毛雞骨草種子檢驗規程研究

董青松 譚偉東 鐘一雄 朱艷霞 李琴 何俊兵 柯芳

摘要?[目的]為規范中藥材種子市場，保證種子的質量，研究制定毛雞骨草種子檢驗規程。[方法]參照現有種子質量檢驗的成果，研究毛雞骨草種子的檢驗方法，內容包括扦樣、凈度分析、發芽試驗、真實性鑒定、水分測定、四唑測定、重量測定等。[結果]確定其室內檢驗的標準檢驗方法，制定了毛雞骨草種子檢驗規程。[結論]制定的毛雞骨草種子檢驗規程經多批次種子質量檢驗實踐，是可行的。

關鍵詞?毛雞骨草;種子檢驗規程;發芽試驗;水分測定;四唑測定

中圖分類號?S567文獻標識碼?A文章編號?0517-6611（2018）35-0177-03

毛雞骨草為廣西特產、大宗栽培藥材，來源于豆科相思子屬植物毛相思子（Abrus mollis Hance），藥用全株，具有清熱解毒、舒肝止痛的功效，主治黃疸、脅肋不舒、胃脘脹痛、急慢性肝炎、乳腺炎[1]，是廣西玉林制藥集團有限責任公司拳頭產品雞骨草膠囊、復方雞骨草膠囊等保肝護肝中成藥的主要原料，長期的使用使野生資源已不能滿足市場需求。從1989年起，經應用企業與科研單位共同攻關，成功實現了毛雞骨草的野生變家種，并在廣西玉林、北流、陸川、貴港、靈山、百色、凌云、臨桂等地推廣種植。在生產上，毛雞骨草用種子進行繁殖，由于缺乏種子質量檢驗技術、標準和有效的管理，劣種坑農的事件時有發生，給藥農帶來很大損失，也使藥材生產得不到保障。筆者通過對其種子扦樣、種子質量檢驗和鑒定方法的研究，獲得其種子檢驗規程，為種子的科研、生產、經營、質量管理提供依據。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?供試種子。

來源于廣西玉林制藥集團有限責任公司毛雞骨草種植基地。

1.1.2?儀器及試劑。

各試驗所需儀器及試劑見表1[2-5]。

1.2?方法

1.2.1?扦樣[2-4，6]。

通過分析多年調查結果，依據毛雞骨草種子的市場流通情況和單個種植基地的需種量，從多年多批次樣品的質量分析結果綜合考慮，提出劃分種子批的方法，確定其種子批的最大重量和樣品最小重量，同時確定初次樣品、混合樣品、送驗樣品、試驗樣品的獲取方法。

1.2.2?凈度分析。

參照GB/T 3543.2—1995 農作物種子檢驗規程?凈度分析[7]的方法，參考文獻[2-4]進行毛雞骨草種子的凈度分析。

1.2.3?發芽試驗。

設計了不同的種子預處理（破除硬實、抑菌處理）、發芽溫度、發芽床、光照條件各項試驗，觀察其幼苗發芽規律，總結其幼苗鑒定及試驗持續時間[8]。

1.2.4?種子真實性鑒定[2-4]。

采用種子外觀形態法。人工或機械隨機數取種子100粒4個重復，通過對種子形態、大小、顏色等特征的鑒定檢驗種子真實性，結果以真實種子的平均值表示，保留一位小數。

1.2.5?水分測定[2-3，9]。

試驗方法見表2，試驗程序同文獻[9]。

1.2.6?生活力的生化測定——四唑測定（TTC）[2-4，10]。

設計了預濕方法和時間、染色前的準備、不同染色液濃度、染色溫度及染色時間、染色結果與發芽試驗的結果對比、染色圖譜的鑒定各項試驗。

1.2.7?重量測定。

參照文獻[11]的百粒法、千粒法、全量法，各進行4次重復，對各方法取得的種子實測千粒重進行比較分析，確定最適宜方法[2-5]。

2?結果與分析

2.1?扦樣

毛雞骨草種子的扦樣，規定其種子批最大重量為1 000 kg，送驗樣品最小重量為500 g，凈度分析試樣最小重量為50 g，其他植物種子計數試樣最小重量為500 g，水分測定試樣最小重量為100 g。

在扦樣過程中，劃分種子批的方法為：扦樣前了解所扦取種子的品種、產地、數量、采收時間、脫粒及干燥、貯藏方法、貯藏條件、貯藏時間和貯藏期間發生的情況、處理方法等。按照同一品種、同一來源、同一年度、同一時期收獲和質量基本一致、在規定數量之內劃分種子批。

初次樣品的扦取、混合樣品的配制、送驗樣品及試驗樣品的分取按GB/T 3543.2—1995?農作物種子檢驗規程?扦樣[6]執行。

為最大程度地保證樣品在檢驗前后的一致，盡量做到收到樣品就開始檢驗，如耽擱，須將樣品保存在涼爽和通風良好的室內。用于復驗的樣品放在4～8 ℃條件下保存一年。

2.2?凈度分析

在研究過程中發現，毛雞骨草種子中的成分包含飽滿種子、癟種子、小石粒、小泥塊、小泥粒、毛雞骨草植株和果實殘片、谷粒等。根據其種子樣品實際，參照文獻[7]，毛雞骨草的凈種子除了完整種子，還包括大于原來大小一半、附著種皮的破碎種子;除了凈種子，均為雜質，其中重型雜質指重量大于種子10倍以上的雜質。其他植物種子按凈種子的原則選出。

凈度分析的結果計算和表示按GB/T 3543.3—1995 農作物種子檢驗規程?凈度分析執行。

2.3?發芽試驗

綜合種子預處理、發芽溫度、發芽床、光照條件、幼苗鑒定、試驗持續時間等各項發芽試驗研究結果[3，8]，毛雞骨草種子的發芽技術規定：從經充分混合的凈種子中，用數種設備或手工隨機數取400粒，分為4個重復，每個重復100粒。發芽試驗的發芽床為紙上（TP），發芽溫度為25 ℃或30 ℃，幼苗的初次計數時間為5 d，末次計數時間為10 d。置床前，破除硬實用95%～98%濃硫酸腐蝕8～9 min或JMNJ-3型精白機磨2 min/400粒，種子消毒用強氯精500倍液浸泡2 h或0.5% KMnO4水溶液浸泡1 h。結果計算和表示按GB/T 3543.4—1995農作物種子檢驗規程 發芽試驗[12]的規定執行。

2.4?種子真實性鑒定

毛雞骨草種子真實性的鑒別依據：種子卵形或矩圓形，扁平，長3.5～6.0 mm，寬2.3～4.5 mm，厚1.2～2.8 mm。暗褐色、棕色或黑色，表面光亮，常有棕黑相間的花斑。種臍凹陷，線形，種阜小，環狀。子葉肥大，黃綠色或白色;胚根白色，短小[3]。

2.5?水分測定

種子的水分測定是除去種子中全部的自由水和束縛水，同時盡最大可能減少氧化、分解或其他揮發性物質的損失[2，13]。由圖1可見，整粒樣品不斷失去水分，并無規律可循，因此用整粒種子進行毛雞骨草種子的水分測定是不可行的。粗磨樣品在試驗過程中，先有一個快速的失水期，然后到一個較長時間較緩慢失水的時期，可以將這個快速失水期看作失去自由水及部分束縛水，緩慢期看作失去束縛水但未達到種子物質的氧化、分解。從烘干時間上與GB/T 3543.6—1995規定的“高恒溫法樣品烘干時間為1 h、低恒溫烘干法樣品烘干時間為8 h”較吻合[3-4，14]。因此，通過對樣品處理、烘干溫度、烘干時間的結果比較，以快速、簡便為原則，毛雞骨草種子不需預先烘干的水分測定技術規定：用高恒溫烘箱法進行，樣品處理為粗磨，鋁盒直徑5.5 cm，樣品量為4～5 g，烘干溫度為130～133 ℃，干燥時間為2 h。結果計算和表示按GB/T 3543.6—1995農作物種子檢驗規程 水分測定[9]執行。

2.6?生活力的生化測定——四唑測定（TTC）

綜合預濕方法和時間、染色前的準備、不同染色液濃度、染色溫度及染色時間、染色結果與發芽試驗的結果對比、染色圖譜的鑒定等試驗結果[10]，毛雞骨草種子四唑測定的技術規定：破除硬實方法同發芽試驗，預濕方式為紙間或水中，預濕時間為30 ℃恒溫水浸種5～6 h或紙間12 h，染色前的準備為剝去種皮，染色液濃度為1%，染色溫度為30 ℃，染色時間為5～6 h，鑒定時觀察表面染色情況，全染成紅色或呈略淡的紅色為有生活力種子。

2.7?重量測定

重量測定試驗中，毛雞骨草種子的實測千粒重結果，百粒法平均為25.77 g，千粒法平均為25.48 g，全量法平均為25.66 g，3種方法所得的結果在0.05和0.01的顯著水平上沒有顯著差異。說明對于毛雞骨草種子的重量測定，百粒法、千粒法和全量法均適用。從標準化和國際化的角度出發，選擇百粒法作為毛雞骨草種子的重量測定方法。

3?結論

綜合以上研究結果，得到毛雞骨草種子檢驗規程，包括扦樣、凈度分析、發芽試驗、真實性鑒定、水分測定、四唑測定（TTC）、重量測定。

近年來，研究小組使用此規程對不同產地和不同年份的43批毛雞骨草種子的質量進行了檢驗，也請廣西藥用植物種子質量檢驗站的工作人員按此方法進行復檢，檢驗結果經過對比分析發現其結果差異在允許的范圍內，說明其方法穩定可靠。證明了此毛雞骨草種子檢驗規程適用于毛雞骨草種子的生產、經營、管理和使用過程的質量檢驗。

參考文獻

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