血液透析對尿毒癥患者Treg與Th17水平失衡的影響分析

王明波，譚永順，王自良，王 敏

(山東省萊蕪市人民醫(yī)院：1.腎內(nèi)科；2.檢驗科 271199)

尿毒癥患者由于慢性腎衰竭通常需要接受維持性血液透析進(jìn)行腎替代治療。血液透析不僅可有效清除患者體循環(huán)中的毒素，還有助于緩解尿毒癥相關(guān)并發(fā)癥，延長患者的生存時間，其在尿毒癥患者中的應(yīng)用優(yōu)勢已得到臨床公認(rèn)[1]。

尿毒癥患者體循環(huán)中炎性細(xì)胞因子水平輕度增高，機(jī)體往往處于低強度進(jìn)展的微炎癥狀態(tài)，導(dǎo)致多器官、多系統(tǒng)發(fā)生免疫病理損傷。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Treg)是一群具有免疫抑制功能的T細(xì)胞，在維持機(jī)體免疫穩(wěn)定、防止自身免疫性疾病方面具有重要的意義[2]。輔助性T細(xì)胞17(Th17)則是重要的促炎性細(xì)胞，Treg/Th17比例失衡可導(dǎo)致血管鈣化，增加動脈血管粥樣硬化風(fēng)險，對尿毒癥患者預(yù)后不利。維持性血液透析對尿毒癥患者Treg和Th17水平是否有影響的相關(guān)研究較少[3]。本研究探討了維持性血液透析對尿毒癥患者Treg和Th17的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年2月至2017年2月在本院治療的尿毒癥患者185例為研究對象，其中行血液透析治療患者102例為透析組，未行血液透析治療患者83例為非透析組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)近2周內(nèi)無急性感染；(2)近6個月內(nèi)未使用過激素和免疫抑制劑；(3)近1個月內(nèi)未使用過他汀類藥物、左旋卡尼汀、噻唑烷二酮類降糖藥；(4)患者及家屬知情同意并簽署同意書,本研究通過倫理委員會認(rèn)證。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)近3個月有手術(shù)、外傷史；(2)有缺血性心臟病、腦血管病、血液病、肝炎、惡性腫瘤、艾滋、精神疾病等；(3)資料不全者。同時選取在本院門診做健康體檢的志愿者100例作為對照組。3組受試者年齡、性別比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 3組受試者一般資料比較

1.2方法 非透析組患者給予藥物保守治療，透析組在藥物治療基礎(chǔ)上接受血液透析，經(jīng)上肢動靜脈內(nèi)瘺透析，應(yīng)用聚砜膜透析器、碳酸氫鹽透析液，流量500 mL/min。血流量200～250 mL/min，時間4～5 h，視病情每周透析2～3次，透析治療時間3 個月以上。3組研究對象均于清晨取空腹肘前靜脈血置入肝素抗凝試管，離心分離血清后采用雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法檢測IL-10、IL-6、IL-17，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。采用Ficoll 淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心分離血中單個核細(xì)胞，以1640培養(yǎng)液混懸，調(diào)整細(xì)胞濃度至每毫升3×106個，離心后取上清液凍存于-80 ℃冰箱待測。采用美國貝克曼庫爾特公司流式細(xì)胞儀檢測 Treg，將CD4抗體、CD25抗體對細(xì)胞表面染色，加入Foxp3抗體檢測，經(jīng)PBS洗滌后重懸后應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析。檢測Th17時，在單個核細(xì)胞中加入CD4單抗，置于4 ℃培養(yǎng)20 min，再進(jìn)行固定、透化處理，加入IL-17單抗進(jìn)行檢測。設(shè)置同型對照確保抗體特異性和有效補充。

2 結(jié) 果

2.1各組Treg、Th17水平比較 對照組Treg和Th17水平明顯低于非透析組和透析組(P<0.05)，透析組Treg和Th17明顯低于非透析組(P<0.05)，見表2。

表2 各組Treg、Th17水平比較

2.2各組IL-10、IL-6及IL-17比較 對照組IL-10水平明顯高于非透析組和透析組(P<0.05)，而IL-6和IL-17明顯低于非透析組和透析組(P<0.05)；透析組IL-10明顯高于非透析組(P<0.05)，而IL-6和IL-17明顯低于非透析組(P<0.05)，見表3。

表3 各組IL-10、IL-6及IL-17比較

3 討 論

尿毒癥是各種腎病的終末階段，腎臟功能幾乎喪失，體內(nèi)毒素大量蓄積。尿毒癥患者在接受血液透析治療后體循環(huán)中的大、中分子毒性物質(zhì)被濾除，在一定程度上起到代替腎臟的作用，使患者的生存時間得到延長[4]。但仍有相當(dāng)一部分患者由于血管鈣化、心血管并發(fā)癥而死亡。尿毒癥患者的腎功能損傷呈慢性、進(jìn)行性、不可逆性加重，經(jīng)過較長時間的發(fā)展最終進(jìn)展至腎衰竭，在這一病變過程中患者存在著多器官、多系統(tǒng)的免疫病理損傷，尤其以心肌損傷最常見[5]。腎性高血壓、酸中毒、高鉀血癥、水鈉潴留、腎性貧血、毒性物質(zhì)蓄積等均可導(dǎo)致心肌損傷[6]。有研究認(rèn)為，心血管并發(fā)癥是引起尿毒癥血液透析患者死亡的獨立危險因素[7]。

單個核細(xì)胞是一種重要的免疫性活性細(xì)胞，分離得到的Treg和Th17與機(jī)體免疫功能存在著密切的關(guān)系[8]。單個核細(xì)胞受到刺激活化后Treg和Th17比例失衡，誘導(dǎo)相關(guān)非免疫細(xì)胞的功能變化，參與心血管疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展[9]。免疫激活后機(jī)體處于炎性反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞因子水平升高，引起左心室重構(gòu)、心肌收縮力下降、β-腎上腺素受體失耦聯(lián)等一系列病理改變，從而引發(fā)或加重心血管病變，增加尿毒癥患者的死亡風(fēng)險[10]。

Treg是抑制性T細(xì)胞亞群，可抑制CD4+、CD8+的活化、增殖，起到調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的作用[11]。Th17具有強大的促炎性作用，通過分泌細(xì)胞因子IL-17發(fā)揮其作用[12]。本研究中尿毒癥患者的Treg、Th17水平明顯高于對照組，提示尿毒癥患者機(jī)體的免疫抑制功能下降，大量的效應(yīng)性CD4+T細(xì)胞活化，進(jìn)而引起IL-6、IL-17等促炎性細(xì)胞因子水平增高，這可能是尿毒癥患者機(jī)體普遍處于微炎癥狀態(tài)的原因之一[13]。經(jīng)血液透析治療后，患者Treg、Th17、IL-6和IL-17水平均低于未接受血液透析治療者，說明血液透析治療有助于改善尿毒癥患者機(jī)體微炎癥狀態(tài)，降低其心血管不良事件的風(fēng)險，對患者的預(yù)后有益。

IL-10 是一種多潛能的細(xì)胞因子，對巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和Treg等均可產(chǎn)生免疫抑制作用，使炎性細(xì)胞因子、趨化因子的分泌減少，同時可抑制組織相容性復(fù)合體、協(xié)同刺激分子的表達(dá)，對心肌產(chǎn)生一定的保護(hù)作用，因而被認(rèn)為是一種抗炎性細(xì)胞因子[14]。本研究中尿毒癥患者IL-10水平明顯低于對照組，這一結(jié)果提示，尿毒癥患者機(jī)體均處于不同程度的自身免疫功能紊亂狀態(tài)，血液透析治療可減輕免疫功能紊亂程度，這可能是通過促進(jìn)Treg特異性表達(dá)Foxp3，分泌IL-10等抗炎因子而發(fā)揮抑制炎癥、維持免疫耐受的作用，從而有利于心肌保護(hù)[15]。本研究認(rèn)為，血液透析除了清除體循環(huán)內(nèi)毒素、控制容量負(fù)荷之外，還可以改善患者的自身免疫功能，進(jìn)而降低尿毒癥患者心血管病發(fā)癥的風(fēng)險，這可能是血液透析治療改善尿毒癥患者預(yù)后的作用機(jī)制之一。

本研究探討了血液透析治療改善尿毒癥患者預(yù)后的作用機(jī)制，認(rèn)為尿毒癥患者存在Treg與Th17水平失衡，而血液透析可幫助改善患者Treg與Th17水平失衡，基于這一結(jié)果，在今后的臨床工作中可通過藥物或其他治療手段進(jìn)一步干預(yù)尿毒癥患者機(jī)體Treg與Th17水平，以改善其預(yù)后。

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