血漿血小板反應蛋白-1水平與冠狀動脈狹窄病變程度的關系研究

王竟悟, 艾鳳英, 王大勝, 吳 悠,蘇巖杰, 楊鑫泉, 王大新

(1. 揚州大學臨床醫學院, 江蘇 揚州, 225000; 2. 大連醫科大學, 遼寧 大連, 116044;3. 中南大學湘雅二醫院, 湖南 長沙, 410011)

冠狀動脈疾病(CAD)目前仍然是全球人類死亡的主要原因之一，盡管人們對心血管疾病的預防已有相當的關注[1]。2016年國人死因排序中，缺血性心臟病排在第2位[2]。血小板反應蛋白-1(TSP-1)又名凝血栓蛋白-1，是血小板反應蛋白家族的成員。TSP-1在心肌肥厚、心力衰竭、動脈粥樣硬化等疾病發生發展過程中發揮著重要作用[3]。目前研究TSP-1與冠狀動脈狹窄程度關系的還很少。Gensini評分(GS)是1983年GOFFRED和GENSINI 聯合提出的一種冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的病變嚴重程度的評分方法，一直沿用至今，也是目前臨床工作中常用的一種評估冠脈狹窄嚴重程度的方法[4]。本研究探討血漿TSP-1水平與冠狀動脈粥樣硬化嚴重程度的關系及其臨床意義，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年7—11月在江蘇省蘇北人民醫院心內科206病區住院并接受冠脈造影檢查的患者共79例，根據Gensini積分分為低、中、高3組。低評分組男17例，女10例，年齡(64.37±8.09)歲，體質量指數(23.99±3.11) kg/m2。中評分組男18例，女8例，年齡(63.3±11.78)歲，體質量指數(24.11±2.75) kg/m2。高評分組男20例，女6 例，年齡(60.08±11.98)歲，體質量指數(24.34±3.8) kg/m2。對照組選取同期住院但冠狀動脈造影結果為陰性者，即Gensini評分為0分者27例，男9例，女18例，年齡(58.74±8.78)歲，體質量指數(23.19±3.35) kg/m2。

排除標準: 年齡>80周歲; 既往有明確冠心病病史，行冠脈支架植入或冠脈搭橋術者; 合并慢性腎臟病(CKD)病史或急性腎損傷或規律血液透析者; 拒絕行冠脈造影檢查或造影不成功者; 心肌炎、心肌病、嚴重主動脈瓣疾病、外周動脈疾病及結締組織病者; 重度或難治性高血壓; 良、惡性腫瘤及腫瘤術后患者; 嚴重心律失常、貧血、感染者; 不自愿入組者和心理精神疾病患者。

1.2 研究方法

所有研究對象于入院24 h內采集5 mL空腹靜脈血于EDTA抗凝管內，立即送至江蘇省蘇北人民醫院研究中心, 4 ℃冰箱靜置30 min后，以3 000轉/min離心10 min; 吸取上層淡黃色血漿于1.5 mL EP管中，置-80 ℃冰箱凍存盒中保存待檢。以酶聯免疫法(ELISA)測定各組血漿TSP-1、MMP-9、TGF-β1、hs-CRP的濃度; ELISA試劑盒均購自中國上海BG公司。

1.3 Gensini積分計算方法

根據冠脈造影所顯示冠脈內徑狹窄程度進行積分: 冠脈狹窄1%～25%為1分，狹窄程度達>25%～50%計為2分，>50%～75%計為4分，>75%～90%計為8分，>90%～<100%計為16分，100%(即完全閉塞)計為32分。根據病變部位及分支血管所對應的計分系數: 左主干5分，前降支近段2.5分、中段1.5分、遠段1分，第1對角支1分、第2對角支0.5分，回旋支近段2.5分、遠段1分、鈍緣支1分，右冠脈近段1分、中段1分、遠段1分，后降支1分，左室后支1分。Gensini積分=冠脈各段系數的計分×該段狹窄程度的計分。累加該患者所有病變段的積分即為總Gensini積分。結果由手術醫師判定，取2人判定結果的均值。

1.4 統計學處理

采用graphpad prism 5和SPSS 20.0統計軟件。計量資料用均數±標準差表示，用The Shapiro-Will test來評價計量資料是否符合正態分布。計數資料用頻數、百分構成比表示，采用χ2檢驗。計數資料呈正態分布且總體方差齊時，則采用獨立樣本t檢驗及單因素方差分析(one-way ANOVA); 若計數資料不呈正態分布時，則用the Mann-WhitneyUtest和Kruskal-Wallis test。用Spearman的相關系數計算兩個連續變量之間的關系; 多元逐步回歸分析法用于不同變量對TSP-1、GS的影響評價，并對協變量進行調整。

2 結 果

2.1 受試者的基線資料

根據Gensini 積分將患者分為3組，即低評分組(≤12分)、中評分組(>12～<60分)、高評分組(≥60分)。收集臨床基線資料發現, Gensini得分越高，受試者患2型糖尿病、吸煙的比例就越高，同時左室射血分數也隨著評分的增高而降低，差異有統計學意義。實驗室指標中只有總膽固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、肌酐的數值隨著Gensini評分的上升而上升。傳統意義上具有保護意義的高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和血清載脂蛋白A1(ApoA1)的值則隨著評分的上升而顯著下降(P<0.05)。見表1。

表1 不同組別受試者的臨床資料比較

2.2 各組間血漿TSP-1與Gensini評分的相關性

高評分組TSP-1水平顯著高于對照組(P<0.001)。對照組、低評分組、中評分組和高評分組兩兩比較，差異有統計學意義(P<0.05)。線性相關分析顯示TSP-1與GS有顯著相關性(r=0.4674,P<0.001)。見圖1。

圖1各組血漿TSP-1水平和血漿TSP-1水平與GS的線性相關及散點圖

2.3 血漿TSP-1水平與血漿相關細胞因子水平的分析結果

酶聯免疫法在4組患者的血漿中均能檢測到TGF-β1、MMP-9、hs-CRP。三者均是研究較廣泛與冠狀動脈粥樣硬化狹窄有密切關系的細胞因子。hs-CRP被稱為最敏感的炎癥因子，目前已經被廣泛運用到臨床。相關性分析顯示，TSP-1和hs-CRP、MMP9、TGF-β1存在顯著相關性(P<0.001)。見圖2。

2.4 多元逐步線性回歸分析結果

為確定與TSP-1、GS是否存在密切聯系，分別以TSP-1、GS為因變量，以年齡、性別、BMI、是否吸煙、左室射血分數、TG、TC、LDL-C、HDL-C、LDL-C、ApoA1、空腹血糖、尿酸、尿素氮、肌酐、hs-CRP為自變量，進行多元逐步線性回歸分析，發現GS能夠獨立預測TSP-1, 同時TSP-1也是GS的獨立預測因子。見表2、3。

3 討 論

TSP-1是一種多結構域及多功能的細胞外基質糖蛋白，可由激活的血小板α顆粒、巨噬細胞、平滑肌細胞和內皮細胞等合成分泌，能夠調節細胞與基質間的相互作用、參與調節平滑肌增值與遷移、內皮細胞凋亡、血小板聚集、血栓形成及血管新生等生物學過程。在Gene Quest研究中，Topol等[5]發現TSP-1基因多態性A2210G(N700S)在冠狀動脈粥樣硬化不定斑塊形成過程中起著重要的作用。但多項針對中國人群的研究[6-7]發現, TSP-1的700N→S變異發生率明顯低于西方人群，且與ACS發病無相關性。由此可見，對中國人群血漿中TSP-1的水平進行研究仍具有積極的意義。

圖2 各組血漿hs-CRP、MMP-9、TGF-β1水平及其與血漿TSP-1的相關性

表3 以Gensini積分為因變量的多元逐步線性回歸結果

本研究是首次從冠脈動脈的狹窄程度這一角度出發，探討不同Gensini積分患者血漿中TSP-1的變化情況。研究結果顯示TSP-1與冠狀動脈的狹窄病變程度存在密切的關系，隨著GS的增高，TSP-1在血漿中的水平顯著上升(P<0.001), 同時由多元逐步線性回歸的結果可以看出，血漿中TSP-1的水平和冠狀動脈的狹窄程度互成因果關系，TSP-1在血漿中的水平越高，導致冠脈狹窄越嚴重; 而狹窄的冠脈又進一步促進TSP-1分泌增多，血漿水平增高。可能由這幾方面原因導致: ① 動脈粥樣硬化早期TSP-1上調了細胞間的黏附分子的表達，促進單核細胞結合至內皮細胞[8-11]。而單核細胞可通過介導炎癥反應并促進斑塊內血管新生，在動脈粥樣硬化進展中起關鍵作用[12-15]。② 斑塊形成階段TSP-1可促進血管平滑肌細胞的增殖和遷移，多細胞的聚集和相互作用使斑塊分泌TSP-1增加[16-17]。③ 心肌梗死發生后，梗死的心臟直接分泌出TSP-1, 使血漿中TSP-1的水平進一步上升。這些均提示冠狀動脈狹窄患者血漿TSP-1水平變化間接反映冠狀動脈的病變程度[18]。

細胞因子一直是動脈粥樣硬化過程中的研究熱點, MMP-9和 TGF-β1分別是目前被研究最多和最廣泛的損傷性和保護性細胞因子，二者均已被證實與冠狀動脈狹窄程度存在顯著相關性[19-20]。本研究結果顯示, TSP-1與二者均存在顯著相關性(P<0.001)。同時，近期大量臨床研究表明hs-CRP不僅僅是一種炎癥標志物，同時也是動脈粥樣斑塊脆性的標志。本研究多元逐步線性回歸也發現TSP-1與hs-CRP存在獨立相關性，這些都意味著TSP-1不僅僅是一個冠心病潛在的預測標記物，同時也是一個重要的干預、治療靶點。同時，本研究也有一些共性研究結果，即TC、LVEF、空腹血糖與冠脈病變程度存在相關性，這些結果已經被許多臨床研究所證實。

綜上所述，血漿TSP-1水平與冠狀動脈狹窄程度存在顯著正相關性, TSP-1有望成為反映冠狀動脈病變程度的標志物之一，同時也是一個潛在的干預、治療靶點。

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