P16 Bmi-1和C-myc檢測在宮頸癌早期診斷中的應(yīng)用

鄭月萍 金敏 張興翔 王敏

宮頸癌（SCC）是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于乳腺癌。在世界范圍內(nèi)居女性惡性腫瘤第2位，在發(fā)展中國家居第1位［1］。正常宮頸組織進展為SCC約需8～12 年，但每年新發(fā)病例約13萬，占全世界總發(fā)病數(shù)的28%，中國每年約有2萬女性死于宮頸癌［2］。本文探討P16、Bmi-1和C-myc表達在宮頸癌早期診斷中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2014 年1 月至2016 年12 月本院宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）144 例（經(jīng)病理證實CINⅠ級55例、CINⅡ級48例、CINⅢ級41例）及宮頸癌（SCC）37例患者的宮頸活檢病理標(biāo)本，年齡22～76歲，平均年齡（41.5±16.0）歲。均未做化學(xué)、免疫及放射治療。另選取正常宮頸組織及慢性宮頸炎標(biāo)本30例為對照組，年齡25～70 歲，平均年齡（42.0±13.5）歲。所有研究對象均經(jīng)患者及其家屬同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法 P16 單克隆抗體試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；Bmi-1和C-myc 單克隆抗體試劑盒購自福州邁新公司。免疫組化SP法嚴(yán)格按照試劑盒要求進行操作，用已知陽性切片作陽性對照，PBS代替第一抗體作陰性對照。陽性表達及陰性表達判定標(biāo)準(zhǔn)：p16陽性染色為細胞核和/或胞漿，出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒：（-）：陽性細胞百分率＜10%；（+）：陽性細胞百分率10%～30%；（++）：陽性細胞百分率30%～50%；（+++）：陽性細胞百分率＞50%。Bmi-1陽性染色為細胞核和細胞質(zhì)，呈現(xiàn)出棕黃色：（-）：陽性細胞數(shù)＜10%；（+）：陽性細胞數(shù)10%～25；（++）：陽性細胞數(shù)26%～50%；（+++）：陽性細胞數(shù)＞50%。C-myc陽性染色為細胞核呈棕黃色著色：（-）：無陽性染色細胞或陽性細胞≤ 10%；（+）：陽性細胞 11%～ 30%；（++）：31%～60% ；（+++）：＞60%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P16、Bmi-1和C-myc在各組標(biāo)本中表達水平 P16、Bmi-1和C-myc在對照組標(biāo)本中表達陽性率顯著低于CIN及SCC組，CINⅠ組陽性率顯著低于CINⅡ、CINⅢ及SCC組；Bmi-1和C-myc 在CINⅡ組陽性率顯著低于SCC組，Bmi-1在CINⅢ組陽性率顯著低于SCC組（P＜0.05），見表1。

2.2 P16、Bmi-1和C-myc在37例SCC中的表達及其與臨床的關(guān)系 SCC患者P16、Bmi-1和C-myc表達陽性率與年齡無關(guān)（P＞0.05）；與臨床分期有關(guān)，Ⅰ～Ⅱ期表達陽性率顯著低于Ⅲ～Ⅳ期（P＜0.05）；P16在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.05），見表 2。

表1 P16、Bmi-1和C-myc在各組標(biāo)本中表達水平結(jié)果比較［n（%）］

表2 P16、Bmi-1和C-myc在SCC中的表達及其與臨床的關(guān)系［n（%）］

2.3 P16、Bmi-1和C-myc在SCC檢測中單獨和聯(lián)合檢測敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較 見表3。

表3 P16、Bmi-1和C-myc單獨和聯(lián)合檢測分析比較

3 討論

宮頸細胞學(xué)篩查法的普遍應(yīng)用，使SCC發(fā)生率及病死率明顯降低，但鑒于其有假陰性等局限性，可能造成宮頸癌的漏診和誤診，故可靠的生物性腫瘤標(biāo)記物對SCC的診斷更重要［3-5］。

P16基因是1994年Kamb等［6］在人染色體9p21區(qū)發(fā)現(xiàn)的第一個直接參與細胞周期調(diào)控的抑癌基因，其產(chǎn)物p16蛋白能特異性抑制CDK4的活性，從而阻止細胞從G1期進入S期，使細胞增殖受到抑制。P16基因以缺失、 突變等方式廣泛參與腫瘤的形成，檢測P16 基因有無改變對判斷宮頸萎縮、非典型鱗狀化生、SIL 具有十分重要的臨床意義［7-8］。王嬌等［9］研究認(rèn)為，P16 在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC組的陽性率各組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且 P16 在慢性宮頸炎中無表達，在宮頸低級別病變中以陽性表達為主，在宮頸高級別病變中以強陽性表達為主。沈蓉等［10］研究認(rèn)為P16蛋白在慢性宮頸炎組織中以陰性表達為主，而在 CINⅢ和浸潤癌組織中以過表達為主，p16蛋白在宮頸鱗癌及 CINⅢ中的表達顯著高于CIN Ⅰ -Ⅱ（P＜0.001）。

Bmi-1 是多疏基因（PcG）家族中核心成員之一，具有癌基因特性，目前被認(rèn)為是一種原癌基因，定位于10號染色體11區(qū)23帶，由十個外顯子和九個內(nèi)含子組成，全長4.9kb，編碼一個含326個氨基酸，相對分子量為36.9KD的核蛋白質(zhì)［11］。Bmi-1通過多種途徑參與細胞的自我更新、增殖、衰老和永生化，并且其高表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后及復(fù)發(fā)等一系列病理過程密切相關(guān)［12］。李嬌等［13］研究發(fā)現(xiàn)在正常宮頸組織中Bmi-1低表達，在宮頸病變中陽性表達率依次呈遞增趨勢，且CINⅢ組明顯高于CINⅠ組（P＜0.01），在SCC組織中陽性表達率顯著增高，進一步證實Bmi-1參與腫瘤的形成 。高翔等［14］研究認(rèn)為Bmi-1基因和蛋白在SCC中的表達顯著高于正常子宮頸組織，且分化程度低和（或）伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的SCC組織中Bmi-1的表達則越高，提示Bmi-1基因的異常表達與SCC的分化程度和轉(zhuǎn)移擴散密切相關(guān)，表明Bmi-1的過表達在SCC的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。

C-myc基因是一種癌基因，定位于染色體8q24，包含3個外顯子和2個內(nèi)含子。C-myc蛋白位于細胞核內(nèi)，是核內(nèi)特異性DNA結(jié)合蛋白，包含四個重要的功能結(jié)構(gòu)區(qū)（DNA結(jié)合區(qū)、核定位區(qū)、非特異性DNA結(jié)合區(qū)及轉(zhuǎn)錄激活區(qū)），與細胞周期的調(diào)控有關(guān)，參與DNA復(fù)制、細胞生成、增殖及分化等過程［15］。武海英等［16］研究結(jié)果認(rèn)為，隨宮頸病變級別的升高，C-myc基因的陽性表達率升高，且C-myc基因與宮頸癌的分化程度有關(guān)，證實C-myc 在SCC的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用，可作為判斷預(yù)后的一個重要指標(biāo)。施浩帆等［17］研究發(fā)現(xiàn)SCC中C- myc 陽性表達率100. 0%，明顯高于正常宮頸和 CIN 中的陽性表達率水平，表明C-myc 基因參與SCC的發(fā)生發(fā)展。

本資料結(jié)果表明，P16、Bmi-1和C-myc在對照組標(biāo)本中表達陽性率顯著低于CIN及SCC組，CINⅠ組陽性率顯著低于CINⅡ、CINⅢ及SCC組；Bmi-1和C-myc 在CINⅡ組陽性率顯著低于SCC組，Bmi-1在CINⅢ組陽性率顯著低于SCC組（P＜0.05）。P16、Bmi-1和C-myc在SCC組Ⅰ～Ⅱ期表達陽性率顯著低于Ⅲ～Ⅳ期，P16在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.05）。單獨檢測P16和Bmi-1敏感度為81.08%，C-myc敏感度為78.38%，三者聯(lián)合檢測能達89.19%，聯(lián)合檢測提高陽性檢出率。

總之，P16、Bmi-1和C-myc表達水平與SCC發(fā)生及發(fā)展相關(guān)，可作為宮頸CIN分級與SCC早期診斷的重要輔助指標(biāo)。

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