細胞黏附分子變異體6、黏蛋白1及血管內皮生長因子在三陰性乳腺癌中的生物學特征及其預后的意義

羅紅蘭，劉凱，王萍，萬鴻，劉靜

(黃岡市中心醫院腫瘤科，湖北 黃岡 438000)

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，發病率與死亡率呈逐年上升趨勢，嚴重威脅女性患者的身體健康[1-2]。三陰性乳腺癌是指乳腺癌患者中雌激素受體、孕激素受體及內皮生長因子受體2表達均缺失的特殊類型，具有獨特生物學特性和高侵襲性，屬乳腺癌中難治性疾病，尋找其特異性生物標志物是治療的關鍵[3-4]。細胞黏附分子變異體6(cell adhesion molecule variant 6，CD44v6)為黏附分子 CD44主要成員，參與細胞與間質間的黏接，與多種惡性腫瘤浸潤轉移有關[5]。黏蛋白1(mucin-1，MUC1)在腫瘤患者的血清中表達異常，與腫瘤細胞的生長、浸潤轉移及機體的免疫功能有關[6]。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是促脈管生成因子，可促進血管內皮細胞分裂、增殖及血管生成[7]。本研究旨在通過酶聯免疫吸附法(ELISA法)檢測血清CD44v6、MUC1及VEGF表達水平，探討CD44v6、MUC1及VEGF在三陰性乳腺癌中的生物學特征及其對預后評估的意義。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2014年2月至2016年3月在黃岡市中心醫院確診的65例三陰性乳腺癌患者和75例非三陰性乳腺癌患者為研究對象，所有患者均經病理切片證實為乳腺癌患者，三陰性乳腺癌患者雌激素受體、孕激素受體及內皮生長因子受體2無表達。所有研究對象均已簽署知情同意書，并表示對研究內容理解。本次研究已獲得黃岡市中心醫院醫學倫理委員會批準。兩組患者的年齡、腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉移等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

1.2試劑與儀器CD44v6試劑盒(南京建成生物科技公司)，MUC1試劑盒(美國 eBioscience公司)，VEGF試劑盒(上海生工有限公司)，促凝管(美國BD 公司)。23R離心機(上海力康集團力新儀器有限公司)，-80 ℃低溫冰箱(美菱公司)，Milli-Q超純水儀(美國Millipore公司)，ST-360酶標儀(上?？迫A生物工程股份有限公司)，SW-CJ-2F超凈工作臺(蘇州安泰超凈工作臺凈化有限公司)，JY2002電子天平(上海良平儀器儀表有限公司)。

1.3檢測方法早晨空腹抽取患者靜脈血3 mL，3 mL置促凝管，30 min后，4 ℃,3 000 r·min-1離心10 min，分離血清，-80 ℃冰箱保存。使用前于4 ℃溶化，離心取上清，采用ELISA檢測CD44v6、MUC1和VEGF表達水平，設3個復孔，嚴格按產品說明書進行操作。根據標準曲線，計算每份血清中CD44v6、MUC1及VEGF表達水平。

2 結果

2.1兩組患者CD44v6、MUC1及VEGF比較三陰性乳腺癌患者的CD44v6和MUC1表達水平與非三陰性乳腺癌患者比較，差異無統計學意義(P>0.05)；而三陰性乳腺癌患者的VEGF表達水平明顯低于非三陰性乳腺癌患者，差異有統計學意義(P<0.01)。見表2。

2.2三陰性乳腺癌臨床特征與CD44v6、MUC1及VEGF表達三陰性乳腺癌患者的CD44v6、MUC1及VEGF表達水平與年齡、腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉移均無明顯相關性(P>0.05)。見表3。

2.3CD44v6、MUC1及VEGF相關性相關性分析顯示，CD44v6 與MUC1表達水平呈正相關(r=0.224，P=0.015)，與VEGF表達水平無相關性(r=0.023，P=0.637)，MUC1與VEGF表達水平呈正相關(r=0.271，P=0.008)。

3 討論

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，約占女性惡性腫瘤的30%，手術創傷、化放療及淋巴結的轉移，嚴重折磨患者，影響生命質量[8]。三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺癌相比具有侵襲性強、進展快、死亡風險高、生存期短、臨床預后差的特點，是目前乳腺癌研究關注的焦點。并且三陰性乳腺癌的發病機制復雜，成為臨床乳腺癌治療難點[9-11]。尋找三陰性乳腺癌相關的蛋白質、腫瘤標志物及腫瘤藥物治療靶標，對三陰性乳腺癌的診治具有重要作用。本研究探討CD44v6、MUC1及VEGF在三陰性乳腺癌中的生物學特征及其對預后評估的意義，可為三陰性乳腺癌臨床診治提供參考依據。

表1 患者一般資料比較/例

表2 兩組患者CD44v6、MUC1及VEGF表達水平比較

表3 三陰性乳腺癌臨床特征與CD44v6、MUC1及VEGF表達關系

CD44v6可介導細胞與基質、細胞與細胞間粘附，促進腫瘤細胞生長，加速腫瘤侵襲轉移，CD44v6利用淋巴細胞歸巢機制，使細胞在惡變早期植入淋巴結，逃避免疫系統識別和殺傷，進入淋巴結加速轉移，增強腫瘤細胞的異質粘附性，促進腫瘤浸潤性生長[12-13]。本研究發現，三陰性乳腺癌患者的CD44v6表達水平與非三陰性乳腺癌患者比較差異無統計學意義，其與年齡、腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉移均無明顯相關性，差異無統計學意義。說明CD44v6表達水平不能鑒別三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌患者，對指導臨床預后沒有重要的意義。這與文獻報道CD44v6在三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺間無表達差異一致[14-15]。

MUC1是一種高分子量糖蛋白，主要分布在乳腺、消化道等組織器官的上皮細胞，腫瘤組織中MUC1表達量增加，會使糖鏈表達異常，影響細胞表面相互粘附，逃避免疫系統的監視，有利于癌細胞轉移生長[16]。MUC1高表達可促進基底膜蛋白粘附，促進腫瘤細胞侵襲轉移，降低與鈣粘素細胞粘合作用，使癌細胞脫落為游離癌細胞，促使腫瘤轉移。本研究發現，三陰性乳腺癌患者的MUC1表達水平與非三陰性乳腺癌患者比較差異無統計學意義，其與年齡、腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉移均無明顯相關性，差異無統計學意義。說明MUC1表達水平不能鑒別三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌患者，對指導臨床預后沒有重要的意義。這與Do等[17]的研究結論非三陰性乳腺癌患者中MUC1表達明顯高于三陰性乳腺癌患者不一致。目前MUC1與臨床病理參數的相關性尚無定論。莊婷[18]指出MUC1表達與組織學分級、淋巴結轉移呈負相關。MUC1對于乳腺癌中的作用機制仍未完全弄清，在癌癥早期MUC1表達增加，促進癌細胞與正常淋巴細胞外基質分離，或許其在乳腺癌早期中起著重要作用[19]。

VEGF是一種肝素親和外分泌二聚體糖蛋白，以同源二聚體的方式存在，是最有效的血管生成刺激因子。VEGF能促進血管內皮細胞分裂，在腫瘤新生血管形成、侵襲轉移中起著重要作用，導致血管數量增加，為腫瘤的生長提供營養和腫瘤細胞轉移提供通道[20-21]。本研究發現，三陰性乳腺癌患者的VEGF表達水平明顯低于非三陰性乳腺癌患者，但其與年齡、腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉移均無明顯相關性。這與楊艷芳等[22]的研究結果一致?？赡苁且驗榘┘毎a生的 VEGF 促進淋巴管形成，使腫瘤細胞進入淋巴管，回流至淋巴結，使淋巴結轉移。但VEGF對三陰性乳腺癌患者的作用機制及臨床意義尚需進一步研究。

綜上所述，與非三陰性乳腺癌患者相比，三陰性乳腺癌患者血清CD44v6和MUC1表達水平未見異常，VEGF表達水平較低，CD44v6、MUC1及VEGF表達水平均與腫瘤大小、組織分級、臨床分期和淋巴轉移等預后指標無明顯相關性，不能作為三陰性乳腺癌特異標志物，對指導臨床預后沒有重要的意義。對于三陰性乳腺癌尚需進行CD44v6、MUC1及VEGF聯合檢測或采用大樣本、不同實驗技術發現并驗證其特異標志物。

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