黑果腺肋花楸的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)

田明芳

黑果腺肋花楸具有食用、藥用、園林觀賞和生態(tài)環(huán)境改善等價值，對人類十分有益，在種植地區(qū)，人們已投入生產(chǎn)。黑果腺肋花楸適應(yīng)性極強，具有很強的抗寒能力和抗旱能力，我國有大片干旱地區(qū)和高寒地帶，若能引種成功，將擴大種質(zhì)資源對土地的利用率。下面主要圍繞黑果腺肋花楸的引種及利用組織培養(yǎng)快繁技術(shù)展開探討，從組織培養(yǎng)快繁技術(shù)的各個階段的必要操作和注意事項進行論述。

1.研究意義

黑果腺肋花楸屬薔薇科，原產(chǎn)地是北美東北部地區(qū)，極地特有的環(huán)境條件，那里的植物都能蓄積較多人體所需而溫和地區(qū)不能供給給人體的微量元素。黑果腺肋花楸色、香、味俱全，具有很高的觀賞價值，還富含黃酮等物質(zhì)，其提取物對心腦血管疾病有突出的療效，在西方適宜種植的國家已用來提取藥物成分。黑果腺肋花楸還有不老莓的別名，顧名思義，此果有很好的保健作用，富含大量維生素和多酚，含有抗氧化劑，可以抗衰老，用來萃取精油支撐化妝品也是不二之選。我國除遼寧省干旱地區(qū)造林研究所引種外，暫無栽培。黑果腺肋花楸采用各種繁殖方式均可進行繁殖，采用組織培養(yǎng)快繁技術(shù)可以人工控制環(huán)境，提高抗逆性，增強適應(yīng)性。引入新品種，可以增加園林觀賞性。我國有大量的薔薇科植物，如月季、桃、李、杏種植栽培歷史悠久，因而種植黑果腺肋花楸有很大的可能性。如果能引種栽培成功，后期大面積推廣，對我國種質(zhì)資源利用將會有突出貢獻。

2.無菌培養(yǎng)物的建立

2.1外植體的選擇

組織培養(yǎng)快速繁殖選擇的外植體一般為莖尖、芽、嫩梢和莖段、鱗芽和原球莖等，根據(jù)植物本身的特性選擇外植體。黑果腺肋花楸莖尖容易進行套袋采摘及無菌化處理，而且容易形成愈傷組織，因而選用帶有三四個芽的莖尖進行組織培養(yǎng)。

2.2外植體的滅菌與接種

取回的外植體應(yīng)盡快進行表面滅菌處理，剪除多余部分，先用自來水沖洗30min以上，在70%的酒精中迅速浸泡30s左右，再用稀釋15倍的潔爾滅溶液浸泡3min，取出后用無菌水沖洗4～5次，在無菌條件下接種到已備好的培養(yǎng)基上。

3.外植體生長與分化的誘導(dǎo)

比較不同濃度培養(yǎng)基中外植體的生長可看出，適宜濃度的培養(yǎng)基下外植體發(fā)育快，較易形成愈傷組織，出芽率高，濃度過高或過低都會影響外植體的發(fā)育速度和出芽速度，甚至導(dǎo)致外植體階段就死亡的現(xiàn)象。

為誘導(dǎo)芽的分化生長，據(jù)實驗數(shù)據(jù)得出加入0.2mg·L-1的NAA，1.0mg·L-1的6-BA時，出芽率最高，莖尖離體組織生長旺盛，基部形成芽叢。在出芽階段，要保證操作在無菌環(huán)境下進行，否則容易導(dǎo)致病毒細(xì)菌感染。根據(jù)外植體形成愈傷組織和生長情況適時控制培養(yǎng)基溫度和光照時間，每隔一周記錄出芽情況。

4.生根與壯苗培養(yǎng)

由于繼代培養(yǎng)形成的不頂芽和側(cè)芽等一般沒有根，必須轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。經(jīng)過實驗表明，培養(yǎng)基配制為MS+ABT6.0mg·L-1時，黑果腺肋花楸的離體組織生根率可以達到100%。因而采用此培養(yǎng)基，待根原基形成時立即移栽，不容易感染，而且栽后能很快生根，具有較高的成活率。

壯苗時可以控制室內(nèi)溫度，加入培養(yǎng)基中的糖含量。黑果腺肋花楸本身含有多種礦物質(zhì)元素，因而在培養(yǎng)基上可以加入礦物質(zhì)元素和微量元素，增加培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分。

5.試管苗的出瓶與栽移

隨著試管苗瓶外生根技術(shù)的發(fā)展，工廠常采用穴盤苗進行移栽，不僅簡單易行，育苗周期短，而且操作流程一體化，植株抗逆性強、繁殖系數(shù)高。試管苗大小的選擇和黑果腺肋花楸的植株大小有密切關(guān)系，太小會抑制根的延伸與生長，太大又會增加培養(yǎng)基物質(zhì)的使用量。

生根苗馴化后可移植到經(jīng)高溫消毒加有50～60%草炭、30～40%蛭石、10%左右珍珠巖的方形穴盤中進行后續(xù)生長?？刂仆寥繮H在5.0～8.0之間，黑果腺肋花楸的抗寒性和抗旱性較強，對溫度沒有太高的要求。若有葉片老化脫落，應(yīng)立即處理，防止腐爛，影響其他部位的生長，也要及時摘掉枯黃葉片，保持無細(xì)菌、無病毒感染的環(huán)境。

育苗時要多次少量澆水，防止植株倒伏或發(fā)育不良，按時定量施肥能讓植株長勢更旺，保證充足的光照，促進光合作用，可以積累植株體內(nèi)的花青素，增加每株的花青素含量。

作對照實驗，可以比較不同情況下植株的長勢情況，進行拍照存檔。從對照實驗中可以得到黑果腺肋花楸的最適合的培養(yǎng)條件，把植物所需的土壤、水分、光照、溫度、有效積溫都調(diào)節(jié)好，能夠快速育種。

由于引進新品種沒有前人的操作經(jīng)驗，借鑒常規(guī)的組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，應(yīng)保證操作的熟練度和整個過程的無菌化進行，防止植株感染細(xì)菌、病毒。控制各個階段的光照時間和溫度，每隔三四天記錄植株的長勢情況，移栽試管苗后適當(dāng)?shù)臐菜┓?，進行養(yǎng)護管理。建立適宜的環(huán)境和自動化大規(guī)模生產(chǎn)與植株的生長有很大聯(lián)系，如果能進行工廠化生產(chǎn)栽培，那么黑果腺肋花楸將會有很大的前景。

（作者單位：123100國有阜蒙縣林業(yè)科技示范林場）