性無升高，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 攜帶rs8193037 AG/AA與宮頸鱗狀細胞癌危險性分層分析

續表3 攜帶rs8193037 AG/AA與宮頸鱗狀細胞癌危險性分層分析

3 討 論

宮頸癌是發展中國家最常見的惡性腫瘤之一，我國是宮頸癌高發國家，發病高峰年齡為45～55歲，給患者心理帶來巨大壓力以及脫離社會群體的痛苦[4-6]。宮頸癌的發病與高危型HPV持續性感染密切相關，機體在感染HPV后，在宮頸局部組織產生炎性反應，過量的炎癥因子釋放導致局部組織炎性反應性損傷[7]。宮頸癌發生與多種炎癥介質有關,大量研究證實了IL在宮頸癌發生、發展中起重要作用。IL-17主要通過促進前炎性細胞因子的釋放發揮放大炎性反應的作用，在促進細胞增殖、促進多種炎性因子釋放以及中性粒細胞募集等方面均有明顯作用,同時參與機體免疫應答、炎性反應及自身免疫性疾病。IL-17A可以促進宮頸癌細胞的遷移和侵襲，經過治療的宮頸癌患者宮頸脫落細胞中IL-17的水平明顯減少；血清IL-17水平與宮頸癌分化程度呈負相關，腫瘤分化程度越高，水平越低[8-10]。IL-17與宮頸癌的發生、發展有密切聯系。

基因的變化被認為是對環境致癌物易感性的主要決定因素，單核苷酸多態性(SNP)是人類可遺傳的變異中最常見的一種。研究者發現，IL-17基因的多態性與宮頸癌易感性有關，可能在宮頸癌的發病機制中起著重要的作用。QUAN等[11]研究rs2275913 及rs763780，發現rs2275913與宮頸癌易感性相關，患宮頸癌的風險增加相關，也與脈管癌栓陽性及高臨床分期有關。 CONG等[12]研究rs2275913、rs3748067及rs763780與宮頸癌的風險，發現rs2275913多態性可能影響共顯性和顯性模型在宮頸癌的發展，表明IL-17可能參與了宮頸癌的發生、發展。本研究顯示，攜帶rs763780 CT基因型者患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為1.05(P>0.05，95%CI：0.65～1.69)，其相加模型及顯性模型差異無統計學意義(P>0.05)。本研究未發現rs763780基因型與患宮頸鱗狀細胞癌的風險性有顯著性關聯，與上述研究結果一致。攜帶rs2275913 AG基因型個體患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為1.11(P>0.05，95%CI：0.74～1.67),其相加模型及顯性模型差異無統計學意義(P>0.05)。本研究亦未發現rs2275913 基因型與患宮頸鱗狀細胞癌的風險性有明顯相關，與上述研究結果不一致，筆者分析可能其他的遺傳多態性影響了宮頸癌的發展，本研究的樣本數量較小，可能會限制發現兩組之間的差異，也可能與本研究僅選取了宮頸鱗狀細胞癌病例有關。攜帶rs8193037 AG基因型者患宮頸鱗狀細胞癌風險性升高，差異有統計學意義(P<0.05)，患宮頸鱗狀細胞癌的風險性為1.77(P<0.05，95%CI：1.13～2.76)，其相加模型及顯性模型差異有統計學意義(P<0.05)，提示rs8193037(G/A)基因型患宮頸鱗狀細胞癌風險性升高,可能該基因型與宮頸鱗狀細胞癌易感性相關，可能參與了宮頸鱗狀細胞癌的發生、發展過程。

早年分娩、過早性行為、多孕多產、吸煙及多個性伴侶等與宮頸癌發生有關。本研究顯示，研究組初產年齡≤24歲比例為71%，而對照組為54%，兩組人群在初產年齡構成上的差異有統計學意義(P<0.05)，初產年齡小(≤24歲)可能與宮頸鱗狀細胞癌發生相關。女性感染HPV有兩個高峰：年齡<25歲及年齡在55歲或以上，女性生殖道局部和系統隨著年齡增長和性經歷將被致敏并發育成熟，其抗病能力也隨之增強，故而未經致敏年輕婦女易受 HPV感染[13-14]。隨著年齡的增長，以及圍絕經期女性體內雌、孕激素水平下降，女性免疫力逐漸下降，HPV感染率有所升高[15]。筆者分層分析發現：初產年齡≤24歲者攜帶rs8193037A基因型者患宮頸癌的危險性升高，這可能與宮頸受創傷早，免疫系統不成熟，女性處于HPV感染第一高峰及對致癌物易感有關。年齡>45歲者攜帶rs8193037A基因型者患宮頸癌的危險性升高，這可能與免疫力下降及女性處于HPV感染第二高峰有關。

綜上所述，本研究未發現rs2275913和 rs763780基因型與患宮頸鱗狀細胞癌風險性相關，發現攜帶rs8193037 A等位基因型個體患宮頸鱗狀細胞癌風險性升高，其中初產年齡小(≤24歲)及年齡大(>45歲)的個體攜帶rs8193037 A等位基因患宮頸鱗狀細胞癌的危險性升高，提示rs8193037 A等位基因型可能與宮頸鱗狀細胞癌易感性相關，可能參與了宮頸鱗狀細胞癌發生發展過程，但其確切機制尚需進一步研究。本研究樣本數量較小，需要大樣本量進一步研究證實。

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