脂肪酶的試劑攜帶污染對總膽汁酸檢測的影響

雷鵬，侯芳，陳開楊，歐陽慧，楊陽，向尹

(樂山市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 樂山 614000)

血清總膽汁酸（TBA）在臨床肝病診斷中應(yīng)用較廣，對急、慢性肝炎，肝硬化，肝內(nèi)外膽道阻塞，膽汁淤積等疾病的診斷具有重要的臨床意義[1，2]。在實(shí)際工作中我們發(fā)現(xiàn)部分TBA結(jié)果有假性升高的現(xiàn)象。經(jīng)追蹤發(fā)現(xiàn)，測定脂肪酶（LPS）后的TBA濃度與單獨(dú)測定TBA濃度有差異。為探討LPS試劑是否影響TBA測定，我們用日立7600－110和7600－020全自動(dòng)生化分析儀，實(shí)驗(yàn)分析LPS試劑對TBA攜帶污染的情況，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 ⑴檢測標(biāo)本：收集當(dāng)日無溶血、無黃疸、無脂血的血清標(biāo)本混合成1份樣本后再分為20份，每份2ml。⑵儀器：日立7600－110、7600－020全自動(dòng)生化分析儀。其中，7600－110由D模塊與P模塊組成，LPS與TBA試劑在P模塊。7600－020由兩個(gè) P模塊組成，LPS試劑在 P2模塊，TBA試劑在P1模塊。試劑：TBA試劑由四川邁克提供，批號：0217011，有效期：20180209。

1.2 方法 ⑴LPS對TBA的干擾程度：先對10份混合血清的TBA進(jìn)行單獨(dú)檢測，將其作為對照組。接著另取混合血清10份，做LPS檢測后接著做TBA檢測，連續(xù)10次，將其作為實(shí)驗(yàn)組1。然后在LPS檢測后設(shè)置特殊清洗，做LPS檢測后接著做TBA檢測，連續(xù)10次，將其作為實(shí)驗(yàn)組2。在7600－110上進(jìn)行上述三種檢測，在7600－020上進(jìn)行上述前兩種檢測。⑵干擾試劑的確認(rèn)：取混合血清1份，取500μl混合血清與5μl生理鹽水混合作為對照組，再取兩份500μl混合血清分別與5μl LPS的R1、R2試劑混合作為實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2，每份樣本重復(fù)測定10次。在7600－020上進(jìn)行上述檢測。⑶LPS對TBA結(jié)果影響的持續(xù)時(shí)間：將10份混合血清單獨(dú)測試TBA，作為對照組。接著在儀器上對15份混合血清按下列順序測試：LPS、LPS、LPS、LPS、LPS、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA，按上述檢測重復(fù) 10次作為實(shí)驗(yàn)組1。然后在LPS檢測后設(shè)置特殊清洗，重復(fù)實(shí)驗(yàn)組1步驟作為實(shí)驗(yàn)組2。在7600－110上進(jìn)行上述檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LPS對TBA的干擾程度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在7600－110上同時(shí)選擇LPS與TBA進(jìn)行檢測所得TBA的值明顯高于單獨(dú)檢測TBA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而在檢測LPS后設(shè)置特殊清洗再檢測TBA所得的值也明顯高于單獨(dú)檢測TBA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 而在 7600－020 上同時(shí)選擇LPS與TBA進(jìn)行檢測所得TBA的值與單獨(dú)檢測TBA 相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 （表 1）

2.2 攜帶污染的試劑確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 加入LPS試劑R1后，所測得的TBA值明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 而加入 LPS試劑 R2后，所測得的TBA值也明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 （表 2）

2.3 LPS試劑攜帶污染對TBA結(jié)果影響的持續(xù)時(shí)間 參照參考文獻(xiàn)[3，4]方法，未設(shè)置特殊清洗時(shí)，LPS試劑對其后TBA檢測的干擾到第10管仍然存在，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而在 LPS 檢測后設(shè)置特殊清洗，LPS試劑對其后TBA檢測的干擾持續(xù)到第 7 管測試，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），第 8管測試與對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。 （表 3）

表1 3種不同方法檢測TBA

表2 加入LPS試劑后所測TBA含量

3 討論

目前，全自動(dòng)生化分析儀在臨床檢驗(yàn)中廣泛使用，給日常工作帶來了極大的便利[5，6]。但在實(shí)際工作中，儀器的攜帶污染現(xiàn)象難以避免[7－9]。資料顯示，攜帶污染是影響全自動(dòng)生化分析儀準(zhǔn)確度、精密度的常見原因之一[10，11]。攜帶污染與不同儀器、試劑成分及項(xiàng)目測定順序、組合以及試劑針、攪拌棒、比色杯是否清潔或損壞均有一定的關(guān)系[12]，其中常見原因是試劑間的交叉污染。試劑間的交叉污染常見于試劑中含有下一個(gè)檢測所要測定的底物，或含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)的底物有作用，因而直接干擾下一反應(yīng)的測定結(jié)果；另一種原因是該試劑所發(fā)生的反應(yīng)對下一個(gè)項(xiàng)目的反應(yīng)過程帶來間接的干擾[13－15]。

本文通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LPS的R1和R2試劑對TBA測定有明顯的正干擾，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)LPS的R1和R2試劑中含有大量的膽汁酸。在7600－110上對LPS先測定，之后行TBA測定時(shí)，TBA測定結(jié)果表現(xiàn)為假性增高，結(jié)果明顯區(qū)別于對照組。同時(shí)在對LPS測定后設(shè)置特殊清洗再行TBA測定，TBA測定結(jié)果仍假性增高，結(jié)果也高于對照組。而在7600－020上，由于LPS與TBA試劑分別處于不同的模塊中，所以并不存在LPS對TBA的攜帶污染。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明在LPS檢測后設(shè)置特殊清洗并不能完全清洗試劑針上的LPS試劑，這可能與LPS試劑中含有大量的膽汁酸，儀器并不能徹底沖洗干凈有關(guān)。

表3 LPS試劑對TBA測定干擾持續(xù)時(shí)間

本實(shí)驗(yàn)還表明LPS試劑對TBA測定的影響具有持續(xù)性，未設(shè)置特殊清洗，TBA測定的第10管仍存在攜帶污染。即使設(shè)置特殊清洗，TBA測定的第7管也存在攜帶污染。這要求實(shí)驗(yàn)室人員在平時(shí)的工作中發(fā)現(xiàn)TBA出現(xiàn)異常結(jié)果時(shí)，要及時(shí)考慮攜帶污染的情況，分析之前測定的項(xiàng)目是否包含LPS，并在不同的儀器上復(fù)查。

綜上所述，結(jié)合TBA測定中，LPS試劑對其結(jié)果正干擾影響進(jìn)行分析，可將被干擾的項(xiàng)目和干擾的項(xiàng)目在不同的模塊中安排，對分析項(xiàng)目的設(shè)置必須注意位置，加強(qiáng)防范措施，從根本上保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，為臨床提供客觀真實(shí)的診療依據(jù)。

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