新疆某養雞場禽白血病流行病學調查及凈化效果監測

李澤宇，齊亞銀

（1.石河子大學，石河子 832003；2.新疆農業職業技術學院，昌吉 831100）

0 引言

禽白血病是一種腫瘤性疾病，由禽白血病病毒和禽肉瘤病病毒引起。目前，在世界大多數養雞業發達國家已基本控制，但在我國本病的感染和流行仍十分普遍，尤其是地方品系的雞群[1-2]。雞群感染此病會導致嚴重的損失[3]，一是產生腫瘤，導致雞群發病；二是出現系列并發癥，嚴重影響經濟效益；三是還可以導致雞群免疫抑制，造成繼發感染等。

近年來，新疆養雞場禽白血病發病較多，給養雞業造成了較大的經濟損失。為了解新疆某規模化肉種雞場禽白血病的感染情況，分兩批從4棟雞舍采集血清800份，每批400份，進行ALV-J 亞群抗體檢測，并對雞場采取了凈化措施。現將監測及凈化情況報告如下。

1 材料與方法

美國愛德士（IDEXX）公司生產的白血病ELISA抗體檢測試劑盒、自動酶標儀（美國BioTek儀器有限公司）、微量移液器（eppendorf公司）、恒溫培養箱（北京市光明醫療儀器廠）、振蕩器、高壓滅菌鍋、離心機等實驗所需儀器設備。

2 實驗樣品

2.1 血清樣品的準備

采集新疆昌吉市某規模化肉種雞場血清數共800份，分兩批采集，每批400份。第一批采集14～15周齡的雞群，其中，14周齡采集A、B圈血清各100份、15周齡采集C、D圈血清各100份。第二批采集21～22周齡的雞群，其中，21周齡采集A、B圈血清各100份、22周齡采集C、D圈血清各100份。

2.2 樣品采集時間、方法及樣品儲存

血清共分8次均等采集，分別為2016年7-8月、2016年9-10月；主要采集方法為翅靜脈采血法，血液采集后用離心機提取血清即樣品，置于-20℃冰箱儲存備用。

3 試驗方法與判定

3.1 血清稀釋

樣品：檢測前用樣品稀釋液將被檢樣品進行500倍稀釋。

對照：注意不要稀釋對照。不同的樣品要注意換吸頭。在將樣品加入檢測板前要將樣品充分混勻。

3.2 試驗方法步驟

使用前，將所有試劑恢復到室溫，并將其混勻后再進行使用。

（1）標記：將抗原包被板取出并做好標記。

（2）加樣：在板的相應孔中，分別加入陰性對照、陽性對照和被檢樣品（已稀釋）各100 μL，加蓋后，在室溫下孵育30 min。

（3）洗板：將各孔的液體甩去，每個孔中加入350 μL的純水或超純水。第1次加入純水后浸泡2 min，然后將各孔的液體甩掉，以上步驟再重復4次（無需浸泡）。用吸水紙輕拍使之吸干。注意在每次洗滌之間和加下一種液體前不要讓板干燥或放置時間過久。

（4）加酶標抗體：每孔加入100 μL酶標抗體，室溫孵育30 min。

（5）洗板：重復（3）步驟。

（6）加底物液：每孔中加入100 μL的TMB底物，室溫下孵育15 min。

（7）加終止液：每孔中加入100 μL的終止液終止反應。

（8）讀數：測定并記錄各孔在650 nm波長的吸光值（A650）。

3.3 結果判定

（1）試驗結果需同時符合下列條件：

陽性對照平均OD值與陰性對照平均OD值之差大于0.100。

陰性對照平均OD值小于或等于0.150。

（2）判定：

陽性對照和樣品的OD值應經陰性對照OD值校正。陽性對照：OD陽平均值－OD陰平均值，樣品：OD樣平均值－OD陰平均值；S/P=（OD樣平均值－OD陰平均值）/（OD陽平均值－OD陰平均值）。

S/P比值小于或等于0.60，判為陰性。S/P比值大于0.60（抗體滴度大于844），判為陽性，表明曾感染ALV-J。

4 凈化措施

該肉種雞場是父母代種雞場，飼養管理實行嚴格的全進全出飼養方式。針對檢測發現的問題，采取了嚴格的淘汰措施，加強雞舍環境衛生管理與消毒，加強雞舍通風，控制人員出入等措施。

4.1 淘汰措施

對檢測中發現的ALV-J亞群陽性雞只全部淘汰，徹底消除傳染來源。同時，在日常飼養管理過程中，加強對雞群的觀察，對有臨床癥狀的病雞及已死亡雞只及時淘汰，并進行無害化處理。

4.2 加強飼養管理

為保證雞群的營養狀況，采用全價飼料喂養，確保雞只營養均衡。

4.3 加強環境控制

嚴格執行養雞場的衛生管理制度，對出入雞場人員采用紫外線全身消毒、新鮮石灰水消毒等，對進出車輛采取石灰水消毒；每天對雞舍環境及場內設施設備進行消毒，保持雞舍內空氣的流通，及時清除糞便。

5 結果與分析

5.1 第一次J亞群雞白血病血清抗體水平分析

從表格可以看出（表1）：第1次對某肉種雞場A（14周齡）、B（14周齡）、C（15周齡）、D（15周齡）4棟雞舍不同日齡雞群400份血清的檢測，結果陽性總數為94只，陽性率為23.50%，平均OD值為0.273，其中A、B、C、D 4個圈舍陽性率分別為26.00%、21.00%、28.00%、19.00%。

通過統計可知，A、B、C、D 4棟圈舍檢測樣本的平均OD值分別0.287、0.315、0.275、0.216，總體OD值為0.273。

表1 昌吉市某規模化肉種雞場ALV-J血清抗體水平及陽性率匯總表

5.2 第二次J亞群雞白血病血清抗體水平分析

從表格可以看出（表2）：第2次對某肉種雞場A（21周齡）、B（21周齡）、C（22周齡）、D（22周齡）4棟雞舍不同日齡雞群400份血清的檢測，結果陽性總數為31只，總陽性率為7.75%，平均OD值為0.109，其中A、B、C、D 4個圈舍陽性率分別為9.00%、10.00%、7.00%、5.00%。

通過統計可知，A、B、C、D各圈舍的OD值分別0.117、0.129、0.098、0.090，總體OD值為0.109。

6 分析與討論

從結果分析可知，對昌吉市某規模化肉種雞場4棟雞舍不同日齡的雞群分兩批進行檢查，每次各檢測400份血清。第1次檢測時間為14～15周齡，分別檢測了A、B、C、D4棟雞舍各100只雞，結果陽性總數為94只，總陽性率為23.50%，平均OD值為0.273，其中A、B、C、D4棟雞舍陽性率分別為26.00%、21.00%、28.00%、19.00%。

表2 昌吉市某規模化肉種雞場ALV-J血清抗體水平及陽性率匯總表

針對此種情況，雞場采取了嚴格的淘汰措施，對第1批檢測出為陽性的種雞進行淘汰；嚴格觀察雞群，及時淘汰病雞、死雞；加強雞場消毒、通風，7周后再次進行檢測，陽性率明顯下降，4棟雞舍不同日齡（21～22周）雞群400份血清的檢測，結果陽性總數為31，陽性率為7.75%，下降了15.45個百分點，平均OD值為0.109。其中A、B、C、D4棟雞舍陽性率分別為9.00%、10.00%、7.00%、5.00%。由23.50%下降到7.75%。

參考文獻

[1] 崔治中. 我國雞群 J 亞群白血病流行的過去、現在和將來及其防控：對我國動物疫病防控的啟示[J].現代畜牧獸醫，2015(1)：30-32.

[2] 崔治中，孫淑紅，趙鵬，等.對種雞場禽白血病凈化方案的建議[J].中國家禽，2014(1)：3-6.

[3] 馬秀麗.雞病毒性免疫抑制病的發展趨勢與防制措施[J].山東畜牧獸醫，2000（2)：36-38.