煎煮時間對葛根中葛根素含量的影響

黃曉巍，楊明慧，張丹丹，王晉冀，王紫薇，許佳明

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117）

葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata Ohwi的干燥 根，性涼、味辛甘，具有生津止渴、發(fā)表透疹、解肌退熱等功效[1]。臨床用于治療表證發(fā)熱，常配伍柴胡、羌活、黃芩等藥；治療風(fēng)熱感冒等證，可與菊花、薄荷、蔓荊子等解表藥配伍使用[2-3]。本研究通過觀察不同煎煮時間對葛根煎煮液中葛根素含量變化的影響，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 實驗材料

LC-2030島津高效液相色譜儀（日本島津公司），MS205DU十萬分之一天平（梅特勒-托利多集團(tuán)），HZT-A百分之一電子天平（杭州鼎鑫稱重設(shè)備有限公司），DHG-9245A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司），KQ3200B 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），HH-Ⅱ恒溫水浴鍋（上海致金儀器設(shè)備有限公司）及微孔濾膜（0.45 μm）。

葛根素對照品（貨號SP8690，北京索萊寶科技有限公司），葛根（批號 20151201，安徽新興中藥材飲片有限公司）經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)翁麗麗老師鑒定為合格品，無水乙醇（北京化工廠），甲醇（色譜純，山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司），水（娃哈哈純凈水）。

2 實驗方法與結(jié)果

1.1 對照品溶液的制備 精密稱取葛根素的標(biāo)準(zhǔn)品2.00 mg置于25 mL容量瓶中，用30%乙醇溶解并定容，稀釋成含葛根素0.08 mg/mL的對照品溶液。

1.2 供試品溶液的制備[4-6]取約100 g葛根，加入1000 mL水浸泡30 min，分別煎煮20，25，30，35，40，45，50，55，60 min，把9個煎煮時間的葛根煎煮液濃縮干燥（80oC）至浸膏（出膏率約25%）研磨成粉末（過3號篩），取該粉末約0.1 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加入30%乙醇50 mL，精密稱定重量，回流0.5 h，放冷至室溫，用30%乙醇補(bǔ)足損失的重量，先搖勻后濾過，用0.45 μm微孔濾膜過濾即得出9種不同煎煮時間的葛根供試品溶液。

2.3 色譜條件[7]色譜柱：Inertsil ODS-3液相色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：甲醇-水（25：75），柱溫30℃，流速1 mL/min，檢測波長250 nm，進(jìn)樣量10 μL。在選定的色譜條件下，葛根素色譜峰與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)不低于3000，拖尾因子符合要求。

2.4 線性考察[8]精密量取葛根素標(biāo)準(zhǔn)品5.00 mg置于5 mL容量瓶中，用30%乙醇溶解并定容，稀釋成含葛根素1 mg/mL的對照品溶液，以此液為母液，分別精密移取，制成濃度分別為0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg/mL的葛根素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按“2.4”項下色譜條件進(jìn)樣，以進(jìn)樣量X（μg） 為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出葛根素的回歸方程為：Y= 412236X+ 9349.5，R2 = 0.9998。結(jié)果表明，葛根素進(jìn)樣量在1～5 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實驗[9-10]精密吸取同一葛根對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。記錄峰面積積分值分別為5302105、5301946、5310027、5308579、5320473、5315724按峰面積計算葛根素的RSD（n= 6）為0.14%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實驗 精密吸取煎煮35 min的葛根樣品溶液 10 μL，在 0，4，8，12，24，48 h 進(jìn)樣測定。以峰面積積分值為指標(biāo)測定其穩(wěn)定性，依次為17163433、17307293、17214107、17196065、17232502、17297657，按峰面積計算葛根素的RSD（n= 6）為0.33%。表明葛根樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性實驗[11]取按照“2.2”項下煎煮35 min的葛根樣品溶液6份，每份進(jìn)樣10 μL，以回歸方程計算葛根素的含量，上述含量平均值為52.904 mg/g，RSD（n= 6）為1.03%。

2.8 加樣回收率實驗[12-13]精密稱取煎煮35 min已知含量為52.583 mg/g的葛根浸膏6份，每份約0.005 g，分別加入相當(dāng)于樣品中葛根素含有量100%的適量的對照品溶液。按“2.2”項下的方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10 μL測定，計算葛根素的回收率和RSD（n= 6）為100.6%（RSD = 1.00）。測定結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測定 樣品依法測定，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率實驗

表2 不同煎煮時間葛根中葛根素含量

3 討論

《傷寒雜病論》[14]中張仲景善用葛根治療風(fēng)寒表證，“葛根湯，以水一斗，先煮葛根，減二升，去白沫，納諸藥。”現(xiàn)代研究表明，葛根中有效成分葛根素屬于異黃酮結(jié)構(gòu)，其脂溶性、水溶性以及生物利用度較低，將葛根“先煎”有宜于有效成分溶出[15-16]。而在中醫(yī)院實際煎煮過程中，對葛根飲片煎煮并沒有“先煎”要求。本實驗研究結(jié)果表明，葛根在煎煮35 min時葛根素溶出率最高，而解表類中藥煎煮時間要求20 min，故葛根應(yīng)以先煎15 min為宜。

在煎煮35 min后，葛根素含量降低，可能是因為煎煮時間對中藥某些成分含量的影響較大，在煎煮過程中，隨著煎煮時間的不同，單味藥的各組分之間也可能產(chǎn)生復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)，這些反應(yīng)最終影響中藥中某些成分的含量[17-18]。但有實驗研究表明，“先煎”或與其他藥物同時煎煮對葛根素的溶出影響不大[19]，經(jīng)分析得出可能的原因是煎煮方法、飲片規(guī)格、炮制方法等，導(dǎo)致最終實驗結(jié)果的差異。所以筆者認(rèn)為葛根飲片應(yīng)“先煎”，且“先煎”時間以15 min為宜。明確葛根飲片煎煮方法，能夠更好的指導(dǎo)中藥臨床用藥，從而提高臨床療效。

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