酶抑制法檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留

趙家允

[摘 要]隨著我國農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化發(fā)展水平的不斷提升，農(nóng)產(chǎn)品越來越依賴于農(nóng)藥、抗生素和激素等外源物質(zhì)。且由于存在不合理的農(nóng)藥使用方式，造成了我國農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留量超標，直接影響了我國的農(nóng)業(yè)貿(mào)易，對人體的生命安全造成了嚴重的影響。本文通過對農(nóng)藥殘留檢測的重要性分析，結(jié)合農(nóng)藥殘留的檢測方法和步驟來對使用較為廣泛的酶抑制法檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留進行闡述。

[關(guān)鍵詞]檢測酶；抑制法；有機磷

[中圖分類號]S481.8 [文獻標識碼]A

1 農(nóng)殘檢測的重要性

隨著我國農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化的不斷發(fā)展，農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)對農(nóng)藥、抗生素和激素等外源物質(zhì)的依賴性不斷增加。我國農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥用量一直以來都處于較高的水平，且由于不合理的使用方法造成農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留量超標，直接影響到了消費者的食用安全，甚至造成消費者中毒或死亡。此外，農(nóng)藥殘留超標也會對農(nóng)產(chǎn)品的貿(mào)易造成直接性的影響，全球各國也高度重視農(nóng)藥殘留的問題，對各類農(nóng)產(chǎn)品制定了嚴格的農(nóng)藥限量標準。

農(nóng)殘檢測是通過分析農(nóng)藥殘留檢測儀檢測到農(nóng)藥殘留含量來判斷蔬菜的農(nóng)藥殘留量是否超標。有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥是目前我國使用最多的農(nóng)藥，且多數(shù)被明確禁止使用在蔬菜、瓜果上。由于該類農(nóng)藥在進入生物體后會與乙酰膽堿酶結(jié)合，并分離難度大，即直接抑制了乙酰膽堿酶的活性，造成生物體神經(jīng)傳導中的乙酰膽堿無法水解而過度積累，致使神經(jīng)亢奮，繼而出現(xiàn)中毒癥狀，嚴重者直接死亡。因此，必須重視農(nóng)殘檢測的重要性。

2 快速檢測的基本方法

常見的快速檢測方法主要有三種：

（1）通過檢測原理創(chuàng)新而比傳統(tǒng)檢測方法用時要短的方法，主要有乙酰膽堿酶抑制法、酶聯(lián)免疫法、生物傳感器法和分子印跡法等。（2）通過簡化程序和提高效率來減少用時的方法，主要有SPE固相萃取法分離目標農(nóng)藥、ASE快速溶劑萃取法提取目標農(nóng)藥等。（3）采用自動化、信息化或一體化設(shè)計而提高效率的方法，主要有流動注射儀代替化學滴定法測定多種無機農(nóng)藥、自動進樣器等。

目前普遍使用的檢測方法為采用酶抑制法的便攜式農(nóng)藥殘留檢測儀，其工作原理為：在有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制乙酰膽堿酶的活性，且抑制率與農(nóng)藥種類和含量相關(guān)的基礎(chǔ)上，通過測定抑制率的大小來對蔬菜的農(nóng)藥殘留是否超標做出判斷。由于酶抑制率法具備成本較低、靈敏度較高、操作簡易和檢測數(shù)據(jù)可靠等特點，被市場廣泛使用。

農(nóng)藥殘留檢測儀器的優(yōu)勢在于：（1）生化分析極易受溫度影響，需在恒溫條件下進行預(yù)反應(yīng)，而農(nóng)藥殘留速測儀不僅具備測試功能，還具備恒溫水浴和定時等功能，以確保預(yù)反應(yīng)條件和提高檢測準確率。（2）速測儀使用較為方便，無需調(diào)整波長，按鍵操作即可選擇檢測所需的測試波長。

3 農(nóng)殘快速檢測操作流程與結(jié)果判定

3.1 檢測原理

農(nóng)藥殘留快速檢測儀是根據(jù)國家標準和農(nóng)業(yè)標準方法中的酶抑制率法，結(jié)合快速檢測方法研發(fā)的全新食品安全檢測設(shè)備，具有較高的準確率和檢測速率。

常規(guī)情況下，酶催化乙酰膽堿水解，水解產(chǎn)物和顯色劑反應(yīng)后生成黃色物質(zhì)，通過分光光度計檢測412nm下吸光度隨時間的變化值來計算抑制率，并根據(jù)抑制率來對樣品中的有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量是否超標做出判斷。

3.2 農(nóng)殘檢測操作流程

3.2.1 前期準備：（1）開啟農(nóng)藥殘留檢測儀自檢和預(yù)熱10-15分鐘，以確保光源穩(wěn)定。（2）登錄農(nóng)藥殘留檢測系統(tǒng)，進行端口設(shè)置和檢測儀的連接工作。（3）清除前一天對照液的參照值和檢測信息。

3.2.2 試劑配劑制備：（1）緩沖液：將1包緩沖劑加入500ml蒸餾水中，充分溶解制成偏堿性的磷酸緩沖液，常溫下保存。（2）顯色劑：取1瓶顯色劑，加入25ml緩沖液，充分溶解后放置于4℃冰箱保存，使用時取100ul。（3）底物：取一瓶底物，加入2.5ml蒸餾水，溶解后放置于4℃冰箱保存，使用時取20ul。（4）膽堿酯酶：酶抑制劑可直接取用，用時取100ul，放置于4℃冰箱保存。

3.2.3 對照液的制備和測試：（1）對照液的制備：將100ul酶和2.5ml緩沖液加入比色皿中，在混合均勻后加入100ul的顯色劑和20ul底物。將其搖勻后立即放入儀器中進行對照測試。（2）對照液測試結(jié)果保存：正常的測試結(jié)果處于0.3-0.8之間，假若超出范圍，則表示操作有誤或顯色時間過長，需重新測試，在確認合格后才可保存檢測結(jié)果。

3.2.4 待測樣品信息的錄入：根據(jù)待測樣品的編號來錄入相應(yīng)樣品的名稱、檢測標準、生產(chǎn)單位和被檢單位等。

3.2.5 檢測樣品液的制備：（1）將菜葉剪成1cm的方形小片（大約2g重）或4g的塊莖放入三角瓶內(nèi)，加入緩沖液10ml，振蕩提出1-2min后過濾，將清液（待測液）取出。（2）取100ul酶，2.5ml待測液，加入比色皿中，混合均勻，并靜置10min后，加入100ul顯色劑或20ul底物。將比色皿蓋上顛倒兩次后立刻放入儀器中進行樣品測試。

3.3 農(nóng)殘檢測結(jié)果判定

以分光光度計測試（412nm波長）時，按下式計算抑制率：

抑制率（%）=[（ΔΑ0-ΔΑt ）/ΔΑ0]×100

以農(nóng)藥殘留快速測試儀檢測時其抑制率一般可自動計算。（1）樣品的抑制率低于50%，則表明試樣中的農(nóng)藥殘留性低，該樣品合格；（2）樣品的抑制率超過50%，則表明試樣中的農(nóng)藥殘留量較大，該樣品不合格，需暫停售賣，并對其進行追蹤整改和上報相關(guān)主管部門；（3）樣品的抑制率處于40%-50%之間，則表明為疑似農(nóng)殘超標樣品，需重新檢測，假若重測抑制率依舊超過40%，則需采用氣象色譜儀器分析法來深入檢測確定或暫停銷售，并進行追蹤整改和上報相關(guān)主管部門。

4 結(jié)語

為避免出現(xiàn)因蔬菜農(nóng)藥殘留量超標而造成的人體中毒現(xiàn)象，應(yīng)加強對蔬菜的農(nóng)藥殘留檢測。采用酶抑制法來檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留，結(jié)合農(nóng)藥殘留速測儀的使用，顯著提高了檢測速率和準確率，為我國農(nóng)產(chǎn)品的健康發(fā)展提供可靠的保障。

[參考文獻]

[1] 邱朝坤，劉曉宇，任紅敏，等.酶抑制法檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留[J].食品與機械，2010（02）.

[2] 趙陽.酶抑制法檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留分析[J].鄉(xiāng)村科技，2016（30）.

[3] 于基成，邊辭，趙娜，等.酶抑制法快速檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2006（05）.

[4] 黃志勇，袁園，呂禹澤.蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的兩種酶抑制快速檢測方法的比較研究[J].食品科學，2003（08）.

[5] 李順，紀淑娟，李東華.酶抑制法快速檢測蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留的最佳條件研究[J].食品科技，2007（01）.

[6] 曾小嵐，張歆，付東亮，等.酶抑制法檢測蔬菜中的有機磷農(nóng)藥[J].環(huán)境監(jiān)測管理與技術(shù)，2004（06）.