共聚焦激光顯微鏡掃描在面部毛囊蠕形螨檢測中的應用

吳曹英 鄒云敏 于世榮 張德志 康曉靜

共聚焦激光顯微鏡(confocal laser scanning microscopy，簡稱CLSM)是一種新的皮膚成像技術，因其具有實時性、無創性、可重復性、高分辨率等特點，國內外學者利用CLSM對皮膚色素障礙性皮膚病[1]、皮膚腫瘤[2]、炎癥性疾病[3]等多種疾病進行觀察，并且對某些疾病治療前后進行對比療效觀察[4]，目前已廣泛應用于臨床皮膚科的檢測中。毛囊蠕形螨又稱毛囊螨、螨蟲、毛囊蟲，常棲居在人的毛囊及皮脂腺，多在面部，尤其是皮脂腺分泌旺盛的部位，如鼻部、頰部、額部、下頜等。少數的蟲體感染并不引起癥狀。但由于其蟲體繁殖快，自身代謝產物及蟲體崩解物刺激可引起局部炎癥反應，導致多種面部皮膚病的發生，如酒渣鼻樣皮炎、痤瘡等。在CLSM中蠕形螨表現為毛囊漏斗部環狀結構(蠕形螨的橫斷面)[5]。Sattler首先將CLSM用于毛囊蠕形螨的檢測和計數[6]，并對酒渣鼻患者和正常人群面部蠕形螨計數進行比較，提示酒渣鼻患者面部蠕形螨數量明顯高于正常人群。但并未將CLSM檢測結果與鏡檢結果相比較。直接鏡檢觀察到蟲體是檢測毛囊蟲的金標準，但檢測多個部位過程繁瑣，且不能清晰地觀察每個毛囊的感染情況，故本研究將直接鏡檢結果與CLSM結果相比較，以期觀察CLSM在面部蠕形螨檢測中的優勢。

1 對象與方法

1.1 對象 選取近4個月就診于我院門診的患者180例，其中男29例，女151例，年齡15～80歲，平均(38±13.18)歲；漢族110例，維吾爾族45例，回族17例，哈薩克族8例。臨床考慮酒渣鼻樣皮炎93例，痤瘡56例，脂溢性皮炎31例。

1.2 方法 分別于兩側鼻翼旁、鼻尖部、下頜部、額部共五個部位進行CLSM檢查，每個部位進行一個4×4 mm Block掃描(約30～100個毛囊，平均51個毛囊)，觀察受累及的毛囊數目。并記錄毛囊蠕形螨的數量，每個毛囊≥4只以上記錄為強陽性，1～3只記錄為陽性。這些患者24小時不洗臉不外用護膚產品，帶清潔手套擠壓鼻翼兩側皮膚，取擠壓出的分泌物置于載玻片上，滴石蠟油后直接顯微鏡下觀察，記錄陽性結果。

1.3 檢測指標 CLSM蠕形螨陽性表現為：在擴張的毛囊內有一個或多個環形、橢圓形、錐形灰色或高折光結構，周圍有透明環(圖1)。鏡檢陽性：視野下可見一個或多個蠕形螨蟲體(圖2)。

1.4 統計學方法 采用SPSS 11.0統計軟件進行分析，采用卡方檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

圖1 蠕形螨在CLSM檢查中呈多種形態表現，紅色數字標記個數

圖2 鏡檢螨蟲陽性可直接觀察蠕形螨蟲

2 結果

180例患者中CLSM蠕形螨檢測陽性124例，其中強陽性38例(21%)。見表1。

表1 兩種檢測方法的陽性結果比較

注：兩種方法比較，χ2=3.9，P<0.05

4 討論

幾乎所有人面部都存在蠕形螨，健康人皮膚表面蠕形螨≤5個/cm2。少量蠕形螨并不會引起臨床癥狀，但當人們發生面部疾病，同時又鏡檢出蠕形螨，往往會將兩者聯系起來，但此時的蠕形螨是正常寄生還是致病原因就容易混淆。傳統的檢測方法是直接鏡檢，而且陽性率不低，但是這個結果并不能告知我們螨蟲的感染程度及毛囊的受累情況。

在本研究中，對面部蠕形螨多發部位如額部、兩側鼻翼旁、下頜、鼻部進行多點檢測，并每個點掃描4 mm×4 mm Block，可同時觀察到多個毛囊的受累情況，并同時記錄毛囊蠕形螨的計數(取數量最多者記錄)，其陽性率明顯高于鏡檢取材結果。但由于直接鏡檢多點取材觀察結果記錄較繁瑣，且蠕形螨數量并不能反映每個毛囊的感染情況，故無法進行陽性、強陽性分組。這很好的說明了CLSM能簡便直觀的觀察毛囊蠕形螨這一特點。不過沒有哪一項研究明確表明單位面積蠕形螨達到某一確定數量會引起皮膚疾病，本研究中人為的將CLSM檢測結果分為陽性、強陽性，其目的在于提示CLSM在蠕形螨的檢測中有更清晰、可計數的優勢。而蠕形螨計數呈強陽性是否會導致面部疾病，則需要更多的臨床數據支持。

另外CLSM還能監測蠕形螨的治療效果。有研究[7]對8例患者治療前后進行CLSM檢測，治療前均有10%以上毛囊感染，治療后有50%患者癥狀改善且蠕形螨檢測完全消失，癥狀未改善的病例蠕形螨也沒有消失。他們認為直接鏡檢陰性而CLSM陽性的病例可能是蠕形螨的數量較少或需要多點取材，而CLSM無論蠕形螨多少，可以直觀的觀察到,并且可以多點重復檢查，減少漏診。不過也有學者提出[8]，CLSM只能觀察毛囊漏斗表面200～300 μm的范圍，更深的蠕形螨CLSM無法觀察，而且直接鏡檢蠕形螨已經實行數十年，技術成熟，易操作，而CLSM儀器昂貴，檢查費用相對較高。但是CLSM以一種新的蠕形螨檢查方法，且較直接鏡檢更敏感，同時具有無創性、可重復性、可計數等優勢，可廣泛運用于臨床檢驗中。

[1] Xiang WZ, Xu AE, Xu I.The application of dermal papillary rings in dermatology by in vivo confocal laser scanning microscopy[J].Laser Physics,2010,20(8):1767-1773.

[2] Eicherl S, Mohtie M, Breuninger H,et al.Diagnosis of cutaneous tumors with in vivo confocal laser scanning microscopy[J].Dtsch Dermatol Ges,2010,8(6):400-410.

[3] 林燕，劉華緒，張福仁.共聚焦激光掃描顯微鏡在皮膚科的應用[J].中國中西醫結合皮膚性病學雜志，2014,13(3)：198-201.

[4] 張靜,徐麗敏,梁淑靜,等.尋常性銀屑病局部治療前后共聚焦激光掃描顯微鏡觀察[J].臨床皮膚科雜志,2011,40(3):147-149.

[5] 劉華緒,林燕,于世榮,等.反射式共聚焦顯微鏡皮膚病圖譜[M].人民衛生出版社,2013.31.

[6] Sattler EC, Maier T, Hoffmann VS, et al.Noninvasive in vivo detection and quantification of demodex mites by confocal laser scanning microscopy[J].Br J Dermatol,2013,169(1):213-215.

[7] 孫瑞鳳.共聚焦激光顯微鏡在毛囊蠕形螨病診斷和治療監測方面的優勢[J].實用皮膚性病學雜志，2013，4：255-256.

[8] Lacey N, Forton FMN, Powell FC.Demodex quantification methods:limitations of confocal laser scanning microscopy[J].Br J Dermatol，2013，3：168-212.