二甲雙胍聯合利拉魯肽對多囊卵巢大鼠炎性因子及性激素水平的影響

曾濱陽，孫玉坤，史麗麗，康景佳，趙 興，黃海東，張珊珊，楊月麗

多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)常伴有月經紊亂、高雄激素、胰島素抵抗等表現，在高雄激素的長期刺激下易出現子宮內膜癌，胰島素抵抗易誘發糖尿病[1]。PCOS的發病率(育齡期婦女)為5%～10%，胰島素抵抗、高雄激素血癥是其相關并發癥的核心點所在，既往PCOS僅僅被認為是一種激素紊亂狀態，但是近年來的研究證實PCOS同時存在慢性炎性反應，慢性炎性反應是激素紊亂的啟動因素，能誘發胰島素抵抗、卵巢多囊樣改變、雄激素分泌升高[2]。此外，長期臨床治療經驗顯示該類患者進行抗炎藥物干預治療能很好的糾正激素水平紊亂狀態、糖脂代謝[3]。利拉魯肽是胰高血糖素樣肽-1(glucagon likepeptide-1，GLP-1)類似物，是一種新興降糖藥物，有著類似于二甲雙胍的糾正胰島素抵抗樣作用，對肥胖型2型糖尿病患者降低體重的起效較二甲雙胍更快[4]。既往研究證實利拉魯肽能改善控制卵巢表面炎性反應來糾正PCOS大鼠的激素紊亂及其糖脂代謝異常，且對大鼠體重無任何影響[5]。本研究通過對利拉魯肽聯合二甲雙胍對PCOS大鼠臨床療效進行觀察，以更好地指導臨床實踐。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選擇100只近交系健康性成熟的Wistar雌性大鼠(大連醫科大學實驗動物中心提供)；周齡8～10周，體重210～230 g，成功造模成PCOS大鼠80只，按照隨機數字表法分為對照組和干預組，每組40只，最后順利完成研究的大鼠67只(對照組33只，干預組34只)，順利完成研究的大鼠治療前基本資料差異無統計學意義(P>0.05，表 1)。

分類對照組(n=33)干預組(n=34)t/χ2P周齡(周)9.42±1.459.46±1.430.5480.493體重(g)236.57±42.32235.54±36.540.4580.573完成33(82.50)34(85.00)0.0920.762未完成7(17.50)6(15.00)

1.2 主要試劑 二甲雙胍(原料藥)由美國百時美施貴寶公司提供；注射用脫氫表雄酮為武漢華美科技集團有限公司產品；利拉魯肽注射液為丹麥諾和諾德制藥有限公司生產。

1.3 主要儀器 ASD-310S型低溫離心機為美國Sigma公司產品。

1.4 方法

1.4.1 PCOS大鼠動物模型的建立 參照文獻[6]方法建立PCOS大鼠動物模型。

1.4.2 PCOS大鼠處理 (1)大鼠處理：對照組大鼠給予灌胃二甲雙胍粉末[270 mg/(kg·d)]，灌胃前用0.9%氯化鈉注射液配成糊狀，并在背部注射相同體積的0.9%氯化鈉注射液，干預組大鼠在給予二甲雙胍灌胃的基礎上，同時給予背部皮下注射利拉魯肽注射液[5 μg/(kg·d)]，注射前用10倍

的0.9%氯化鈉注射液稀釋。干預組與對照組均連續給藥28 d(相當于7個動情期)，在給藥期間兩組大鼠均給予頸背部皮下注射脫氫表雄酮按照6 mg/(100 g·d)(防止大鼠恢復排卵)[4]；(2)指標檢測：治療前后抽取兩組大鼠尾緣靜脈血進行相關指標的檢測，炎性因子[白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、C反應蛋白(CRP)]、激素水平[卵泡雌激素(FSH)、黃體生成素(LH)、雌激素(E2)、睪酮(T)]。檢測方法均嚴格按照試劑盒說明進行。注：根據人與大鼠體重比進行換算得出大鼠給藥劑量。

2 結 果

2.1 炎性因子檢查結果 與治療前比較，兩組大鼠治療后IL-6、TNF-α、CRP水平均降低，差異有統計學意義(P<0.05)；治療前兩組IL-6、TNF-α、CRP水平差異無統計學意義，干預組治療后低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05，表2)。

分組治療前治療后tPIL-6(g/L) 對照組34.43±6.3228.34±6.21-7.4370.000 干預組33.43±7.3223.88±7.32-8.4380.000TNF-α(ng/L) 對照組34.62±6.3518.54±3.21-7.3430.000 干預組34.68±5.5413.24±2.23-12.4380.000CRP(mg/L) 對照組1.81±0.251.25±0.23-6.5480.000 干預組1.77±0.241.10±0.19-8.3420.000

2.2 激素水平檢查結果 與治療前比較，兩組大鼠治療后LH、LH/FSH、E2、T水平均降低，FSH水平升高，差異有統計學意義(P<0.05)；治療前兩組LH、LH/FSH、E2、T、FSH水平差異無統計學意義，干預組治療后LH、LH/FSH、E2、T低于對照組，FSH高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05，表3)。

表3 兩組多囊卵巢大鼠治療前后外周血清激素水平比較

3 討 論

目前，對PCOS的發病機制仍存在較大爭議，但對激素紊亂、慢性炎性反應、胰島素抵抗這三點已經達成共識，且三者間相互影響，在疾病的發生、發展中起著重要作用[7]。二甲雙胍是治療PCOS的較常用藥物，能改善胰島素抵抗，糾正血脂代謝異常、炎性反應[8]。近年來，隨著GLP-1類藥物在PCOS治療中的作用被發現，其應用越來越廣泛[4]。利拉魯肽是一種腸促胰島素效應的新一代降糖藥物，通過刺激葡萄糖依賴的胰島素合成和分泌從而改善胰島β細胞功能。與此同時，它能降低胰島血糖素分泌、抑制食欲，與傳統胰島素和磺脲類降糖藥相比，它不增加體重，作用效果與二甲雙胍相似，但對體重的影響較二甲雙胍的作用更早[4]。

李雪俠等[5]發現，二甲雙胍聯合利格列汀可很好地改善PCOS患者卵巢排卵功能、激素紊亂、血脂代謝異常和炎性反應。PCOS被認為是一種亞臨床炎性反應，它不同于傳統的急慢性炎性反應，較少出現常見的紅腫熱痛炎性反應，也無明顯的全身癥狀，但外周血清炎性因子異常。亞臨床炎性反應能導致全身毛細血管內皮損傷繼而出現動脈粥樣硬化，損傷胰島β細胞導致胰島素抵抗，損傷卵巢導致多囊樣改變及激素分泌異常，因此改善炎性反應是治療的關鍵[9]。唐僑飛等[3]發現，PCOS患者外周血清CRP濃度明顯高于健康人，且有的認為IL-6作為一種廣泛表達的前炎癥細胞因子，在肥胖型PCOS患者外周血清中濃度較高，與胰島素抵抗指數呈正相關[10]；PCOS患者外周血清CRP、TNF-α、IL-6與LH呈正相關，而與FSH無相關關系[11]。

本研究通過建立PCOS大鼠模型，將二甲雙胍與利拉魯肽聯合使用進行藥物治療干預，以研究其對炎性因子、激素水平的影響，以證實兩種藥物能否充分發揮其各自優勢而達到其治療的目的。結果顯示：經過治療后外周血清CRP濃度均低于治療前(P<0.05)，且干預組低于對照組(P<0.05)，結果與唐僑飛等[3]應用葉酸治療PCOS患者后外周血清CRP濃度降低一致。CRP與IL-6在兩組大鼠中經過28 d治療后均降低(P<0.05)，且干預組低于對照組(P<0.05)。治療后兩組大鼠外周血清LH、LH/FSH、E2、T水平均低于治療前(P<0.05)，且干預組低于對照組(P<0.05)；治療后兩組大鼠外周血清FSH水平高于治療前(P<0.05)，且干預組高于對照組(P<0.05)。本研究通過PCOS大鼠模型實驗證明聯合用藥有效，為臨床實踐提供了一定的指導。今后將進一步開展臨床研究，通過聯合用藥，降低炎性因子、改善激素紊亂，以達到更好的治療效果。

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