端粒酶、M2型丙酮酸激酶、乳酸聯(lián)合檢測鑒別診斷結(jié)核性及惡性胸腔積液的價(jià)值

劉 然， 李 峰， 李玉梅， 劉佃香

（大慶市第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江 大慶 163461）

良、惡性胸腔積液的鑒別診斷一直是臨床的一大難題。在臨床上，結(jié)核性及惡性胸腔積液所占比例非常大，脫落細(xì)胞學(xué)檢查是診斷特異性最強(qiáng)的方法，但受到腫瘤細(xì)胞數(shù)量的影響，敏感性低，僅為50%左右?，F(xiàn)在臨床開展的與腫瘤有關(guān)的一些生化、免疫檢測項(xiàng)目均存在敏感性和特異性問題。腫瘤細(xì)胞增殖極其旺盛，為了防止異常增殖的腫瘤細(xì)胞染色體末端端粒的丟失，端粒酶（telomerase，TE）活性明顯增強(qiáng)。另外，由于腫瘤細(xì)胞糖無氧酵解極其旺盛，因此無氧酵解的關(guān)鍵酶——M2型丙酮酸激酶（M2 pyruvate kinase，M2-PK）活性明顯增強(qiáng)，無氧酵解產(chǎn)生的乳酸水平也會明顯升高。本研究探討了TE、M2-PK、乳酸聯(lián)合檢測在結(jié)核性和惡性胸腔積液鑒別診斷中的價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2016年5月—2017年5月大慶市第二醫(yī)院結(jié)核科住院的結(jié)核性胸腔積液患者30例以及腫瘤門診就診的胸腔積液患者30例。所有患者均經(jīng)臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室檢查、病理學(xué)檢查、胸水細(xì)胞學(xué)檢查等明確診斷。胸腔積液標(biāo)本均用無菌管收集，離心20 min，收集上清于-75 ℃保存。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 PHOMO型酶聯(lián)免疫分析測定試劑盒（上海酶聯(lián)生物公司）。酶標(biāo)儀（鄭州安圖公司）。

1.2.2 測定方法 采用雙抗體夾心法測定胸腔積液中的TE、M2-PK、乳酸水平。用純化的相應(yīng)抗體捕獲抗體，包被微孔板，制成固相抗體，按照試劑說明書進(jìn)行操作。終止顯色后，用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定吸光度（A）值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算標(biāo)本中的TE、M2-PK、乳酸水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 惡性胸腔積液組與結(jié)核性胸腔積液組TE、M2-PK、乳酸水平及陽性率比較

惡性胸腔積液組TE、M2-PK、乳酸水平均高于結(jié)核性胸腔積液組（P＜0.05）。見表1。

30例結(jié)核性胸腔積液患者中TE陽性2例（6.7%）、M2-PK陽性4例（13.3%）、乳酸陽性5例（16.7%）。30例惡性胸腔積液患者中TE陽性24例（80.0%）、M2-PK陽性23例（76.7%）、乳酸陽性20例（66.7%）。見表2。

表1 結(jié)核性及惡性胸腔積液組TE、M2-PK、乳酸水平的比較 （±s）

表1 結(jié)核性及惡性胸腔積液組TE、M2-PK、乳酸水平的比較 （±s）

組別 例數(shù) 端粒酶（ng/mL） M2-PK（U/mL） 乳酸（mol/L）結(jié)核性胸腔積液組 30 0.58±0.41 7.78±4.15 2.25±1.71惡性胸腔積液組 30 2.55±1.72 29.12±3.71 9.45±3.31

表2 結(jié)核性胸腔積液組和惡性胸腔積液組TE、M2-PK、乳酸的定性分析 [例（%）]

2.2 TE、M2-PK和乳酸單項(xiàng)與聯(lián)合檢測的敏感性和特異性分析

TE、M2-PK和乳酸聯(lián)合檢測鑒別結(jié)核性胸腔積液與惡性胸腔積液的敏感性和特異性高于3項(xiàng)指標(biāo)單項(xiàng)檢測。見表3。

表3 TE、M2-PK、乳酸單項(xiàng)與聯(lián)合檢測鑒別結(jié)核性和惡性胸腔積液的敏感性和特異性

3 討論

端粒是存在于真核細(xì)胞染色體末端的一段特殊的DNA和蛋白質(zhì)的復(fù)合物，能穩(wěn)定染色體，保護(hù)染色體結(jié)構(gòu)基因，是細(xì)胞凋亡的信號[1]。TE是一種特殊的DNA聚合酶，具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，能以自身的RNA為模板，在端粒的末端加上新的重復(fù)序列，使端粒延長[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，癌細(xì)胞往往會產(chǎn)生額外的TE，TE的激活使癌細(xì)胞不斷地分裂、增殖。

腫瘤細(xì)胞與人體正常細(xì)胞在能量代謝上有很大的不同。正常細(xì)胞的能量代謝特點(diǎn)是通過葡萄糖在線粒體內(nèi)進(jìn)行氧化磷酸化獲得能量，只有在缺氧時(shí)才進(jìn)行無氧糖酵解，而腫瘤細(xì)胞即使在氧供應(yīng)充分的條件下也主要以糖酵解（Warburg效應(yīng)）獲得能量[3-4]，并產(chǎn)生大量乳酸，其原因可能與癌細(xì)胞的酶譜變化有關(guān)，特別是與糖酵解關(guān)鍵酶M2-PK活性增強(qiáng)有關(guān)[5]。

結(jié)核性及惡性胸腔積液的鑒別診斷一直是臨床面臨的一大難題。本研究結(jié)果表明，惡性胸腔積液患者TE、M2-PK、乳酸水平明顯高于結(jié)核性胸腔積液患者（P＜0.05）；3項(xiàng)指標(biāo)單項(xiàng)檢測鑒別診斷結(jié)核性及惡性胸腔積液的敏感性最高為80.0%，特異性最高為86.7%，而聯(lián)合檢測的敏感性可達(dá)90%，特異性可達(dá)96.9%。因此，TE、M2-PK、乳酸聯(lián)合檢測可用于結(jié)核性胸腔積液及惡性胸腔積液的鑒別診斷。

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