不同周齡雌雄SJ5-SPF雞生理常數及血液生化指標的測定與分析

趙麗麗，文輝強，韓凌霞，趙　麗，彭一良，李淑蘭*

(1.哈爾濱師范大學 生命科學與技術學院，哈爾濱　150025； 2.中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所 實驗動物中心，哈爾濱　150001)

畜禽的生理常數以及血液生化指標是診斷疾病和反映機體動物健康狀況的重要依據，也是畜禽飼養、繁殖、保護和疾病防治的參考指標[1]。近年，關于不同品種雞的生理及血液生化指標的研究報道較多，但多數集中在某一個年齡段的測定，如成年徐海雞[2]、矮腳系新疆拜城油雞[3]、灰胸竹雞[4]、鹽津烏骨雞[5]等，還有一些是改變食物組成和環境條件對雞血清生化指標影響的研究，如飼料添加劑[6]、尿素和硫酸銅[7]、棉籽餅[8]、不同添加水平小球藻[9]對雞血液生理生化指標影響的報道。對于實驗動物不同年齡的血液生化指標的報道相對較少，主要見于貴妃雞[10]、SD大鼠[11]、大耳白兔[12]、BWEL-SPF種雞[13]和鱘魚[14]等。而對于隔離環境百級凈化條件下飼養的SJ5-SPF雞不同周齡常用生理參數以及血液生化指標測定的研究未見報道。本文以4周齡、20周齡、25周齡和40周齡的雌雄SJ5-SPF雞為研究對象，測定其生理參數以及血液生化指標的正常值，為禽類研究提供基礎數據，同時也為其疾病診斷和飼養管理等提供一些基礎性資料。

1　材料和方法

1.1　實驗動物

SJ5-SPF雞，4 周(病毒攻毒期)、20周(性成熟前期)、25周(性成熟后期)、40 周(產蛋高峰期)4個周齡，每個周齡雌雄各20 只。4周體重[雌(209.15±18.28)g，雄(226.60±20.60)g]，20周體重[雌(1214.75±114.39)g，雄(1666.50±108.21)g]，25周體重[雌(1537.70±134.49)g，雄(1925.20±95.56)g]，40周體重[雌(1517.15±150.70)g，雄(1852.75±200.79)g]。由中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所提供[SCXK(黑)2017-005]，在哈爾濱師范大學生命科學與技術學院完成[SYXK(黑)2017-009]。SJ5-SPF雞飼養在隔離環境中，凈化級別為百級凈化，環境為全人工控制，溫度20℃～25℃，濕度40%～60%，產蛋期光照時間每天為16 h，非產蛋期光照時間每天為8 h。

1.2　主要儀器

貝克曼庫爾特 UniCel DxC 600 Synchron 全自動生化分析儀(美國產)；臺式低速離心機 TD5(湖南產)；多道生理信號采集處理系統 RM6240C(成都儀器廠)。

4)以上試驗均為在干燥的實驗室環境下完成，在井下濕度超過90%的環境中，木墊板對錨桿工作荷載的影響將會大幅增加，可進一步進行井下現場環境下的試驗研究。

1.3　實驗方法

1.3.1取血

SJ5-SPF雞禁食12 h后，將雞翅根部用酒精棉球消毒，用一次性使用血樣采集針從翅根部靜脈采血，將血樣采集到一次性使用真空采血管內(5 mL), 采完血后放入37℃溫箱靜置大約0.5 h，然后3500 r/min離心20 min，離心后淡黃色的上清液即為血清。

1.3.2生理指標的測定

采用RM6240C多道生理信號采集處理系統測定其生理指標共5項，包括體溫(T)、呼吸頻率(R)、心率(HR)、舒張壓(DBP)和收縮壓(SBP)。

1.3.3血液生化指標的測定

將1.3.1中，離心所得的血清用貝克曼庫爾特 UniCel DxC 600 Synchron 全自動生化分析儀測定血液生化指標共19項，包括谷丙轉氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰轉移酶(GGT)、谷草轉氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、總蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TB)、直接膽紅素(DB)、間接膽紅素(IBIL)、葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TCH)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、鉀(K)、鈉(Na)、鈣(Ca)。

1.4　統計學方法

2　結果

2.1　生理指標的測定

不同周齡間，4周齡與20、25、40周齡的SJ5-SPF雞體溫、呼吸頻率、心率、舒張壓和收縮壓5項指標比較差異有顯著性。不同性別中，只有體溫在4個周齡的雌、雄之間差異無顯著性。舒張壓只在40周齡有極顯著性差異。雌、雄間心率只在40周齡差異無顯著性。呼吸頻率和收縮壓雌、雄間在4個周齡均有顯著性差異。(見表1)

2.2　血液生化指標的測定

組間相比雌性只有谷丙轉氨酶差異無顯著性(P> 0.05)，雄性僅有谷丙轉氨酶和葡萄糖差異無顯著性，其余生化指標均有顯著性差異(P< 0.05)；雌雄之間相比，谷氨酰轉移酶、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、葡萄糖、尿素氮和鈉只有1個周齡差異有顯著性(P< 0.05)，乳酸脫氫酶、總蛋白、球蛋白、白蛋白和肌酐在2個周齡差異有顯著性(P< 0.05)，堿性磷酸酶、甘油三酯和鈣在3個周齡差異有顯著性(P< 0.05)，而膽固醇和鉀在4個周齡均有顯著性差異(P< 0.05)。(見表2)

3　討論

3.1　生理參數

動物生理參數以及血液生化指標的測定能夠反應動物的生理狀態和健康狀況，對動物正常生理狀態和飼養管理具有指導意義[15]。已有研究報道[10]，貴妃雞的體溫、呼吸頻率和心率隨著周齡的變大而略有降低的趨勢，SJ5-SPF 雞體溫在各周齡之間差異不大，呼吸頻率在4周齡時顯著大于其余三個周齡，心率在四個周齡間差異有顯著性，這一結果與貴妃雞的都不同。

表1　4 周、20周、25 周和 40 周 SJ5-SPF 雞生理指標測定結果(n=20)

注：A～D表示均值由大到小，相同性別的不同周齡之間進行比較，字母相同表示差異無顯著性(P> 0.05)，字母不相同表示差異有顯著性(P< 0.05)；與雌性同周齡比較，△P< 0.05，△△P< 0.01。下同。

Note. A-D indicate the order of mean values from large to small. Within the same sex, values with the same superscript letters mean non-significant difference(P> 0.05), values with the same superscript letters are significantly different (P< 0.05). Compared with the females of the same age,△P< 0.05,△△P< 0.01. The same below.

表2　4周、20周、25周和40周SJ5-SPF雞血液生化指標測定結果(n=20)

3.2　血液生化指標

血液是構成有機體內環境的重要組成部分，內環境的變化可導致血液組成成分或性質發生特征性的變化[16]。堿性磷酸酶(ALP)在成骨過程中起一定作用，根據胡雄飛[17]研究顯示4周齡SD大鼠ALP含量顯著高于其余三個周齡，本文SJ5-SPF雞血清ALP與上述SD大鼠的研究結果一致，即4周齡也同樣高于其它三個周齡，SD大鼠屬于哺乳類，而SPF雞屬于鳥類，二者之所以相同，是由ALP的作用決定的，研究表明，血清中的ALP主要由成骨細胞和肝臟合成分泌，是反映骨代謝的重要指標。在骨代謝旺盛時，成骨細胞活躍，ALP 分泌量增加，存在于成骨細胞的周圍及其表面，極易釋入血中，出現血清ALP 活性上升。ALP在成骨過程中水解磷酸酯，為羥磷灰石的沉積提供必需的磷酸，同時水解焦磷酸鹽，解除其對骨礦物質形成的抑制作用，在骨骼鈣化中起關鍵作用，故未成熟動物的血清ALP活性較成熟動物高[18]，又有文獻報道[19]，SD大鼠性成熟期為出生后60 d左右(即8周許)，而SJ5-SPF雞性成熟期大約為20周左右，因此4周齡無論對于SD大鼠還是SJ5-SPF雞都屬于幼年期，也就是未成年期，此期骨代謝旺盛，成骨細胞活躍，ALP分泌量增加。

谷氨酰轉移酶(GGT)主要來源于肝臟，GGT增高通常反映肝臟脂肪的沉積和內臟性肥胖[20]。文中數據顯示40周齡SJ5-SPF雞GGT雄性值顯著高于雌性，與成年的四川白兔GGT雄性高于雌性的研究結果一致[21]，說明雄性肝臟分泌谷氨酰轉移酶的能力較雌性強。

谷草轉氨酶(AST)是存在于動物肝細胞中催化氨基酸與酮酸之間氨基轉移的一類酶，在氨基酸的分解和合成中起重要作用，本研究測得40周齡SJ5-SPF雞的谷草轉氨酶含量雌、雄之間存在差異，即雄性高于雌性，這與成年徐海雞[2]的報道一致。

谷丙轉氨酶(ALT)雖然存在于許多組織中，但臨床上主要作為肝功能的診斷指標。ALT主要存在于肝細胞漿內，催化L-丙氨酸和α-同戊二酸二者之間可逆的氨基轉換，在糖異生及氨基酸代謝中有主要作用。本研究表明SJ5-SPF雞ALT肝酶與糖代謝水平的相關性研究在4個周齡差異無顯著性與梅里斯山羊的孕期、哺乳期及不同生理狀態下差異無顯著性的研究結果一致[22]。說明這兩個物種在不同周齡以及不同生理狀態下氨基酸的代謝水平相當。

乳酸脫氫酶(LDH)是糖無氧酵解及糖異生的重要酶系之一。根據Akrami等[14]研究發現，4個年齡段的鱘魚乳酸脫氫酶測量值雌性均高于雄性，而4個周齡的SJ5-SPF雞乳酸脫氫酶測量值雄性均高于雌性。這說明鱘魚雄性體內糖的分解代謝以有氧分解為主，而SJ5-SPF雞則與此相反，即雌性體內糖的分解以有氧代謝為主，上述兩種實驗動物雌、雄間與乳酸脫氫酶相關的分解代謝能力存在一定差別，差別的原因還有待于進一步探討。

根據SPF級SD大鼠的研究結果[11]表明總蛋白含量最高的時期是24周，而本研究所顯示SJ5-SPF雞數據總蛋白含量最高在40周，這可能與不同種類動物的營養需求及物質代謝能力有關。本研究結果表明，20周、25周SJ5-SPF雄雞白蛋白和球蛋白均顯著或極顯著低于雌雞，這與紅腹錦雞[23]、鹽津烏骨雞[5]、灰胸竹雞[4]的研究結果一致，在一定程度上，反映了雌、雄雞之間肝臟等臟器的代謝情況。

25周SJ5-SPF雞的總膽紅素測量值比成年的暗腹雪雞和海蘭褐雞[24]低，直接膽紅素值比暗腹雪雞和海蘭褐雞的高，由此可得出SJ5-SPF雞間接膽紅素含量比暗腹雪雞、海蘭褐雞含量低。

本研究測得的20周、25周、40周SJ5-SPF雞的葡萄糖含量雌、雄間差異無顯著性，這與白腹錦雞[25]研究結果一致，與成體鹽津烏骨雞[5]、拉薩白雞[26]中雄雞葡萄糖含量顯著大于雌雞的研究結果不同。

膽固醇在體內的主要生理作用是形成膽酸、構成細胞膜、合成激素，甘油三酯含量的高低反映了脂類的吸收和代謝狀況。本研究表明25周和40周的膽固醇、甘油三酯2項指標雌、雄間差異有顯著性，且雌性大于雄性，這與鹽津烏骨雞[5]、白腹錦雞[25]研究結果一致，其原因可能與母雞產蛋的蛋黃中膽固醇含量高和公雞的脂肪分解能力較強在體內沉積較少有關。

血液中肌酐是肌肉代謝的產物，本實驗測得25周和40周SJ5-SPF雄雞肌酐含量低于雌雞，這與成體鹽津烏骨雞[5]、白腹錦雞[25]的研究結果不一致，其差異產生的原因可能與雞的品種有關。40周SJ5-SPF雞的尿素氮雌、雄間差異有顯著性，且雌雞高于雄雞，這與成體紅腹錦雞[23]的研究結果相同，這說明禽類物種在血液的生化指標上具有一定的相似性。

Ca2+、Na+、K+等離子的濃度對判斷體內滲透壓、血液pH、肌肉的正常興奮性等都具有重要作用[21]。SJ5-SPF雞的K+含量在4個周齡中雌、雄之間差異有顯著性，Ca2+在4、25和40周齡中雌雄之間差異有顯著性，Na+只在4周齡間差異有顯著性。其原因可能與不同年齡、性別動物的營養需求及物質代謝能力有關。

綜上所述，SJ5-SPF雞不同周齡的常用生理參數以及血液生化的各種指標與年齡和性別都有關，通過對SJ5-SPF雞在不同周齡以及同周齡不同性別生理參數以及血液生化各項指標的正常值的測定，為使用SPF級禽類實驗研究的科研工作者提供重要的參考數據，同時也為國家禽類數據庫的建立補充資料。