BIOSYSTEM BA400全自動特定蛋白儀檢測尿微量白蛋白的性能測定

劉斌，王勇，張炳昌，欒芳

山東大學附屬省立醫院 a.醫學工程部；b.臨床醫學檢驗部，山東 濟南 250021

引言

尿微量白蛋白是由肝臟產合成的帶負電荷的中分子蛋白質，分子量約為69 kD，正常生理情況下僅有很少量白蛋白通過腎小球濾過屏障，其中95%會被近曲小管重吸收入血。健康人每升尿液中白蛋白含量不超過20 mg，24 h尿液中白蛋白含量不超過30 mg，因此得名“尿微量白蛋白”。任何能夠引起腎小球基膜通透性增高的疾病，均可導致白蛋白通過腎小球進入尿液中，尿中出現微量白蛋白預示腎小球的早期病變[1]。因此，尿微量白蛋白是腎臟早期損害的標志蛋白，是腎臟病早期篩查和診斷的重要指標[2-3]。尿微量白蛋白病理性增高常見于糖尿病腎病、高血壓腎病、妊娠子癇前期等[4-6]；也可見于全身性或局部炎癥反應導致的腎功能異?；颊撸缒蚵犯腥疽鸬哪I臟早期病變、類風濕性關節炎的并發癥[3,7]，以及服用對腎功能有影響的藥物患者[8-10]。因此，尿微量白蛋白可用于（小兒）腎內科、（小兒）內分泌科、心內科、產科等對早期腎臟疾病的篩查，篩查對象包括成人、兒童及孕婦。

分析尿液中的微量白蛋白在臨床已經得到廣泛應用。隨著全自動特定蛋白儀的發展和應用，尿微量白蛋白的快速定量檢測也進入了一個新階段，能為臨床醫師輔助診斷提供快速、準確的檢測結果。我院自2017年4月引入一臺BIOSYSTEM BA400全自動特定蛋白儀（以下簡稱“BA400特定蛋白儀”），可定量檢測尿液中的微量白蛋白和其他生化指標。本文對BA400特定蛋白儀檢測尿微量白蛋白的準確度、精密度、線性范圍、可報告范圍、參考區間和攜帶污染率做了研究評價，取得了良好效果，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本

病人標本來自本院2017年4月份腎內科住院患者，20例健康人標本來自本院2017年4月份在健康體檢中心體檢的健康人，排除高血壓、腎病、糖尿病等疾病。標本均為清晨中段尿10 mL，離心后取上清于2 h內在BA400特定蛋白儀上檢測。

1.2 儀器及試劑

BA400特定蛋白儀（Spain Biostec），重慶市博士泰生物技術有限公司生產的尿微量白蛋白試劑盒及配套質控品、校準品，免疫比濁法檢測。

1.3 方法

1.3.1 準確度驗證

依據WS/T420-2013，檢測尿微量白蛋白試劑盒配套校準品（校準品可溯源至ERM-DA470K/IFCC）10次，計算10次連續測定結果的均值，與理論值的偏差應小于實際說明書范圍10%。

1.3.2 精密度驗證

（1）批內精密度：依據WS/T420-2013和CLSI EP5-A2文件[11-12]，取尿微量白蛋白試劑盒配套高、低值質控品各1份，連續檢測20次，計算均數±標準差（M±SD）及變異系數（Coefficient of Variation，CV)。與說明書參考值≤7%作對照。

（2）批間精密度：依據WS/T 420-2013和CLSI EP5-A2文件[11-12]，取尿微量白蛋白試劑盒配套高、低值質控品各1份，連續檢測20天，計算M±SD及CV。與說明書參考值≤10%作對照。

1.3.3 線性范圍驗證

依據WS/T420-2013和CLSI EP6-A文件[11,13]，選取濃度為865.2 mg/L的高值標本（H）、濃度為0 mg/L的低值標本（L）各一份，按高低比例1:4、2:3、3:2、4:1混勻，測定每份標本分析物濃度2次取平均值作為實測值，利用統計分析軟件以實測值為y、理論值為x擬合方程，評估尿微量白蛋白在5.0～800.0 mg/L范圍內的檢測是否呈線性。結果判斷：曲線回歸系數R2＞0.995。

1.3.4 可報告范圍驗證

選取濃度在接近線性的標本按照1:5、1:10、1:15、1:20、1:25的比例稀釋，每個濃度檢測2次，統計均值與理論值比較，以80%≤R≤120%定位可接受范圍。

1.3.5 參考區間驗證

從本院健康體檢中心收集健康人尿液標本20例，其中男性11例，女性9例，年齡范圍18～57歲，平均年齡（36.55±11.20）歲。檢測結果需在廠家說明書規定的參考值范圍＜20 mg/L的符合率應大于95%。

1.3.6 攜帶污染率

取高值標本（H）和低值標本（L），連續檢測3次高值H1、H2、H3，再連續檢測3次低值L1、L2、L3，計算攜帶污染率（%）=（L1-L3）/（H3-L3）×100%。

1.4 統計學分析

采用Graphpad Prism 5軟件對數據進行統計學分析和作圖。均數采用M±SD表示，兩變量相關性作直線相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 準確度

可溯源至ERM-DA470K/IFCC的校準品連續測定10次，測試值分別為 14.3、13.6、12.3、13.4、11.7、12.0、12.2、13.0、11.2 、12.3 mg/L，計算均值為12.6 mg/L，理論值為12.0 mg/L，偏差＜10%，符合要求。

2.2 精密度

2.2.1 批內精密度

試劑盒配套高、低值質控品分別連續檢測20次，變異系數CV分別為4.0%和2.0%，均小于7%，符合要求，具體見圖1和表1。

圖1 BA400特定蛋白儀測定尿微量白蛋白的批內精密度結果展示

表1 BA400特定蛋白儀測定尿微量白蛋白的批內精密度數據分析

2.2.2 批間精密度

每日測試試劑盒配套高、低值質控品，連續檢測20天，變異系數CV分別為4.8%和3.5%，均小于10%，符合要求，具體見圖2和表2。

2.3 線性范圍

以尿微量白蛋白理論值（不同稀釋度）為x軸，實測均值為y軸，得出回歸方程為y=1.007x+18.19（R2=0.9973），顯示線性良好，估算線性范圍在0～800.0 mg/L范圍內，大于試劑盒說明書規定的5.0～800.0 mg/L，符合要求。線性檢測情況見圖3和表3。

圖2 BA400特定蛋白儀測定尿微量白蛋白的批間精密度數據展示

表2 BA400特定蛋白儀測定尿微量白蛋白的批間精密度結果分析

圖3 BA400特定蛋白儀測定尿微量白蛋白的線性范圍驗證

表3 BA400特定蛋白儀測定尿微量白蛋白的線性范圍驗證（mg/L）

2.4 可報告范圍

通過驗證，1:25的比例稀釋標本時超過可接受范圍80%≤R≤120%，故尿微量白蛋白的最大稀釋倍數為1:20。由于尿微量白蛋白的檢測線性范圍是5.0～800.0 mg/L，所以尿微量白蛋白的臨床可報告范圍為5.0～16000 mg/L（表4）。

2.5 參考區間

20例健康人尿微量白蛋白的檢測結果分別為： 5.0、9.1、2.1、2.0、1.0、2.8、10.2、4.0、11.8、1.1、1.0、9.3、12.9、2.1、9.6、1.9、2.7、13.6、5.0、6.8 mg/L，均 ＜20 mg/L，符合率100%。

2.6 攜帶污染

3次高值標本連續檢測結果分別為944.8、930.0、951.4 mg/L，3次低值標本連續檢測結果分別為1.0、2.0、2.1 mg/L。攜帶污染率為0.12%。

3 討論

傳統的尿微量白蛋白檢測采用試紙條定性檢測法，BIOSYSTEM BA400全自動特定蛋白儀是西班牙BioSystem公司繼BA15、BA25推出的改良型全自動特定蛋白儀，可以對尿微量白蛋白及尿液其他生化指標進行定量檢測。與同類蛋白分析儀比較，其檢測優勢包括以下幾方面：第一，檢測速度可達400測試/小時，是目前國內出現的檢測速度最快的特定蛋白分析儀；第二，采用專為免疫比濁檢測設計和改良的光學系統（專利號ZL201080017510.X），極大提升檢測靈敏度；第三，主、副光路同時檢測，提高了檢測系統的穩定性，使小分子、低濃度物質的檢測結果更準確；第四，對濃度過高和過低的樣本，可自定義濃縮和稀釋倍數進行自動稀釋。

本文研究顯示，BA400特定蛋白儀檢測尿微量白蛋白批內、批間檢測精密度CV均在5%以內，檢測結果符合相關規定要求。線性范圍分析顯示，BA400特定蛋白儀尿微量白蛋白檢測線性范圍為0～800.0 mg/L，基本上能滿足日常檢測需要。經驗證尿微量白蛋白的最大稀釋倍數為1:20，臨床可報告范圍為5.0～16000 mg/L。對于內分泌科等較高濃度尿液標本，BA400特定蛋白儀會自動稀釋20倍進行檢測，滿足高濃度標本檢測需要。健康人尿液標本檢測尿微量白蛋白驗證顯示均符合＜20 mg/L的正常值范圍。攜帶污染率檢測結果顯示，BA400特定蛋白儀完全能滿足臨床要求。

目前，很多醫院檢驗科在生化分析儀上進行特定蛋白項目檢測。由于特定蛋白項目常規檢測原理為抗原—抗體反應的免疫比濁方法，極易產生鉤狀效應和交叉污染，所以生化儀檢測特定蛋白效果很不理想，而且其他生化項目的檢測也會受到干擾[14-17]；特定蛋白檢測試劑成分中的抗原、抗體極易附著于比色杯，很難徹底清洗，相比生化儀價格高昂的比色杯，BA400特定蛋白儀可以定期更換比色盤；此外，配套試劑為國內生產。權衡檢測成本和準確性，BA400特定蛋白儀對特定蛋白的檢測要優于生化分析儀。

表4 BA400特定蛋白儀測定尿微量白蛋白的可報告范圍驗證

本研究結束后，我們后續將對反映腎小球病變的尿轉鐵蛋白和尿免疫球蛋白G、反映腎小管病變的尿視黃醇結合蛋白、尿β2微球蛋白、尿胱抑素等其他生化指標在BIOSYSTEM BA400全自動特定蛋白儀上進行檢測性能評價，使其更好地滿足臨床檢測需求。

4 結論

BA400特定蛋白儀測定尿微量白蛋白，具有快速簡便、重復性好、攜帶污染率低等優點，適合臨床大批量尿微量白蛋白標本的檢測。適合（小兒）腎內科、（小兒）內分泌科、心內科、產科等科室對成人、兒童及孕婦早期腎臟疾病的篩查。

[參考文獻]

[1] 唐文佳,吳炯,郭瑋,等.尿白蛋白檢測及其臨床應用[J].檢驗醫學雜志,2014,37(6):420-424.

[2] Halimi JM,Hadjadj S,Aboyans V,et al.Microalbuminuria and urinary albumin excretion: clinical practice guidelines[J].Nephrol Ther,2007,3(6):384-391.

[3] Chatzikyrkou C,Menne J,Izzo J,et al.Predictors for the development of microalbuminuria and interaction with renal function[J].J Hypertens,2017,35(12):2501-2509.

[4] Ahmad T,Ulhaq I,Mawani M,et al.Microalbuminuria in type-2 diabetes mellitus; the tip of iceberg of diabetic complications[J].Pak J Med Sci,2017,33(3):519-523.

[5] 朱航,薛浩,王廣義,等.高血壓患者尿微量白蛋白肌酐比值與脈搏波傳導速度的關聯研究[J].中華心血管病雜志,2015,43(4):308-311.

[6] Babu RP,Christy A,Hegde A,et al.Microalbuminuria-A better marker in hypertensive disorders of pregnancy[J].Saudi J Kidney Dis Transpl,2015,26(5):941-946.

[7] Nada DW,El Morsy S,Abu-Zaid MH,et al.The role of microalbuminuria as a predictor of subclinical cardiovascular events in rheumatoid arthritis patients and its relation to disease activity[J].Clin Rheumatol,2017.

[8] Shatat IF,Qanungo S,Hudson S,et al.Changes in urine microalbumin-to-creatinine ratio in children with sickle cell disease over time[J].Front Pediatr,2016,4:106.

[9] Falasca K,Di Nicola M,Porfilio I,et al.Predictive factors and prevalence of microalbuminuria in HIV-infected patients: a cross-sectional analysis[J].BMC Nephrol,2017,18(1):255.

[10] Isobe S,Yuba M,Mori H,et al.Increased pre-procedural urinary microalbumin is associated with a risk for renal functional deterioration after coronary computed tomography angiography[J].Int J Cardiol,2017,230:599-603.

[11] WS/T 420-2013,臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證[S].

[12] CLSI EP5-A2:2004,Evaluation of Precision Performance of Quantative MeasurementMethods[S].

[13] CLSI EP6-A:2003,Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: a Statistical Approach[S].

[14] 熊聲賀,樊斌,黃新城.日立生化分析儀檢測尿微量白蛋白結果評價與分析條件[J].南昌大學學報(醫學版),2012,52(6):76-79.

[15] 孫林,郭瑋,張春燕,等.不同方法檢測血清特定蛋白的結果一致性研究[J].中華檢驗醫學雜志,2013,36(9):839-844.

[16] 劉忠民,高月亭,陳濤.自動生化分析儀自動識別免疫比濁分析中的鉤狀效應[J].中華生物醫學工程雜志,2000,6(4):252-254.

[17] 滕曉梅.免疫比濁法用于全自動生化分析儀中產生鉤狀效應的防范[J].國際檢驗醫學雜志,2015,(12):1649-1650.