肉牛胚胎移植技術要點

巴合提古麗·胡那畢亞

摘要：胚胎移植是將具有優良遺傳性狀的早期胚胎從供體母牛體內取出，移植到另一頭生理狀態相同的母牛子宮內，使其繼續發育形成胎兒直到順利分娩的過程。胚胎移植涉及的技術環節較多，每一環節的工作都對胚胎移植的成功與否影響極大，需做好各環節的工作。

關鍵詞：肉牛；胚胎移植；受體牛；供體牛；超數排卵；同期發情；飼養管理

中圖分類號：S823. 3+6

文獻標識碼：B

文章編號：2095-9737（2018）08-0053-01

1 供、受體肉牛的選擇與飼養管理

供體牛選擇品種特征明顯，具有較高生產性能的母牛，其遺傳性狀要求穩定，并且要系譜清楚。受體牛一般選擇當地的黃牛品種，應選擇14—15月齡，體重在360 kg以上的育成牛或者年齡在2.5～5歲的1—2胎的成年母牛。供、受體牛都要健康無病，繁殖性能良好，沒有流產史，發情周期正常，并且性器官的發育也要求正常。

供、受體母牛都要進行科學的飼養管理，合理的飼喂，提供適宜的營養物質，營養是影響母牛繁殖能力的主要因素，所提供的飼料要求多樣且品質優良，青飼料、粗飼料、精飼料以及各種飼料添加都要搭配合理，以保證肉牛攝入充足的營養物質，同時還要保證母牛攝入充足且清潔的飲水。

2 供體牛的超數排卵處理

胚胎移植需要對供體母牛進行超數排卵處理，以獲得多枚胚胎，一般要求供體母牛的排卵數量要在10枚左右，如果排卵數量過多，會易起卵巢囊腫，并且排卵效果不穩定，如果排卵過少則會降低胚胎移植的意義，還會造成胚胎難以采集。超數排卵主要使用的藥物有促卵泡素（ FSH）、氯前列烯醇（PG）或陰道栓（CIDR）等，超數排卵過程中在發情后的第9～13天，連續4天早晚肌注促卵泡素，中間間隔12 h，在注射后的第3天用氯前列烯醇處理。或者可以在供體牛發情期到來的前4天，即發情周期的第16天注射促性腺激素，然后在出現發情狀況的當天注射絨毛膜促性腺激素。

3 受體牛同期發情技術

同期發情技術是胚胎移植的一個重要的環節，可為超數排卵的供體牛在同一時間內準備足夠的用于移植的受體牛，通過與受體牛同期化處理可以使供、受體牛的生理狀態保持相同。在同期化處理時，發情時間與供體牛最好提前一天，并且受體牛的處理頭數一般為供體牛的5倍。常用的同期發情技術為前列腺法，可分為一次前列腺法和二次前列腺法，一次法是對處于發情周期第10天的受體牛一次肌注前列腺素2～4 mL，誘導其發情，發情后第7天再進行移植。二次法是對在第一次肌注前列腺素后的11天再次肌注前列腺素2—4 mL，在發情后第7天移植。實際表明，注射二次法的效果要優于注射一次法。

4 胚胎的采集與貯存

胚胎的采集在母牛發情配種后的第7天進行，將發情當天視為0天，實施沖胚，在沖胚前需要通過直腸法檢查卵巢黃體的個數，以判斷可沖出胚胎的個數，在沖胚前需要準備好器械和沖胚液，所有的器械都要嚴格的消毒，沖胚液則要提前在35～37℃的水浴鍋內預熱。在操作時采用直腸把握法將沖卵管插入一側的子宮角的深部，注入沖卵液后將子宮角抬高，使沖卵液回流，并將其回收。一般一側的子宮角需要反復沖7次左右。沖胚結束后需要直接從沖管向子宮角內灌注抗生素和氯前列烯醇。

采集的的胚胎需要進行檢查，并對胚胎進行鑒定和分級。首先要將胚胎回收，一般使用沉淀法，將回收液靜置20 min后將上清去除，吸到液面還有2—2.5 cm深時即可。胚胎的鑒定要在顯微鏡下觀察胚胎分裂與否、形態色調、均勻度、細胞的密度等情況，并將胚胎分為A、B、C、D4級。其中A級的胚胎形態完整、輪廓清晰，為球形，分裂球大小均勻，結構緊湊，透明度適中，無細胞和液泡附著；B級輪廓清晰，色調及細胞密度良好，可見到一些附著的細胞和液泡；C級輪廓不清，色調發暗，結構較松散，游離的細胞或液體較多，變性的細胞達30% - 50%；D級未受精卵、16細胞以下受精卵、有碎片的退化卵及變性細胞超過一半的胚胎。其中A、B、C級胚胎為可用胚胎，并且A、B級為可冷凍胚胎，C級胚胎只能用于鮮胚移植，D級胚胎為不可用胚胎。

一般采集的鮮胚需要進行冷凍保存，以保持活力，可選擇常規冷凍法，將胚胎置于防凍液中平衡一段時間，然后裝管后以每分鐘降低0.3～0.5℃的速度降低至-7℃，植凍后溫度緩慢的降低至 35℃，平衡10 min后迅速置于液氮中保存。

5 胚胎的解凍與移植

胚胎移植可分為鮮胚移植和凍胚移植。凍胚在解凍后可直接移植，先從液氮中取出細管，置于空氣中10 s，然后再將其置于35℃溫水中10 s，將封口端剪去，裝入移植槍。輸胚采用直腸把握法，在輸胚前要考慮胚胎的發育情況和受體牛的發情時間，一般輸胚前需要確定受體牛處于發情周期的6～8天，并還要確定卵巢上有明顯的黃體存在，并且輸胚還要在有黃體一側的子宮角深處，操作的方法與人工授精相同。

胚胎移植后要注意觀察受、供體牛的健康情況以及發情情況，對于供體牛在下次發情時可正常配種，如果受體牛在胚胎移植后仍發情，則說明移植失敗，如果未表現出發情，則要觀察3～5個情期，并做好妊娠的診斷工作。