膿毒癥患者外周血FOXO3a TREM-1與PCT表達水平及其臨床意義

金宇蘭 周翔英 董甜甜 吳曉梁

膿毒癥是臨床中較為常見的全身炎癥反應綜合征，且感染是導致膿毒癥發生與發展的重要因素［1］。研究顯示，機體釋放過度炎癥介質，誘發機體出現免疫系統失調，是膿毒癥發病本質，在其病理過程中呈涉及諸多炎癥因子［2］。有研究認為血清降鈣素原（PCT）是人體內重要的重癥感染相關炎癥指標［3］。插頭蛋白O3a（FOXO3a）及髓系細胞觸發受體-1（TREM-1）是人體內重要的炎性介質及調控因子，膿毒癥患者危重程度與人體內如白細胞介素等多種細胞因子的表達量密切相關［4］。本文探討膿毒癥患者血中FOXO3a、TREM-1及PCT的表達及其臨床意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2015年1月至2017年1月膿毒癥患者144例，根據病情分為三組，膿毒癥組40例，男28例，女12例；平均年齡（61.29±10.39）歲。有可疑或明確感染誘發的SIRS，無組織灌注不全及器官功能障礙。嚴重膿毒癥組48例，男30例，女18例；平均年齡（60.84±12.26）歲。患者伴有組織灌注不全或器官功能障礙。膿毒癥休克組56例，男36例，女20例；平均年齡（61.54±13.05）歲。患者出現低血壓，液體治療后患者病情尚無法有效逆轉。另選取本院體檢健康者50例為健康對照組，男27例，女23例；平均年齡（60.38±12.13）歲。

1.2 納入及排除標準 納入標準：（1）患者臨床癥狀符合中國膿毒癥診療指南診斷標準［5］，對照組患者體檢結果正常。（2）無并發惡性腫瘤。（3）對治療藥物無過敏。（4）對本項目知情并簽署知情同意書。排除標準：（1）原發免疫功能障礙或缺陷。（2）入組前3個月內接受其他方案進行治療。（3）自動離院或中途放棄治療。

1.3 方法 收集患者一般臨床資料，實時監測患者心率、體溫、血壓、動脈血氣、尿常規、血常規、電解質、腎功能、肝功能、CT情況，若患者病情出現變化及時發現并采取科學合理措施進行干預。入院時及治療2周時采集空腹靜脈血3ml，采用免疫熒光色譜法檢測患者血清中PCT水平，所用試劑盒購買自上海歐典生物技術有限公司，所有操作均嚴格遵照試劑盒說明書進行操作。采用酶聯免疫吸附法檢測血中TREM-1水平，所用試劑盒購買自生工生物科技有限公司，所有操作均嚴格遵照試劑盒說明書進行操作。并使用外周血單個核細胞分離液分析PBMC，并采用實時熒光定量聚合酶鏈反應法檢測PBMC中FOXO3a水平，所用試劑盒購買自北京康為試劑有限公司，嚴格遵照試劑盒說明書進行操作。所用引物均有金斯瑞公司合成，FOXO3a熒光值/GAPDH熒光值計為FOXO3a表達量。以病理檢查結果作為判斷金標準，分析FOXO3a、TREM-1和PCT的診斷價值。

1.4 統計學方法 采用SPSS 19.0統計軟件。計量資料以（x±s）表示，多組間比較用方差分析，組間兩兩比較用q檢驗；計數資料以%表示，用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 四組FOXO3a、TREM-1與PCT檢測結果 膿毒癥組、嚴重膿毒癥組及膿毒癥休克組患者血中PCT及TREM-1水平均顯著高于健康對照組（P＜0.05），且FOXO3a水平顯著低于健康對照組（P＜0.05），隨著患者病情加重，患者PCT及TREM-1水平顯著升高（P＜0.05），FOXO3a顯著降低（P＜0.05），見表 1。

表1 四組FOXO3a、TREM-1與PCT檢測結果比較（x±s）

2.2 膿毒癥組患者治療前后FOXO3a、TREM-1與PCT檢測結果 見表2。

表2 膿毒癥組患者治療前后FOXO3a、TREM-1與PCT檢測結果（x±s）

2.3 嚴重膿毒癥組患者治療前后FOXO3a、TREM-1與PCT檢測結果 見表3。

表3 嚴重膿毒癥組患者治療前后foxo3a、TREM-1與PCT檢測結果（x±s）

2.4 膿毒癥休克組患者治療前后FOXO3a、TREM-1與PCT檢測結果 見表4。

表4 膿毒癥休克組患者治療前后foxo3a、TREM-1與PCT檢測結果（x±s）

2.5 FOXO3a、TREM-1與PCT評估患者病情價值 FOXO3a、TREM-1及PCT均具有較高的診斷精確度、靈敏度，且三者診斷效能差異無統計學意義（P＞0.05），見圖 1。

圖1 FOXO3a、TREM-1與PCT診斷ROC曲線

3 討論

膿毒癥是臨床常見的全身炎癥綜合征，感染是其主要的臨床誘因，若患者病情無法得以有效控制，則可能誘發嚴重膿毒癥、膿毒癥性休克、多器官功能衰竭等，威脅患者生命安全，導致病死率居高不下。有研究指出，膿毒癥患者體內常可見明顯的過度炎癥反應［6］。FOXO3a是PI3K/Akt信號通路的重要下游活性因子，也是人體內重要的轉錄因子叉頭蛋白家族成員［7］。當FOXO3a發生磷酸化后可導致其與DNA結合位點脫離，并向胞質內轉移，其轉錄活性顯著降低，阻斷TLR2信號通路轉導途徑［8］。有研究指出，在LPS大劑量干預后，其炎癥細胞中FOXO3a表達量顯著降低［9］。真菌和細菌誘發的炎癥反應中，在皮膚、肺組織、淋巴結中均可見明顯的TREM-1高表達，且在肺泡巨噬細胞、CD14單核/巨噬細胞、中性粒細胞、單核細胞源性的上皮樣細胞、肉芽腫等也可見明顯的TREM-1高表達。TREM-1可通過釋放并激活大量炎癥介質和細胞因子，進一步激化炎癥反應。研究結果顯示，TREM-1可促進鈣離子的轉移，加速磷脂酶C酪氨酸磷酸化、細胞表面信號因子的釋放，最終增強、放大炎癥反應，導致炎癥反應過度［10］。有研究認為，PCT是次級炎癥因子，其本身并無法有效啟動膿毒癥反應，但可有效加重并放大膿毒癥病理過程，其也可能是重要的潛在致死因子［11］。一般情況下，細菌感染后常導致患者血清中PCT水平異常升高，并與疾病嚴重狀態密切相關。

本資料結果顯示，隨著膿毒癥患者病情加重，患者PBMC中FOXO3a表達量顯著降低，且治療后患者PBMC中FOXO3a表達量可明顯改善。膿毒癥患者血中TREM-1水平顯著高于健康人，隨著患者病情的加重TREM-1水平也顯著改善，經治療后患者血中TREM-1水平均得以顯著改善。膿毒癥患者血中PCT水平顯著高于健康對照組，與前人研究結果相似［12］。此外，在對膿毒癥患者病情進行評估時，FOXO3a、TREM-1及PCT均具有較高的診斷精確度、靈敏度。分析認為，在膿毒血癥發生及發展過程中，FOXO3a水平的降低起到十分重要的作用。膿毒癥以脂多糖的大量釋放較為常見，而TREM-1異常升高可放大炎癥反應，加重患者病情。而經治療后，TREM-1可有效改善患者細胞內炎癥因子合成與分泌，并有效降低鈣離子動員。研究結果顯示隨著患者病情加重，其血中PCT水平也隨著升高，經治療后所有患者血中PCT也可見顯著改善。在對膿毒癥患者病情進行評估時，可對患者血中FOXO3a、TREM-1及PCT水平進行檢測，及時評估患者病情并采用合理治療方式進行干預，有助于提高患者治療臨床療效。

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