劍川縣老君山鎮烏骨羊小反芻獸疫免疫效果的調查與分析

施劍春 劉 青 鄧衛東

（1.大理市畜牧工作站，云南大理 671000； 2.彌渡縣彌城鎮畜牧獸醫站，云南彌渡 675600；3.云南農業大學 動科院，云南昆明 650201）

小反芻獸疫（paste debs pests ruminants，PPR）俗稱羊瘟，又名小反芻獸假性牛瘟（pseudo rinderpest）、肺腸（gastroenteritis）、口炎肺腸炎復合癥（gastro-enteritis complex），是由小反芻獸疫病毒引起的一種急性病毒性傳染病。在自然條件下主要感染綿羊、山羊和美國白尾鹿等小反芻動物，主要感染小反芻動物，以發熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征。該病作為一種重大的跨國界傳播性動物疫病，世界動物衛生組織（OIE）將其列為必須報告的動物疫病，在我國被列為一類動物疫病，PPR 主要通過直接接觸傳染，患病動物的排泄物和分泌物是主要傳染源，尤其是感染后隱蔽帶毒的羊更為危險。易感動物發病率可達100%，嚴重暴發時，死亡率可達100%。我國在2007年首次在西藏發現該病以來，先后在新疆、貴州、湖南以及黑龍江等地暴發流行，給當地養羊業造成了巨大經濟損失，2014年4月，云南首次暴發PPR疫情。該病是OIE 法定報告動物疫病，也是全球計劃根除的動物疫病。《國家中長期動物疫病防治規劃（2012-2020）》將PPR 列為重點防范的外來動物疫病，并擬在2016～2020 年間根除該疫病。目前，該病尚無有效治療方法，主要通過早期診斷和疫苗免疫進行控制。

老君山鎮位于劍川縣西北部，東依老君山，西靠雪斑山，南鄰馬登鎮，北與怒江蘭坪縣相連，是大理州和劍川縣對外交往的一個重要“窗口”。老君山鎮面積238km2，鄉政府駐富樂村，海拔2450m，年均溫10℃，年均降水量960mm。直距金華鎮32km，轄10個行政村、31個自然村，有白、彝、傈僳等民族。畜牧業除了主要以生豬、家禽、黃牛養殖為主以外，還有一種地方稀有物種資源—烏骨羊，2017年全鎮烏骨羊存欄約1200只，市場價平均4000～5000元/只，若有疫情發生，會給當地養殖戶帶來嚴重的經濟損失，同時，世界各國對畜禽遺傳資源的保護與開發利用均給予了高度重視，因此，特開展此次烏骨羊小反芻獸疫免疫效果評價調查，用阻斷ELISA方法檢測小反芻獸疫抗體[11-12]，為切實掌握與評估老君山鎮烏骨羊小反芻獸疫免疫效果和制定防控措施提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 疫苗與檢測劑

小反芻獸疫疫苗是新疆天康畜牧生物技術股份有限公司生產的PPR 弱毒活疫苗，批準文號：獸藥生字（2016）310014026；檢測試劑為中國動物衛生與流行病學中心（青島）提供的小反芻獸疫阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒，批號為：201709。

1.2 試驗動物

2017年5月和11月分別抽取劍川縣君山鎮轄區內臨床無小反芻獸疫癥狀且已經免疫過小反芻獸疫疫苗的4個養殖場共240份健康烏骨羊血清（其中烏骨綿羊128份、烏骨山羊112份），離心分離血清，編號待檢，-20℃保存。兩次采集的羊只固定不變，血清抗體檢測期間試驗動物不對外出售。

1.3 儀器

單道移液器、多道移液器、生化培養箱、洗板機、酶標儀、普通離心機、一次性移液器吸頭等均由云南省動物疫病預防控制中心實驗室提供。

1.4 試驗方法

用阻斷ELISA抗體檢測試劑盒說明書進行檢測。

① 在A1 和B1 抗原包被孔中加入陽性血清50μl/孔，在C1和D1抗原包被孔中加入陰性血清50μl/孔，在E1和F1 抗原包被孔中加入稀釋液50μl/孔，在樣品孔中加入稀釋液25μl/孔，在樣品孔中再加入分別對應的待檢血清25μl/孔。

② 37℃孵育60 min。

③ 棄去反應孔中的液體，每孔用洗滌液清洗4次，洗滌液（×1）300μl/ 孔，每次除去洗滌液后，在吸水紙上拍打，除去殘留的液體，最后一次拍干。

④ 加酶結合物按1∶5 倍稀釋酶標單抗，每孔加50μl/孔，37℃孵育30 min。

⑤ 重復步驟③。

⑥ 每孔加底物溶液50μl，室溫避光10～15 min。

⑦ 每孔加終止液50μl，用酶標儀在450 NM 波長下測定各孔OD450NM值。

1.5 結果判定

當陽性對照阻斷率（PB）大于60，陰性對照阻斷率（PB）小于或等于40，試驗有效。計算待檢樣品阻斷率（PB），待檢樣品阻斷率（PB）大于50 判為陽性，小于等于50 則判為陰性。統計陽性樣品數即為免疫合格數。

2 結果

2.1 血清抗體檢測結果

（1）兩次檢測都是采集了固定不變的240只相同的烏骨羊的血清，其中第一次（免疫后6個月）抗體陽性量222份，平均陽性率92.5%；第二次（免疫后12個月）抗體陽性量210份，平均陽性率87.5%（見表1）。

（2）同一次檢測結果顯示，不同品種血清抗體平均陽性率差不多，其中免疫后6個月的烏骨綿羊平均陽性抗體率92.19%，烏骨山羊平均陽性抗體率92.86%；免疫后12個月的烏骨綿羊平均陽性抗體率85.94%，烏骨山羊平均陽性抗體率89.29%（見表1）。

表1 小反芻獸疫血清抗體檢測結果 只、%

2.2 免疫效果調查

2.2.1 疫情調查

免疫前，檢測所采集的240只烏骨羊群，均未出現疑似小反芻獸疫臨床癥狀，免疫后至今，轄區內也未發生疑似小反芻獸疫病例。

2.2.2 不良反應調查

240只羊群，在接種小反芻獸疫疫苗24h后未出現不采食等不良現狀，抽測20只羊的體溫位38.4℃～39.2℃之間，體溫正常；免疫24d后均未出現流產、死亡的現象。

3 結果分析

檢測結果顯示，不同品種不同檢測時間的血清抗體陽性率都在70%以上，達到國家規定的大于70%]的標準，調查結果顯示免疫后免疫羊群未出現疑似小反芻獸疫病例，無不良反應，由此可以推斷全鎮烏骨羊小反芻獸疫疫苗效果比較良好，適應強，副作用小。小反芻獸疫抗體可持續時間長達12個月，后期情況還需進一步觀察，關鍵是必須對免疫后的羊群定期進行采樣監測，根據免疫抗體的消長水平來確定免疫時間。

4 討論

（1）從兩次檢測結果來看，發現小反芻獸疫血清抗體合格率都達到了國家農業部獸醫局提出抗體合格率不低于70%的要求，說明免疫效果整體較好，基本上構建了有效的免疫屏障。

（2）本次使用新疆天康畜牧生物技術股份有限公司的PPR 活疫苗對本轄區內的健康烏骨羊只進行免疫接種，接種后未見PPR新病例和不良接種反應，表明PPR 活疫苗的副作用小，免疫效果好，安全可靠。

（3）從中可以發現近年來當地政府和畜牧獸醫主管部門對動物疫病防控方面比較重視，結合本地區和周邊動物疫病流行情況制定科學有效的免疫方案，宣傳比較到位，切實做好動物疫病防控工作；防疫人員能夠按照免疫注意事項就行免疫操作，操作水平較高；養殖場管理人員的依法防疫、自覺防疫意識強，積極配合主管部門開展好轄區內的動物疫病防控工作，同時還反映出飼養環境和管理水平等能夠跟得上規模化養殖的要求。

（4）從羊群品種來說，烏骨山羊的免疫抗體平均轉陽率比烏骨綿羊稍微高一些，目前推測可能是烏骨山羊對PPR病毒易感性較高所致。根據有關報道指出，山羊注射PPR疫苗后產生的抗體效果要顯著高于綿羊。因此，不同羊群品種注射疫苗后所表現出來的免疫應答效果也不盡相同。

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