布魯氏菌病假陽(yáng)性血清的制備方法

余紹榮 侯明省 馮德正 張書(shū)光

（1.隴川縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南德宏 678700；2.梁河縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南德宏 678700；3.德宏州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南德 678400）

布魯氏菌病（又稱(chēng)布魯菌病，簡(jiǎn)稱(chēng)布病）是由布魯氏菌感染引起的一種人畜共患疾病。患病的羊、牛等疫畜是布病的主要傳染源，布魯氏菌可以通過(guò)破損的皮膚黏膜、消化道和呼吸道等途徑傳播。急性期病例以發(fā)熱、乏力、多汗、肌肉、關(guān)節(jié)疼痛和肝、脾、淋巴結(jié)腫大為主要表現(xiàn)。慢性期病例多表現(xiàn)為關(guān)節(jié)損害等。布病是我國(guó)《傳染病防治法》規(guī)定的乙類(lèi)傳染病。

傳染源：羊在國(guó)內(nèi)為主要傳染源，其次為牛和豬。傳染途徑：牧民接羔為主要傳染途徑，獸醫(yī)為病畜接生也極易感染。此外，剝牛羊皮、剪打羊毛、擠乳、切病毒肉、屠宰病畜、兒童玩羊等均可受染，病菌從接觸處的破損皮膚進(jìn)入人體。實(shí)驗(yàn)室工作人員常可由皮膚、黏膜感染細(xì)菌。進(jìn)食染菌的生乳、乳制品和未煮沸病畜肉類(lèi)時(shí)，病菌可自消化道進(jìn)入體內(nèi)。此外，病菌也可通過(guò)呼吸道黏膜、眼結(jié)膜和性器官黏膜而發(fā)生感染。易感人群：人群對(duì)布魯菌普遍易感。2010年12月間，某大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院使用了不具檢疫合格證明、未經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)檢疫的實(shí)驗(yàn)山羊，導(dǎo)致從2011年3月14日至5月間，27名學(xué)生和1名教師相繼確診感染布病。因此很有必要制備出對(duì)人體無(wú)感染能力的布魯氏菌病假陽(yáng)性血清，用于實(shí)驗(yàn)比對(duì)、教學(xué)示范和基層培訓(xùn)。

1 材料與方法

1.1 材料

布病陰性牛羊血清，真空采血管（普通生化管、抗凝管），布病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原，布病試管凝集試驗(yàn)抗原。

1.2 使用抗凝管采取布病陰性牛羊血液

使用抗凝管采血（布病陰性牛10頭，羊5只），分離血清后編號(hào)為B1-B10，C1-C5。

1.3 虎紅平板凝集試驗(yàn)

將分離到的陰性血清使用虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，記錄檢測(cè)結(jié)果。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

B1～B10和C1～C5號(hào)血清和布病抗原混合后3min內(nèi)均出現(xiàn)凝集（見(jiàn)表1、表2）：

表1 虎紅平板凝集試驗(yàn)結(jié)果（牛）

表2 虎紅平板凝集試驗(yàn)結(jié)果（羊）

3 討論

在一次采樣過(guò)程中由于疏忽未帶普通生化管，而只準(zhǔn)備了抗凝管，由于抗凝管也可以分離出血清就使用抗凝管進(jìn)行采血，在隨后的虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)全部都是陽(yáng)性，重新用普通管采血后進(jìn)行復(fù)檢，結(jié)果全部陰性，因此判定為假陽(yáng)性。鑒于布魯氏菌病是人畜共患病，開(kāi)展這個(gè)實(shí)驗(yàn)具有高危險(xiǎn)性，經(jīng)過(guò)反復(fù)思考，這個(gè)小錯(cuò)誤恰好可以被我們利用。因此我們對(duì)這種現(xiàn)象反復(fù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)采集健康牛羊的抗凝血均檢測(cè)到布魯氏菌病抗體，為布魯氏菌病假陽(yáng)性。這種血清來(lái)源廣泛并且可以大量制備，用于實(shí)驗(yàn)比對(duì)、教學(xué)示范和基層培訓(xùn)中，既可以起到示范作用，又能保障參與人員的安全。