上饒市獻(xiàn)血人群JK（a-b-）表型篩查及分子生物學(xué)特征分析

何輝，沈有華

(上饒市中心血站，江西 上饒 334000)

Kidd血型系統(tǒng)是人類血型系統(tǒng)之一，決定該血型系統(tǒng)分型的抗原稱為Kidd抗原或Jk抗原，分為Jka、Jkb、Jk3三種抗原。存在4種表型為Jk（a+b－）、Jk（a－b+）、Jk（a+b+）和一種罕見的表型 Jk（ab－），也稱為JKnull。Kidd血型基因編碼產(chǎn)物為尿素通道蛋白，Jk（a－b－）表型個體紅細(xì)胞可以耐受2mol/L的尿素溶液30min內(nèi)完全不溶血，而其他的表型約3min內(nèi)出現(xiàn)完全溶血[1－4]。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2016年3月至2017年5月上饒市中心血站獻(xiàn)血者血液篩查標(biāo)本38483例。

1.2 儀器與試劑 分析純尿素 （上海展云化工公司，批號 20150915），單克隆抗－JKa、抗－JKb（法國DIAGAST，批號448000）。RSP100全自動加樣儀（瑞士帝肯公司），KA2200臺式離心機(jī) （日本久保田株式會社）。

1.3 紅細(xì)胞尿素溶血實驗 采用RSP100全自動加樣儀，取12μl壓積紅細(xì)胞，用600μl生理鹽水配成2%的紅細(xì)胞懸液。在120孔OLYMPUS微孔板上，每孔先加入20μl紅細(xì)胞懸液，再加入2mol/L的尿素溶液。振蕩混勻，室溫放置30min。肉眼觀察結(jié)果，溶血者陽性，不溶血者為陰性。

1.4 JK（a－b－）血清學(xué)確認(rèn)實驗 標(biāo)本紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌3遍配成2%的紅細(xì)胞懸液。采用鹽水試管法檢測紅細(xì)胞上的JKa、JKb抗原，單克隆抗JKa、JKb 試劑各 50μl，再加入 50μl 2%的紅細(xì)胞懸液，3000r/min離心15s，肉眼觀察結(jié)果，凝集者陽性，不凝集者陰性。

1.5 Kidd血型測序和序列分析 委托上海血液中心進(jìn)行對表型為 Jk（a－b－）的獻(xiàn)血者的Jk基因編碼外顯子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并測定序列。與GenBank收錄的Kidd血型基因各外顯子的核苷酸序列比對。

2 結(jié)果

2.1 JK（a－b－）初篩和血清學(xué)確認(rèn)實驗 38483 份血液篩查標(biāo)本中有1份標(biāo)本未出現(xiàn)溶血，其余均出現(xiàn)溶血，進(jìn)行血清學(xué)實驗，確認(rèn)為JK（a－b－）血型，分布頻率約為0.0025%。

2.2 JK（a－b－）測序 對 Kidd 基因第 6 和第 9 外顯子測序結(jié)果顯示，該獻(xiàn)血者為JKB/JKB純合子，JKB基因第5內(nèi)含子剪切位點(diǎn)突變AG＞AA （純合突變），見圖 1。

3 討論

Jk（a－b－）表型分布頻率存在地域、人群的差異，本研究發(fā)現(xiàn)上饒地區(qū)分布頻率約為0.0025%，低于上海地區(qū) 0.0039%[5]、 溫州 0.014%[6]、 廣州0.02%[7]。

圖1 JK（a-b-）獻(xiàn)血者基因測序結(jié)果

Kidd血型基因11個外顯子中只有第4－11外顯子參與kidd血型蛋白肽鏈，只對參與編碼的外顯子測序。 本文中的 Jk（a－b－）基因型為 JKBΔ6/JKBΔ6，而 JKBΔ6（IVS5－1G＞A）是中國人群中最常見的 Jknull等位基因。Jk（a－b－）在不同的種族人群中分子機(jī)理不同，本例中JKB基因的第六外顯子的第5內(nèi)含子剪切位點(diǎn)突變AG＞AA（純合突變），導(dǎo)致第6外顯子的編碼序列在轉(zhuǎn)錄和翻譯過程中被遺漏，是一種導(dǎo)致 Jk（a－b－）表型的常見變異，這是導(dǎo)致Jk（a－b－）的個體紅細(xì)胞尿滲透障礙的遺傳基礎(chǔ)[8－11]。

紅細(xì)胞表面缺乏Jka、Jkb抗原，因輸血或懷孕與胎兒血型不合時可產(chǎn)生相應(yīng)抗體，其抗體與溶血性輸血反應(yīng)相關(guān)，也可導(dǎo)致新生兒溶血病[12]。臨床上遇到 Jk（a－b－）表型的患者需要輸血時，往往無法及時找到相匹配的血液，而輸注血型不合的血液可能引起輸血反應(yīng)。這種血型的人需要輸血時有3個途徑：他人捐獻(xiàn)、自身儲血、親屬間同型互助。明確該表型在本地獻(xiàn)血人群中的分布頻率，儲存該表型的獻(xiàn)血者血液，對保證該類表型患者的安全輸血有重要意義[13－15]。

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