活體采卵技術在牛高效快繁中的應用

佟桂芝 宋斌 王洪寶 黃紅

摘要：牛活體采卵（OPU）是借助超聲波或內窺鏡觀察，直接從活體母牛卵巢上抽取卵母細胞的技術，它與體外受精和胚胎移植（ET）等技術結合，可反復從有較高遺傳價值良種母牛體內采集卵母細胞生產胚胎，即從高遺傳價值良種母牛采集卵母細胞生產胚胎，進行胚胎移植具有生產成本低效率高的優勢。

關鍵詞：母牛；OPU；體外受精；胚胎移植

中圖分類號：S823.3

文獻標識碼：B

文章編號：2095-9737（2018）01-0017-01

活體采卵技術是20世紀90年代發展起來的一項新型胚胎生產技術。1988年，Pieter首次報道了牛的B超活體采卵技術。卵泡資源的高效利用，獲取種源明確的卵母細胞，結合體外受精，提供可用卵母細胞和胚胎。獲得大量遺傳系譜明確的胚胎，降低胚胎生產成本；充分挖掘繁殖潛力；引進品種的高效利用；可使用于出生三個月以上的犢牛、育成牛、成年牛、老齡牛，懷孕三個月以內的牛；超排不起作用的牛以及輸卵管和子宮有疾病失去繁殖能力的牛；為胚胎T程的其他相關研究如核移植，轉基因，性別控制等提供合適的研究材料。

1 牛活體采卵方法

1.1 內窺鏡法

操作者將一手臀伸入直腸內→將套筒和穿刺棒消毒后送入陰道到穹窿上部→用力推動穿刺棒使套筒同時穿過穹窿進入腹腔→抽出穿刺棒送人探棒一直腸內的手將卵巢拉至套管前端→打開顯示屏觀察卵巢形態→搜尋到2～8 cm的卵泡后，推動采卵針刺入卵泡內將卵母細胞吸出收集在集卵管內→一顯微鏡下檢出卵母細胞。

優點：直觀、清晰地觀察卵巢上的卵泡、黃體以及表面狀態，可準確選擇符合要求的卵泡進行采集，極少發生損傷卵巢實質與其他組織，回收率高等。

缺點：工作量大，對陰道損傷較大，重復采卵的時間間隔較長，操作前需作饑餓處理等。

1.2 超聲波法

母牛作硬膜外麻醉→將→手臂伸入直腸內→將探棒涂布耦合劑送至陰道內前端→直腸內的手將卵巢拉至探頭部位→打開B超儀觀察卵巢形態→搜尋到2～8 mm的卵泡，將其放置采卵線上→開動抽吸泵，推動采卵針刺人卵泡內，將卵母細胞吸出。

優點：采卵率高，對卵巢損傷小，對供體牛的繁殖性能無影響，采卵間隔時間短等。

缺點：設備價格高，對操作者要求高。

2 影響牛OPU效果的主要因素

2.1 供體牛

除了患有卵巢疾病或妊娠3～4月齡以后的牛，幾乎所有2月齡以上的母牛都可作為供體來使用。妊娠母牛也可作為OPU的供體母牛，且對妊娠無不良影響。

對于犢牛的活體采卵，一般預先激素處理，激素處理不僅能夠提高卵泡數和卵母細胞數，而且能夠提高卵母細胞的質量及后續胚胎的發育能力。

2.2 外源激素

用FSH預處理供體母牛不僅可以增加卵母細胞的回收率，而且能夠提高卵母細胞的質量。用PMSG處理供體母牛，發現卵巢的卵泡變大，直徑5—10 mm的中等卵泡較多，有利于采卵，且卵母細胞的回收率也提高。

2.3 采卵頻率

每周采兩次獲取的卵母細胞數多于每周采1次，且卵母細胞的質量較高。采卵頻率與激素的處理相關：激素處理每周采1次和無激素處理每周采2次，可采卵泡數無顯著差異。

2.4 其他因素

除了受上述因素影響外，還受其他因素的影響，如供體牛的飼養管理、供體牛所處的發情周期、繁殖障礙（輸卵管閉塞、子宮機能不全等）、季節與氣候、真空泵的壓力等。

采用人工授精：一頭優質母牛每年只能生產一頭牛犢；利用屠宰場卵巢：無法跟蹤其遺傳性能，系譜不明。利用超排技術：一頭牛每年最多能生產20枚左右胚胎，年均產犢數（按50%的受孕率計算），一頭優質母牛每年只能生產10頭牛犢；利用OPU技術：同時運用良種母牛和公牛；一頭牛每年能生產200枚以上胚胎，年均產犢數（按50%的受孕率計算），一頭優質母牛每年只能生產100頭牛犢；能夠跟蹤其遺傳性能；現繁殖技術中效率最高。

3 應用前景

OPU和IVF - ET結合已經成為歐美和大洋洲等畜牧業發達國家擴大良種牛群的重要繁殖技術，已經用于商業化生產。OPU結合分離X、Y精子的性別控制技術可為大規模工廠化生產體外性控胚胎開辟新途徑。OPU作為一項重要繁殖技術，對加速良種牛的繁育速度，優化牛群結構，為推動畜牧業及相關產業的快速發展將發揮重要作用。

種源是畜牧業發展的根基和命脈。當前我國畜牧生產中良種覆蓋率僅35%左右，有近85%是從國外引進。畜禽種業正面臨著國際跨國種業集團種源壟斷和產品進入的雙重壓力。挖掘與利用動物種質資源、揭示繁育機理、創新育種方法、實現高效快繁已成為當前我國畜牧業可持續發展的頭等大事。