豬唾液與血清中豬瘟抗體相關性研究

徐剛孺，衛朝輝，高 洪，嚴玉霖，曾夢穎，王改菊

(1.云南農業大學動物科學科技學院，昆明 650201；2.云南省德宏州梁河縣動物衛生監督所，云南德宏 679200；3.云南省德宏州梁河縣動物疫病預防控制中心，云南德宏 679200)

豬瘟(classical swine fever，CSF)，俗稱“爛腸瘟”，是由豬瘟病毒(classical swine fever virus， CSFV)引起的嚴重危害養豬業的一種高傳染性、高致死性豬傳染病[1-2]，豬瘟通常會引發高熱、出血綜合征，具有較高的死亡率[3]，也是豬主要繁殖障礙性疾病之一。世界動物衛生組織(OIE)將其列為A類法定報告的傳染病[4]，我國也將其列為一類動物傳染病。豬瘟在我國呈現地區性散發性特點，并在豬群中存在一定隱性感染和持續性感染現象[5]。世界動物衛生組織推薦的豬瘟抗體檢測方法是ELISA法，因其檢測方法操作簡便快速、結果易于判別，使得血清學方法檢測CSFV抗體成為目前預防和控制豬瘟大面積感染的主要手段，同時在監測流行狀態和流行病學調查等方面有著重要的作用，是監測免疫豬群抗體水平的主要方法，對豬瘟疫苗免疫效果評價及免疫程序的制定具有重要指導意義。但血液樣品采集具有耗時費力、對動物造成傷害、威脅采集人員安全等缺點，近年來有報道唾液樣品可替代血清樣品檢測豬瘟抗體[6]。為了解豬血清豬瘟抗體和相應唾液中抗體的關系，根據云南省境內某種豬場的血清豬瘟抗體和相應唾液中抗體檢測數據，研究分析了血清豬瘟抗體和相應唾液中抗體水平的相關性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 檢測樣品 從云南省境內9個豬瘟疫苗免疫1個月以上的規模化豬場隨機采集60唾液樣品。每個相應的豬場采集血液樣品，共采集180份血液，實驗室分離血清，-4 ℃保存血清。唾液采集方法：以圈為單位，將經過高壓滅菌的棉線用鐵絲固定在豬圈的適當位置，利用豬的好奇心，讓其自由咀嚼，經10～30 min后，待棉線濕透后，收集到密封袋中帶回實驗室。把棉紗繩上的唾液擠入10 mL離心管中，待檢測。

1.1.2 檢測試劑盒 豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒購于IDEXX股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 抗體水平檢測 待檢血清和唾液采用 ELISA 方法檢測CSFV抗體具體操作按照產品使用說明書進行。

1.2.2 數據處理與分析 豬瘟抗體水平檢測數據用阻斷率(%)表示，阻斷率=(1-S/N)×100%(S=樣品孔OD450nm值，N=陰性對照孔平均OD450nm)。檢測結果判斷標準為：CSFV抗體阻斷率≥40% 為陽性；阻斷率<40%為陰性。相應血清抗體阻斷率算平均阻斷率，數據采用SPSS19.0進行統計分析，運用Pearson相關性分析(雙側)豬唾液與血清中豬瘟抗體相關性。

2 結果與分析

2.1 CSFV血清抗體水平檢測結果 CSFV抗體阻斷率平均值為35.63%，離散度為14.51%，陽性率為37.50%(表1)。

2.2 CSFV唾液抗體水平檢測結果 CSFV抗體阻斷率平均值為33.53%，離散度為13.58%，陽性率為35.40%(表2)。

表1 CSFV血清抗體水平檢測結果Tab 1 Result of antibody of CSFV in serum of pigs

表2 CSFV唾液抗體水平檢測結果Tab 2 Result of antibody of CSFV in oral fluid of pigs

2.3 CSFV抗體阻斷率與唾液抗體水平的相關性

表3結果顯示，CSFV抗體阻斷率與相應豬唾液抗體的皮爾遜相關系數為0.768，呈顯著正相關(P<0.05)。

2.4 CSFV抗體阻斷率與唾液抗體水平的線性回歸關系 由表4、表5以及圖1可得出CSFV抗體阻斷率(Y，單位：%)與相應豬唾液抗體(X，單位：%)的回歸方程：Y=1.092X+1.535，r2=0.590。

表3 CSFV抗體阻斷率與唾液抗體水平的相關性Tab 3 Correlation between antibody of CSFV in oral fluid and serum of pigs

表4 回歸系數計算Tab 4 Regression coefficient calculation

表5 回歸顯著性檢驗Tab 5 Regression test

圖1 CSFV抗體阻斷率與唾液抗體水平的線性回歸關系Fig 1 Linear regression relationship of antibody of CSFV in oral fluid and serum of pigs

3 討 論

豬瘟血清抗體的檢測對于CSFV疫病診斷、免疫效果的評估和免疫時機的選擇都具有重要的指導意義，是目前獸醫實驗室診斷使用較多的方法。抗體阻斷率與血清中的中和抗體效價成正相關，阻斷率越高，表明中和抗體水平越高[7]。抗體陽性率代表檢測血清中中抗體阻斷率在40% 以上的個體占所檢全體的比例，抗體陽性率越高，表明豬群的疫苗免疫效果越好。離散度=標準差/平均阻斷率×100%。離散度越低，表明豬群個體的抗體水平整齊度好，免疫效果越好；反之，說明個體的抗體水平差異較大，免疫效果不好，離散度最好控制在15%以內[7]。試驗數據顯示，豬瘟血清抗體阻斷率平均值為35.63%，離散度為14.51%；抗體陽性率為37.50%；CSFV唾液抗體阻斷率平均值為33.53%，離散度為13.58%，陽性率為35.40%，說明豬瘟血清抗體及相應的唾液抗體整齊度較好。抗體的陽性率檢測結果表明樣品收集豬場的豬群疫苗免疫效果需要加強。試驗進一步探討了豬血清中抗體阻斷率與唾液中抗體阻斷率的相關性，結果發現兩者的皮爾遜相關系數為0.768。相關系數絕對值大于0.3，可以視為相關性[8]。因此，兩者之間呈現顯著正相關(P<0.05)。根據試驗數據及相關性推測，當唾液中抗體阻斷率高于35%時，可判為豬瘟陽性。試驗的樣本數量有限，初步探究出了豬血清中抗體阻斷率與唾液中抗體阻斷率的相關性，兩者進一步的相關性還需進一步試驗研究。

唾液的采集方法簡便，可減少動物應激，是評估豬群實時健康動態的良好工具[9]，但不是所有檢測血清抗體的試劑盒都可以用來檢測唾液樣品，需要選用敏感性較高的ELISA試劑盒提高唾液中豬瘟抗體與血清中相應抗體的符合率[10]。推廣唾液在獸醫檢測中的運用還有許多問題需要完善，例如唾液中抗體滴度低于血清中抗體滴度；唾液中抗體主要以分泌型的IgA為主，而血液中主要以IgG為主，有研究發現，唾液中IgA抗體檢測的靈敏性要高于IgG抗體的靈敏性[11-12]。目前商品化的ELISA檢測試劑盒主要針對血清中的IgG抗體，因此開發針對分泌型IgA的ELISA檢測試劑盒將有利于唾液中抗體的檢測。

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