低密度脂蛋白受體基因表達(dá)與高膽固醇血癥的相關(guān)性分析

黎運(yùn)西 馮晨浩 嚴(yán)達(dá)尊 謝景齊 楊杰明 蔡雪

低密度脂蛋白受體（LDLR）是一種細(xì)胞介導(dǎo)低密度脂蛋白的攝取和代謝的一類跨膜蛋白［1］。迄今共發(fā)現(xiàn)有6類LDLR家族成員：LDLR、極低密度脂蛋白受體（VLDLR）、卵細(xì)胞卵黃生成受體（OVR）、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白（LRP）、腎炎抗原（Gp330）、Megalin。其中LDLR、VLDLR、OVR和LRP主要結(jié)合含有Apo B、Apo E的脂蛋白，參與膽固醇、甘油三酯的代謝，與脂蛋白代謝密切相關(guān)，在動(dòng)物體內(nèi)蛋白吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和沉積的代謝中發(fā)揮重要功能。本文探討人LDLR基因表達(dá)水平在高膽固醇血癥患者中的變化情況及其與血脂水平的相關(guān)性，為該病預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2016年1月至12月本院高膽固醇血癥患者24例（觀察組），男13例，女11例；平均年齡（60±12）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：血清膽固醇含量＞5.72mmol/L、無免疫性疾病、心肌缺血、肝、腎、甲狀腺功能障礙和癌癥、無服用激素類、免疫抑制類藥物史者。另選擇本院體檢健康者23例為對照組。男10例，女13例；平均年齡（53±12）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法 （1）生物學(xué)檢測：用希森美康XN1000血球分析儀檢測其白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞。用貝克曼5821全自動(dòng)生化分析儀檢測血清總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、血清載脂蛋白A1（Apo A1）、血清載脂蛋白B（Apo B）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、血糖（GLU）等。（2）LDLR基因的相對表達(dá)量檢測：以含EDTA-K2抗凝全血為原料，使用RNAprep Pure血液總RNA提取試劑盒（離心柱型）提取RNA，使用FastQuant cDNA第一鏈合成試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA。用實(shí)時(shí)熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）檢測LDLR基因表達(dá)水平，應(yīng)用中山大學(xué)達(dá)安基因所提供的核酸擴(kuò)增儀，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶為內(nèi)參系統(tǒng)，采用25μl的以下反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增：2×SuperReal PreMix Plus12.5μl、正向引物（10μM）1μl、反向引物（10μM）1μ、lcDNA 模板 2μl、50×ROX Reference Dye 2.5μl、RNanse-free ddH2O 6μl。擴(kuò)增模式：95℃孵育15min預(yù)變性，激活大部分HotStar Taq DNA聚合酶，95℃條件下變性10s、60℃退火20s、72℃延伸31s為一個(gè)循環(huán)進(jìn)行40個(gè)循環(huán)擴(kuò)增，并在每一個(gè)循環(huán)72℃延伸末期進(jìn)行熒光信號采集。40個(gè)循環(huán)后通過軟件分析獲取CT值，并用公式算出基因模板的相對表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。正態(tài)分布計(jì)量資料以（x±s）表示，用t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布計(jì)量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)表示，用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。正態(tài)變量用pearson相關(guān)分析，非正態(tài)變量則用Spearman等級相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組各檢測項(xiàng)目比較 與對照組比較，高膽固醇血癥患者的白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（N）、GLU、TC、TG、LDL-C、ApoB、LDLR基因相對表達(dá)量顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。見表 1。

表1 兩組各檢測項(xiàng)目比較（x±s）

2.2 高膽固醇血癥患者血脂水平與LDLR水平的相關(guān)性 高膽固醇血癥患者TG水平、ApoA1水平與LDLR基因的相對表達(dá)量呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表2。

表2 觀察組血脂與LDLR水平的相關(guān)性

3 討論

本資料結(jié)果表明，高膽固醇血癥患者的TC、TG、LDL-C、ApoB升高可能與LDLR基因相對表達(dá)量改變有關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道，新型降血脂藥通過作用于LDLR而發(fā)揮降血脂作用［2］，提示可通過改變LDLR基因表達(dá)水平的方式進(jìn)行血脂調(diào)節(jié)。另有文獻(xiàn)報(bào)道，嚴(yán)重動(dòng)脈粥樣硬化和高膽固醇血癥的小鼠缺乏黑皮素4型受體和低密度脂蛋白受體兩種物質(zhì)［3］，表明其可能機(jī)制為低密度脂蛋白受體水平的下降負(fù)反饋刺激低密度脂蛋白受體基因的表達(dá)升高。在俄羅斯，家族性高膽固醇血癥由低密度脂蛋白受體的c.1327 T＞C（p.W433R）突變引起［4］，而中國人家族性高膽固醇血癥患者的表征是低密度脂蛋白受體基因特有的w483x突變或前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9-resistant r410s基因突變［5-6］。

本資料結(jié)果顯示，高膽固醇血癥患者的白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞水平顯著升高，表明高膽固醇血癥患者出現(xiàn)與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的血管炎癥狀態(tài)。高膽固醇血癥患者LDLR基因的mRNA水平的上調(diào)與TG及ApoA1水平均呈正相關(guān)關(guān)系。其機(jī)制可能為TG水平升高和低密度脂蛋白受體水平的下降負(fù)反饋刺激低密度脂蛋白受體基因的mRNA水平的上調(diào)，協(xié)同ApoA1水平的上調(diào)共同調(diào)節(jié)TC和LDL-C水平。

總之，高膽固醇血癥患者LDLR基因的mRNA水平的升高與血脂水平密切相關(guān)，LDLR基因表達(dá)參與高膽固醇血癥降脂作用。

［1］ 李宏,袁施彬.低密度脂蛋白在脂蛋白代謝中的作用及其調(diào)控.中國畜牧雜志,2010,46(19):72-76.

［2］ Scharnagl H, M arz W. New lipid-lowering agents acting on LDL receptors.Curr Top Med Chem, 2005, 5 (3):233-242.

［3］ Lede V,Franke C,Meusel A,et al. Severe Atherosclerosis and Hypercholesterolemia in Mice Lacking Both the Melanocortin Type 4 Receptor and Low Density Lipoprotein Receptor. PLoS One, 2016,11(12): e0167888.

［4］ Korneva VA,Kuznetsova TY, Murtazina RZ,et al. The Familial Hypercholesterolemia Caused by a Novel Human Low Density Lipoprotein Receptor Gene Mutation c.1327 T＞C (p.W433R).Kardiologiia, 2017,57(2):12-16.

［5］ Jiang L,Sun LY, Pan XD,et al. Characterization of the unique Chinese W483X mutation in the low-density lipoproteinreceptor gene in young patients with homozygous familial hypercholesterolemia. J Clin Lipidol, 2016,10(3):538-546.

［6］ Susan-Resiga D,Girard E,Kiss RS,et al. The Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9-resistant R410S Low Density Lipoprotein Receptor Mutation. J Biol Chem, 2017,292,(5):1573-1590.