臍血干細胞對失代償性肝硬化凝血功能和血流動力學的影響

楊文義，韓大正，武利萍，閆春曉，黃祎諾，譚莉霞，王航宇，董勇，楊國威

(河南大學第一附屬醫院消化內科，河南 開封 475000)

肝硬化（Liver cirrhosis，LC）是由不同病因長期作用于肝臟引起的慢性、進行性、彌漫性肝病的終末階段，是以肝組織彌漫性纖維化、假小葉和再生結節形成為特征的慢性肝病[1，2]。當疾病處于代償期時，可無明顯癥狀，當疾病進展至失代償期時，以肝功能減退和門靜脈高壓為主要特征，常出現消化道出血、肝性腦病、肝腎綜合癥、繼發感染等嚴重并發癥，該病臨床救治困難，病死率高，嚴重影響患者的生活質量[3－5]。對于失代償期肝硬化患者，常規的保肝治療效果不明顯，死亡率很高，而肝移植作為肝硬化失代償期患者唯一的根治手段，因供體不足、風險較高、免疫排斥、費用高昂等問題難以廣泛開展[6，7]。目前，干細胞研究在醫學再生領域取得了令人矚目的成就，其中，臍血干細胞是一類具有多向分化潛能的原始祖細胞，可以分化為多種組織如軟骨組織、骨組織、脂肪組織以及骨髓組織和血液系統成分，研究發現，將臍血中的干細胞分離后移植到肝臟內，可分化為有功能的實質細胞，以替代受損的肝細胞，重構肝臟的結構和功能[8－10]。本研究通過對失代償期肝硬化患者進行臍血干細胞移植，探討臍血干細胞治療失代償期肝硬化的臨床效果以及對凝血功能和血流動力學的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2013年6月至2016年12月期間確診收治的肝硬化失代償期患者48例，所有病例均符合失代償期肝硬化診斷標準，所有患者根據自愿隨機分為觀察組和對照組，每組24例，其中，觀察組，男 18例，女 6例；平均年齡（53.7±9.5）歲；乙肝肝硬化 18 例，酒精性肝硬化 3，膽汁性肝硬化2例，丙肝肝硬化1例；肝功能Child分級：B級11例，C級13例。對照組，男16例，女8 例；平均年齡（55.3±10.2）歲；乙肝肝硬化 19 例，酒精性肝硬化2，膽汁性肝硬化2例，丙肝肝硬化1例；肝功能Child分級：B級12例，C級12例。患者排除標準：⑴肝癌或其他惡性腫瘤；⑵嚴重的臟器功能衰竭；⑶嚴重的細菌感染；⑷妊娠期婦女。本研究經本院倫理委員會同意和批準，術前均告知患者及家屬并簽署知情同意書。

1.2 臍血干細胞制備 選擇本院收治的健康產婦，排除病毒性肝炎、艾滋病、梅毒等傳染病者，無病理妊娠，經產婦同意，胎兒娩出后斷臍，封閉式采血法采集健康、足月分娩的胎兒擠帶血100ml，采用寧夏中聯達生物有限公司生產的臍帶血細胞處理試劑盒進行分離、純化，并對干細胞計數，制成干細胞懸液 10ml，每份干細胞數量為 1×108～3×108個，同時留樣做細菌、內毒素、支原體等檢測。

1.3 治療方案 觀察組患者采取B超定位或在透視下經皮經肝穿刺門靜脈右支，穿刺成功后放置導管端于門靜脈主干造影，造影后經門靜脈主干灌注臍血干細胞懸液10ml，緩慢灌注20～30min，術畢拔管，穿刺點加壓包扎后返回病房，術側下肢制動24h，監測生命體征。對照組患者給予常規保肝治療。

1.4 觀察指標 分別抽取兩組患者手術當天和術后1個月、3個月、6個月的晨起空腹靜脈抗凝血，室溫靜置30min，3000rpm，離心15min，收集血清，保存于－80℃，根據試劑盒說明書，采用AU5800全自動生化分析儀（貝克曼庫爾特公司，所用試劑盒均有上海長征提供）進行血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶 (AST)、甲胎蛋白(AFP)、總膽紅素(TB)和血清蛋白(ALB)水平的檢測；根據試劑盒說明書，采用CA－500全自動血凝儀配套的凝血指標檢測試劑盒（日本Sysmex公司）進行凝血酶原時間(PT)、纖維蛋白原(Fg)、活化部分凝血活酶時間(APTT)和凝血時間(TT)的檢測；采用彩色多普勒超聲診斷儀檢測患者門靜脈內徑、門靜脈內壓、門靜脈血流量和門靜脈血流速度；采用多層螺旋CT機對兩組患者進行常規全肝CT平掃，經軟件處理后，自動快速獲取肝臟體積。

1.5 統計學分析 采用SPSS 18.0軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者肝功能變化 對兩組患者治療前后肝功能檢測結果顯示，與治療前比較，兩組患者治療后，ALT、AST 和 TB 水平均有下降 （P＜0.05），ALB 和 AFP 水平均有升高（P＜0.05）， 且觀察組患者肝功能改善明顯優于對照組，在同時間點的指標比較差異具有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者肝功能變化

2.2 兩組患者凝血功能變化 對兩組患者治療前后凝血功能檢測結果顯示，與治療前比較，從治療后1個月開始，觀察組患者PT、APTT和TT均顯著下降，Fg水平顯著升高，治療3個月和6個月各項指標改善更為顯著，（P＜0.05），而對照組患者PT、APTT、Fg和 TT 指標變化不顯著 （P＞0.05），見表2。

2.3 兩組患者血流動力學變化 B超結果顯示，與治療前相比，觀察組患者門靜脈內徑減小，門靜脈內壓和門靜脈血流量下降，門靜脈血流速度升高（P＜0.05），而觀察組患者血流動力學變化不顯著（P＞0.05），見表 3。

2.4 兩組患者肝臟體積變化 CT平掃結果顯示，與治療前比較，兩組患者治療后肝臟體積均有增大趨勢，且觀察組患者肝臟體積改善明顯優于對照組，兩組比較差異具有統計學意義（P＜0.05），見表4。

3 討論

眾所周知，肝硬化是我國消化系統常見病和多發病，具有病情重、并發癥多、臨床救治困難、病死率高的特點[11]。肝硬化進展至失代償期后可出現嚴重肝功能損害、腹水、食道胃底靜脈曲張破裂出血、脾臟腫大、自發性腹膜炎（SBP）、肝腎綜合征（HRS）等嚴重并發癥，是損害我國國民健康的疾病之一[12-14]，一旦患者進入肝硬化失代償期，若不及時治療將最終導致肝功能衰竭。

表2 兩組患者凝血功能變化

表3 兩組患者血流動力學變化

表4 兩組患者肝臟體積變化（±s，cm3）

表4 兩組患者肝臟體積變化（±s，cm3）

注：對照組與治療前比較，*P＞0.05，觀察組與與治療前比較，*P＜0.05，與對照組治療后同時點比較，#P＜0.05。

24 24組別 例數(n)對照組觀察組治療前 治療后1個月 治療后3個月 治療后3個月901.33±103.27 909.86±106.32 926.53±112.31*949.21±116.77*#941.23±118.03*992.57±125.36*#971.32±121.27*1041.45±145.86*#

近年來，以干細胞為基礎的細胞治療為失代償期肝硬化患者提供了新的治療方法研究表明，干細胞在特定環境下可被誘導分化成肝細胞，可促進肝臟自我更新、減輕肝臟的纖維化，參與損傷肝臟的修復和重構[15]。臍帶血中含有豐富的造血干細胞和間充質干細胞，間充質干細胞在一定的條件下能向肝細胞定向分化[16]。臍血干細胞比骨髓干細胞抗原性更弱，更為原始，增殖能力更強，在肝臟微環境中有極強的向肝系細胞分化的能力，具有長時間持續擴增的能力，而且治療安全、有效，因此成為干細胞移植的重要來源之一。另外，由于臍帶血具有來源豐富、采集方便、無移植抗宿主反應和倫理學問題等優點，受到廣大患者和臨床研究者的歡迎[17，18]。目前，以干細胞為基礎的細胞治療慢性肝病多經肝動脈、門靜脈、外周靜脈、經脾內注射等途徑，因經門靜脈或肝動脈介入移植到達肝內的干細胞數量較多、療效較肯定及并發癥少等優勢，故臨床常見的干細胞移植途徑主要經門靜脈和肝動脈途徑[19，20]。

本研究通過對失代償期肝硬化患者進行門靜脈內臍血干細胞移植，探討臍血干細胞治療失代償期肝硬化的臨床效果以及對凝血功能和血流動力學的影響，結果顯示，在干細胞移植1個月后，觀察組患者ALT、AST和TB水平較對照組治療后顯著下調，而ALB和AFP水平均有升高，說明觀察組患者肝功能得到了明顯改善。凝血功能方面，觀察組患者PT、APTT和TT均顯著下降，Fg顯著升高，而對照組患者上述指標較治療前沒有顯著的變化，這一結果說明采用臍血干細胞移植治療可以改善失代償期肝硬化患者的凝血功能。此外，在血流動力學方面，與治療前相比，觀察組患者門靜脈內徑減小，門靜脈內壓和門靜脈血流量下降，門靜脈血流速度升高，而對照組患者血流動力學變化不顯著，說明觀察組患者采用臍血干細胞治療后顯著改善了患者的血流動力學指標。

綜上所述，臍血干細胞移植治療失代償期肝硬化可以有效改善患者肝功能、凝血功能和靜脈血流情況，進而改善肝臟合成功能，促進肝組織再生，改變門靜脈血流動力學并促進新血管生成，起到暫時性的肝臟支持作用，為臨床肝病的治療提供了一定的指導作用。

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