首發抑郁癥患者外周血microRNA-124的變化及臨床意義

袁梅菊 畢雪飛

近年來抑郁癥的神經營養假說日益引起人們的注意，該假說認為大腦海馬區缺乏腦源性神經營養因子導致了抑郁癥的發生、發展，并認為腦源性神經營養因子的缺乏是抑郁癥病理生理機制中的一個核心因素［1］。微小RNA是由22～25個核苷酸序列組成的非編碼RNA，可以調控mRNA轉錄水平，miRNA在腦組織中含量比較豐富，在大腦功能調節方面起到很多關鍵的作用，尤其是在神經再生、神經可塑性及維持神經元正常功能方面［2，3］。新的研究證明 miRNA在抑郁癥的動物模型中以及抑郁癥患者的腦組織、外周血中均存在著異常表達［4～7］。miR-124是 microRNAs家族中的一員，分為三個亞型（miR-124-1、miR-124-2、miR-124-3），三者均為成熟的miRNAs；且其在腦組織中含量豐富，有報道［8］稱，miR-124可調節體內已成熟神經細胞再生，促進神經元分化、調節突觸可塑性。Cao MQ等［9］在2013年的一項研究中指出：miR-124的表達增加會促使應激狀態中的大鼠出現抑郁癥；Bahi A等［10］的研究發現由慢病毒介導、選擇性抑制小鼠海馬中miR-124a表達可產生抗抑郁劑樣作用；He S等［11］的研究發現miR-124相關的病理生理學特征使其可能成為抑郁癥治療的潛在靶點。本研究以上述研究結論為基礎，嘗試明確抑郁癥患者與健康人群血清miR-124之間是否存在差異以及口服舍曲林抗抑郁治療過程中不同時間點的差異，嘗試找到可用于抑郁癥診斷和評估療效的生物學指標。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇2015年2月～2017年3月在洛陽市第五人民醫院住院的首發抑郁癥患者122例，納入標準：（1）符合美國精神障礙診斷與統計手冊第4版（DSM-Ⅳ）抑郁癥的診斷標準；（2）漢密爾頓抑郁量表17項版本（HAMD-l7）評分＞17分；（3）性別不限，年齡18～60歲；（4）漢族。排除標準：嚴重軀體疾病、腦器質性疾病、急性感染、需合并電痙攣治療者。治療過程中因嚴重胃腸道反應脫落8例，嚴重肝組織損傷脫落2例，白細胞降低1例，中途退出研究11例，最終納入統計分析100例，其中男49例，女51例；18～30歲35例，31～50歲32例，＞50歲33例；受教育年限≤8年32例，8～11年35例，≥12年33例。在我院醫生、護士及患者家屬中招募健康對照120人，其中男56人，女64人；18～30歲44人，31～50歲36人，＞50歲40人；受教育年限≤8年44人，8～11年44人，≥12年32人。兩組患者性別、年齡、受教育年限方面比較差異均無統計學意義（P＞0.05）；本研究經本院倫理委員會審核批準，所有受試者監護人均對本研究知情并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 入組后單一使用舍曲林片治療，初始計量為25 mg／d，根據病情逐漸增加藥物劑量，2周內增加至至最佳治療量（100～200 mg／d）。研究過程中可聯合使用苯二氮類藥物改善睡眠，不聯合使用抗精神病藥及其他抗抑郁藥。

1.2.2 療效評價 病例組在治療前及治療后第8末進行HAMD評分，設定HAMD減分率≥75%為A組；50%～74%為B組；25%～49%為C組；＜25%為D組。HAMD減分率＝（治療前總分-治療后總分）／治療前總分×100%。

1.2.3 總RNA提取 分別于治療前及治療后第1、2、4、8周末，清晨 7：00～8：00收集空腹肘靜脈血 5 ml，收集樣本保存至液氮中，將抗凝血標本22℃條件下以2 000 g離心15 min，轉移至1 ml無菌冷凍管中，置于－70℃冰箱備用。選擇miRNeasy Mini Kits提取總RNA，按說明書進行RNA洗脫。

1.2.4 RT-qPCR步驟及設置 PCR選用SYBR Green染料法，按說明書配制PCR反應體系，總反應體系為50μl。程序設置：95℃預反應2 min，然后95℃持續5 s解鏈，56℃持續5 s退火，72℃持續時間35 s延伸，反復進行35個循環。運用2-ΔΔCT相對定量計算目標基因含量。

1.2.5 實驗主要器械及試劑 GenEluteTMPlasma／Serum RNA Purification Mini Kit（GenElute公司）、PCR儀（上海賽默生物科技發展有限公司）、超低溫冰箱（賽諾菲世公司）、引物合成（賽諾菲世公司）。

1.2.6 統計學方法 選用 SPSS23.0進行統計學分析，計數資料應用t檢驗或單因素方差分析，計量資料應用卡方檢驗，檢驗水準P＜0.05。

2 結果

2.1 治療前兩組miR-124表達水平的差異 病例組患者外周血中的 miR-124含量為：16.12±5.56，對照組外周血中 miR-124含量為：8.71±3.42，病例組miR-124表達水平高于對照組（t＝12.11，P＜0.01）。見圖1。

圖1 兩組血清miR-124表達差異

2.2 病例組在治療后各時點miR-124表達水平比較治療前病例組患者外周血中的miR-124含量為：16.12±5.56，治療后第1、2、4、8周末 miR-124含量分別為：15.90±4.98、15.77±4.55、12.78±4.55、8.41±3.88。治療后第4、8周末miR-124表達水平較治療前下降（t1＝4.65，t2＝11.37，P＜0.05）。

2.3 治療后第8周末不同療效患者間外周血miR-124表達差異 治療后第8周末根據HAMD抑郁量表減分率將患者分為4組：A組52例、B組20例、C組15例、D組13例。治療后四組比較差異有統計學意義（F＝125.84，P＝0.00），進一步兩兩比較發現，A組miR-124表達水平低于B組、C組、D組（t1＝19.16，t2＝24.79，t3＝40.92，P＜0.05）；B組和 C組的 miR-124表達比較差異無統計學意義（t＝0.12，P＞0.05）；D組miR-124表達水平高于B組和C組（t1＝19.35，t2＝19.75，P＜0.05）。見表 1。

表1 不同療效患者間治療后外周血miR-124表達差異（x±s）

3 討論

抑郁癥作為一種病因未明的精神疾病，因缺乏明確的與疾病病理生理機制及疾病轉歸相關的生物學指標，所以多年來其診斷一直停留在描述性診斷的階段；由于缺乏明確的治療靶點，為抑郁癥的有效治療和后期康復帶來了障礙。由于腦組織并不像外周血那樣容易獲得，所以目前多數關于抑郁癥的研究都圍繞外周血展開。研究［12］表明，轉錄的單個核細胞能夠反映大腦中細胞和分子的變化；中樞神經系統可通過細胞因子、神經遞質或外周血淋巴細胞對基因表達產生影響［13］。還有研究認為miRNAs在外周血單個核細胞中的異常表達可能參與了抑郁癥的發病機制［5，6］。盡管如此，過去的研究大多數停留在動物實驗方面，本研究一定程度上填補了上述空白。

本研究發現在首發抑郁癥患者中也存在著miR-124的表達差異，并且證明了在抑郁癥的治療過程中隨著病情的改善miR-124的表達也趨于正常，且在療效較好的患者中下降更為明顯。He S［11］等同樣采用實時熒光定量PCR技術對首發重度抑郁癥患者外周血miR-124的變化進行了研究，結果發現：治療前后miR-124的表達出現了顯著差異，這與本研究的結果類似。此外，Bocchio-Chiavetto L等［14］還比較了10例口服艾司西酞普蘭的抑郁癥患者治療前后外周血miRNA表達水平的差異，結果發現了30個表達水平呈現差異的miRNAs；這也再次為miRNAs在抑郁癥發生發展中的有著重要作用提供了佐證。然而，Belzeaux R等［5］用TaqMan miRNA低密度陣列法研究首發重度抑郁癥患者治療前后外周血單個核細胞miRNA的表達譜時并沒有發現miR-124的顯著變化，這又與本研究的結果存在相悖之處。miR-124表達水平是否在不同人種間存在著差異以及不同方法測得的結果是否存在可比性尚無明確定論，矛盾的解決還有待將來進一步研究發掘。

本研究發現，首發抑郁癥患者中存在著miR-124水平過表達，隨著患者研究的推進伴隨著患者的癥狀的改善其血清miR-124表達水平逐漸降低，且療效不同的群體miR-124表達水平也不盡相同，而且外周血中miR-124的表達能夠反映首發抑郁癥患者治療療效；這說明miR-124與抑郁癥的診斷、治療效果關系密切，可作為診斷和評估患者預后的生物學指標。誠然，單次小樣本研究的結果還不能明確miR-124的表達對抑郁癥病理生理機制的具體影響，對其展開深入的研究是否能對抑郁癥的診斷、療效評估方面生物學指標的尋找開辟一條新的途徑，還有待進一步研究觀察。

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