血清hCAP18對非小細胞肺癌患者的診斷效果

秦 鳳，樊建民

(山東省菏澤市鄆城縣人民醫(yī)院檢驗科 274700)

肺癌是一種發(fā)病率和致死率極高的惡性腫瘤，近年來我國肺癌發(fā)病率逐漸上升，總體發(fā)病率高達0.061%，加上肺癌本身治療的復(fù)雜性和長期性，不論是在我國還是國外，肺癌都是病死率最高的腫瘤之一[1]。非小細胞肺癌(NSCLC)是肺癌的一種常見類型，在肺癌患者中大約80%為NSCLC[2]。NSCLC的種類大致分為鱗癌、大細胞癌和腺癌[3]。抗菌肽人類陽離子抗菌蛋白18(hCAP18)來源于先天性的免疫細胞，可以消滅部分細菌和真菌細胞，hCAP18能夠在肺癌和結(jié)直腸癌等腫瘤中高度表達，并且加速癌細胞的增長。早期的NSCLC會出現(xiàn)發(fā)熱、胸痛、氣促、咳嗽等現(xiàn)象，但是這些癥狀并不明顯，很難判斷其準確率，大多數(shù)患者被發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)進入中后期，這時治療成功率很低，所以，NSCLC的早期診斷對治療該病以及減少病死率有重大作用[4]。NSCLC相比于小細胞肺癌來說，惡性程度較低，因而致死率遠遠低于小細胞肺癌，但是由于早期診斷的困難，依然是醫(yī)學(xué)研究的難題。本研究通過對照，分析hCAP18在NSCLC患者血清中的水平，以及其在輔助診斷、早期診斷和判斷預(yù)后中的價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2014年4 月至2015年6月收治的48例NSCLC患者及48例同期體檢健康者為研究對象。納入標準：(1)患者符合NSCLC病理學(xué)診斷標準；(2)年齡>18歲，性別不限、自愿參與研究者；(3)無嚴重心腦血管及軀體疾病；(4)無精神障礙和交流障礙，能夠配合醫(yī)生研究。排除標準：(1)意識障礙、理解力低下不能進行有效溝通者；(2)肝腎功能障礙、嚴重精神障礙或失語癥狀、不能配合本研究者。本研究的試驗程序已通過地區(qū)倫理學(xué)相關(guān)機構(gòu)的批準。兩組研究對象基本資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1分組方法 將48例NSCLC患者作為觀察組，48例同期體檢健康者作為對照組。觀察組中男21例、女27例，年齡30～79歲、平均(48±5)歲；對照組中男21例、女27例，年齡32～80歲、平均(52±7)歲。

1.2.2研究方法 在早晨分別空腹采集對照組及觀察組術(shù)前和術(shù)后30 d靜脈血5 mL，借助離心直徑為24 cm，轉(zhuǎn)速為3 000 r/min的儀器離心10 min來提取血清，將提取后的血清放置于-80 ℃的低溫下進行保存。對治療后的觀察組患者進行隨訪，采用電話、住院或者門診觀察的方式來訪查，隨訪時間為兩年，頻率為每月1次。通過觀察CT圖像，分析腫瘤標志物和病理特征情況來判斷腫瘤復(fù)發(fā)狀況。

1.2.3試劑與儀器 hCAP18酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒采購于杭州恒奧專業(yè)檢測卡研發(fā)公司，Bio-Rad680酶標儀采購于海甘薇生物科技有限公司，自動洗板機使用北京譽朗諾科技有限公司AT-828自動酶標洗板機。細胞角蛋白19(CyFRA21-1)檢測采用德國Roche公司的e601電化學(xué)發(fā)光儀及配套的試劑盒,癌胚抗原(CEA)ELISA試劑盒采購于北京華美生物工程有限公司。

1.2.4檢測方法 血清hCAP18檢測：hCAP18抗體包被微孔板分別加標準品、空白對照、各組等待檢測的血清各100 μL,在恒溫37 ℃下孵育60 min。通過自動洗板機進行洗滌，洗滌3次之后在微孔板加入酶標二抗100 μL，在恒溫37 ℃下孵育30 min。通過自動洗板機進行洗滌，洗滌3次，在微孔中加入底物90 μL，放置在陰暗處，在恒溫37 ℃下孵育15 min，最后加入終止液50 μL，將檢測物放于450 nm波長下進行檢測[5]。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者hCAP18指數(shù)比較 觀察組患者血清hCAP18水平明顯高于對照組，但低于術(shù)后，兩組患者血清hCAP18水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者血清hCAP18水平比較

2.2不同腫瘤標志物對NSCLC檢測的靈敏度和特異度比較 血清hCAP18對于NSCLC檢測的靈敏度和特異度明顯高于其他兩種腫瘤標志物，三者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 血清hCAP18、CEA、CyFRA21-1對NSCLC檢測的靈敏度和特異度[n(%)，n=48]

2.3血清不同hCAP18水平NSCLC患者術(shù)后復(fù)發(fā)率比較 術(shù)后血清中hCAP18≤(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者復(fù)發(fā)率明顯低于hCAP18>(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 血清中不同水平hCAP18復(fù)發(fā)率比較

2.4血清中不同hCAP18水平NSCLC患者預(yù)后評估 隨訪2年后，術(shù)后血清中hCAP18≤(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者復(fù)發(fā)率和變化明顯低于血清中hCAP18>(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者，其復(fù)發(fā)情況差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

圖1 血清hCAP18檢測對NSCLC患者預(yù)后分析

3 討 論

目前，對于肺癌的檢測手段，最常見的是CT、X線片及各類支氣管鏡和痰脫落細胞檢查，然而，胸片類檢測在NSCLC的診斷中靈敏性較差，至于支氣管鏡類檢查則是侵入性方式，對患者身體有所損害[6]。CT檢查的靈敏性高，但正是因為其過高的靈敏性反而更容易引起假陽性的結(jié)果。有研究提出，采用更少劑量的螺旋CT來作為診斷肺癌的常用手段，但這種方式尚處于研究階段，不夠成熟。同時，利用腫瘤標志物對NSCLC進行輔助診斷、早期診斷、預(yù)后判斷和療效監(jiān)測具有更高的使用價值，但是現(xiàn)在比較常用的腫瘤標志物如CEA、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、CyFRA21-1、鱗狀細胞癌抗原(SCC)、糖類抗原125(CA125)等在肺癌的各種診斷中尚存在不足，對于NSCLC的檢測存在局限性[7]。所以，找到新型且具有更高靈敏度和特異度的腫瘤標志物是當(dāng)今臨床醫(yī)學(xué)所急需的。

hCAP18來源于免疫細胞自身分泌的一種肽，據(jù)相關(guān)研究指出，hCAP18能夠在肺癌中具備較高的表達性，加速人體內(nèi)癌細胞的增加[8]。陽離子抗菌肽作用機制多種多樣，即使細胞膜孔不完全，陽離子抗菌肽也能發(fā)揮作用。陽離子抗菌肽能夠讓細菌的細胞膜自身的滲透性增強，從而發(fā)揮增殖癌細胞的作用。陽離子抗菌肽對溫度具有較高的抵抗性，很容易與水相融，并且能夠殺死細菌，對病毒原體、各類真菌具有高殺傷力，抗菌肽人類陽離子抗菌蛋白對人體的常規(guī)細胞不會造成損傷，基本不會出現(xiàn)耐藥菌株[9]。陽離子抗菌肽能夠借助人體的靜電作用來穿過細胞膜孔，促成離子通道的出現(xiàn)，導(dǎo)致人體內(nèi)的水溶性物質(zhì)溢出細胞，促使人體三磷酸腺苷的水平減少，進而阻礙細胞的正常呼吸，從而殺死細菌[10]。因為人體的真核細胞膜上存在豐富的膽固醇，能夠讓細胞膜的穩(wěn)定性大幅度提高，因此hCAP18不會溶解細胞的外膜，也就不會損害人體的真核細胞。

相關(guān)研究指出，hCAP18在人體肺癌細胞中高度的表達，能夠促進癌細胞的不斷增加和移動。hCAP18具備組織結(jié)構(gòu)的特異屬性，當(dāng)hCAP18具備外源性和內(nèi)源性的高度表達性時，它就能促進肺癌細胞的迅速增加，hCAP18的主要來源是肺癌細胞和其他的炎癥性細胞群。hCAP18能夠通過多種途徑加速癌細胞的增殖，它能促使人體內(nèi)癌細胞Wnt/β-catenin的蘇醒，以及借助其他方式來為癌細胞創(chuàng)造適合腫瘤生存增長的微環(huán)境。本研究通過對比NSCLC患者和健康體檢者血清hCAP18水平，發(fā)現(xiàn)NSCLC患者血清hCAP18明顯高于對照組。同時，通過對NSCLC患者手術(shù)前后血清中hCAP18水平分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤切除后患者血清hCAP18水平為(423.5±37.6)μg/L，明顯低于術(shù)前的(6 823.0±751.8)μg/L。當(dāng)hCAP18水平增加時，能夠通過激活Wnt/β-catenin來為癌細胞創(chuàng)造出適合其迅速增長的微環(huán)境，增強細胞膜的滲透作用，促進炎性反應(yīng)的發(fā)生，進而召集炎性細胞因子，對腫瘤微環(huán)境中相應(yīng)的血管生成，實現(xiàn)對癌細胞的增殖，而癌細胞的增加也為hCAP18的轉(zhuǎn)化增生提供了條件，兩者存在互利共生關(guān)系，一者的上升或下降會影響另一者的數(shù)量水平。

hCAP18主要來源于巨噬細胞等炎癥免疫細胞，而這些細胞可以產(chǎn)生炎癥因子，從而推動腫瘤的生成[11]。NSCLC患者體內(nèi)癌細胞分泌的硫酸軟骨素蛋白聚糖能夠使巨噬細胞蘇醒，借助TLR2信號途徑實現(xiàn)對巨噬細胞內(nèi)hCAP18基因的轉(zhuǎn)錄表達，之后在癌細胞的微環(huán)境中出現(xiàn)，當(dāng)肺癌細胞出現(xiàn)時，炎癥細胞能夠使hCAP18高度表達，從而顯示出更高的靈敏性[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，血清hCAP18檢測的NSCLC靈敏度為93.75%，特異度為95.83%，相比于診斷肺癌常用的CEA和CyFRA21-1來說，靈敏度和特異度更高，說明血清hCAP18對于檢測肺癌具有較好的診斷價值。借助對術(shù)后的NSCLC患者進行為期2年的隨訪觀察，發(fā)現(xiàn)血清hCAP18≤(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者的復(fù)發(fā)率為12.5%(4/32),而血清hCAP18>(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者的復(fù)發(fā)率為50.0%(8/16)，低水平的NSCLC患者復(fù)發(fā)率和病情變化明顯低于高水平的NSCLC患者，說明檢測hCAP18水平改變有助于在肺癌術(shù)后病理情況的監(jiān)測和預(yù)后分析。

綜上所述，血清hCAP18檢測對NSCLC的輔助診斷具有良好的靈敏度和特異度，對于NSCLC的輔助診斷和早期診斷有一定的臨床應(yīng)用價值。

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