川崎病患兒體內(nèi)中性粒細胞CD64表達水平的變化及臨床意義

高文珺

川崎病(Kawasaki disease，KD)是一種全身性、免疫性血管炎，主要見于5歲以下的兒童。目前，KD的發(fā)病機制尚不明確，可能與細菌等病原體感染所致超抗原引起的免疫反應(yīng)有關(guān)[1-3]。臨床常用白細胞計數(shù)(leukocyte count，WBC)、中性粒細胞百分比(percentage of neutrophils，Neu%)、C反應(yīng)蛋白(C reactive protein，CRP)、降鈣素原(procalcitonin，PCT)等水平判斷患者是否有細菌感染，但特異性不高。多項研究[4-6]證實，中性粒細胞CD64是診斷細菌感染的敏感指標，但關(guān)于KD患兒體內(nèi)中性粒細胞CD64表達水平的研究較少。本研究通過檢測KD患兒體內(nèi)中性粒細胞CD64的水平，擬探討其在KD患兒體內(nèi)表達水平的變化及臨床意義。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2016年6月至2017年6月安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院兒科住院的初診KD患兒為研究對象。納入標準：①診斷符合美國心臟協(xié)會KD指南[7]；②初次發(fā)病，患兒既往無KD史及其他風濕免疫系統(tǒng)疾病史；③入院前未行靜脈用丙種球蛋白和激素治療。根據(jù)指南，將KD患兒分為典型KD組(n=38)和不典型KD組(n=25)。選取同期于安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院體檢健康兒童15例作為對照組，入選標準：①與KD患兒同期且年齡、性別構(gòu)成相匹配；②近期無急性感染史，且無基礎(chǔ)疾病史。根據(jù)指南[7]，典型KD診斷標準：發(fā)熱>5 d，排除其他疾病，同時至少滿足以下5項中的4項：①急性期掌跖紅斑，手足硬腫，恢復(fù)期指(趾)端蛻皮；②多形性皮疹；③雙側(cè)球結(jié)膜非化膿性充血；④口唇潮紅皸裂，口腔彌漫充血，草莓舌；⑤頸部淋巴結(jié)腫大(直徑>1.5 cm)；如未能滿足4項，但超聲心動圖有冠狀動脈損害，也可確診。不典型KD診斷標準：如不滿足以上5項中的4項，但疾病發(fā)展符合KD的特點，并排除其他疾病，可診斷為不典型KD。KD患兒共63例，男性42例，女性21例，年齡0.2～9歲，平均(2.81±2.35)歲。典型KD組38例，男性27例，女性11例，平均年齡(2.91±2.71)歲；不典型KD組25例，男性15例，女性10例，平均年齡(2.64±1.70)歲。對照組15例，男性7例，女性8例，年齡0.17～7歲，平均(2.69±2.48)歲。KD組與對照組對象年齡、性別比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 檢測指標 KD患兒靜脈血均于入院第2天晨起采集。檢測方法：用流式細胞術(shù)檢測中性粒細胞CD64(以%表示)，流式細胞儀及配套試劑購自美國Beckman Coulter公司(型號：FC 5000)，標準配套試劑為CD64- FITC；紅細胞裂解液購自北京Solarbio公司(貨號：R1010)；磷酸鹽緩沖液購自美國Hyclone公司(貨號：SH30256.01)。①取1支流式管，加入CD64-FITC試劑10 μL及100 μL抗凝全血，混勻后避光保存20 min，加入2 mL紅細胞裂解液，混勻避光10 min，1 500 r/min離心5 min后棄上清，加入2 mL磷酸鹽緩沖液混勻，1 500 r/min離心5 min后棄上清，加入500 μL 磷酸鹽緩沖液置于流式細胞儀上檢測。②取4.0 mL血促凝，免疫比濁法檢測CRP、PCT水平。③留取血標本檢測所有研究對象血常規(guī)。所有檢測項目均按儀器和試劑的說明書進行，且室內(nèi)質(zhì)控在控。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計分析，符合正態(tài)分布的計量資料以x±s表示，均數(shù)比較采用兩獨立樣本t檢驗，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析；非正態(tài)分布的計量資料用M(P25，P75)表示，比較采用秩和檢驗。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。同時，繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線)，確定CD64的截斷值，計算CD64輔助判斷KD患兒合并細菌感染的敏感性和特異性，并對CD64與WBC、Neu%、CRP、PCT行相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 KD組治療前與對照組相關(guān)指標比較 KD組WBC、Neu%、CRP、PCT、CD64水平與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 治療前KD組與健康對照組對象WBC、Neu%、CRP、PCT、CD64水平比較

2.2 典型KD組和不典型KD組治療前相關(guān)指標比較 治療前，典型KD組與不典型KD組WBC、Neu%、CRP、PCT、CD64水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 典型KD組與不典型KD組對象治療前WBC、Neu%、CRP、PCT、CD64水平比較

2.3 WBC、Neu%、CRP、PCT水平與CD64的相關(guān)性分析 CD64與WBC、Neu%、CRP均無相關(guān)性(r=0.108，P=0.401；r=0.159，P=0.214；r=0.067，P=0.604)，與PCT呈正相關(guān)(r=0.445，P<0.001)。

2.4 CD64水平對細菌感染預(yù)測的敏感度和特異度 以ROC曲線計算得出曲線下面積為0.936，根據(jù)約登指數(shù)最大時確定CD64判斷KD合并細菌感染的截斷值為37.5%，敏感度為86.0%，特異度為100%。

3 討論

KD自1967年在日本首次被報道以來，有超過60多個國家及地區(qū)報道了該病的發(fā)生，已成為兒童后天性心臟病的最常見原因[8]。由于病因未明，KD的診斷主要依據(jù)臨床癥狀，但其癥狀和許多感染癥狀相似，因此，在發(fā)病初期需鑒別是否合并細菌感染。臨床常用的炎癥相關(guān)指標如WBC、Neu%、CRP等缺乏特異性，在應(yīng)激、創(chuàng)傷及免疫性疾病中均可有不同程度的升高。PCT是診斷細菌感染的敏感指標，但敏感性有一定限制。許多研究[9-12]表明，在全身炎癥反應(yīng)綜合征、膿毒血癥等重癥全身性感染時，PCT明顯升高，但在局部細菌感染時，關(guān)于其表達水平變化的研究較少，臨床上關(guān)于PCT輕度升高無明顯指導意義。CD64是能識別免疫球蛋白、介導體液免疫和細胞免疫的IgG Fc段受體I(FcγRI)。正常情況下，CD64主要分布于抗原提呈細胞表面，在中性粒細胞表面幾乎不表達；當機體受到細菌感染時，在γ干擾素和中性粒細胞集落刺激因子的刺激下大量表達，4～6 h內(nèi)水平即可升高[13-14]。有學者[4]通過meta分析發(fā)現(xiàn)，中性粒細胞CD64可作為早期細菌感染的指標。Matsui等[15]發(fā)現(xiàn)，CD64還具有不受皮質(zhì)激素、生物制劑影響的優(yōu)點。

本研究結(jié)果顯示，KD組中性粒細胞CD64的表達水平高于對照組，考慮患兒可能合并細菌感染，但典型KD組與不典型KD組中性粒細胞CD64表達水平無明顯差異。典型KD與不典型KD的發(fā)病機制相同，均為免疫性血管炎，所以KD組內(nèi)中性粒細胞CD64表達水平無明顯差異。中性粒細胞CD64水平與炎癥指標WBC、Neu%、CRP無相關(guān)性，分析原因可能是WBC、Neu%、CRP為非特異性指標，在細菌感染及自身免疫性疾病如幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡中均可明顯升高，故在免疫性疾病中無法作為判斷合并細菌感染的指標，也不能直觀反映細菌感染的嚴重程度。Allen等[16]通過對比自身免疫性疾病患者活動期、非活動期、細菌感染組及非炎癥性疾病對照組中性粒細胞CD64表達水平發(fā)現(xiàn)，細菌感染組CD64水平較其他幾組明顯升高，自身免疫性疾病患者活動期、非活動期及對照組的CD64水平基本無表達。由此可見，CD64在免疫性疾病中升高不明顯，所以與WBC、Neu%、CRP這些非特異性指標無相關(guān)性。其次，KD患兒的PCT與CD64有相關(guān)性。中性粒細胞CD64在細菌感染的早期，表達水平明顯升高[13-14]，可在KD的初期用于判斷有無合并細菌感染。同時，本研究由于樣本量較少，并發(fā)冠脈損害的病例較少，未行相關(guān)分析，有待在今后的工作中擴大樣本量進行更深層次的研究。

中性粒細胞CD64現(xiàn)已作為公認的細菌感染的敏感指標，在自身免疫性疾病中判斷細菌感染的敏感性明顯高于WBC、Neu%、CRP等非特異性指標。通過檢測KD患兒早期體內(nèi)中性粒細胞CD64表達水平，可輔助診斷是否合并細菌感染，進而指導臨床合理使用抗菌藥物。

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