血清淀粉樣蛋白A聯合腫瘤標志物檢測在肺癌診療中的應用

燕丕宏，矯 秀，巨愛寧，宋珍明，湯瀅秀

(濱州醫學院煙臺附屬醫院檢驗科，山東煙臺 264100)

肺癌是一種常見的惡性腫瘤，在全世界范圍內其病死率和發病率都排在惡性腫瘤之首。在我國，每年病死于肺癌的例數大約有60萬[1]。肺癌對人類的健康造成嚴重威脅，檢測血清腫瘤標志物(TM)操作簡單且是一種非侵襲的方式，對患者進行靜脈采血即可，潛在應用價值較高。在腫瘤生成及增殖過程中，宿主與腫瘤互相作用或腫瘤細胞合成或分泌的物質稱為TM。在健康人體內TM水平極低，但大量存在于腫瘤患者體內。酶類、抗原類、糖蛋白類、激素類、細胞表面腫瘤抗原類為TM。在肺癌的病理分析、診斷鑒別、療效觀察、預后判斷等方面，TM的應用十分廣泛，發揮著重要作用[2-3]。在肺癌診斷中，聯合檢測TM是肺癌診治的熱點與重點，癌胚抗原(CEA)、鱗狀上皮細胞癌抗原(SCC)、血清細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、糖類抗原125(CA125)、糖類抗原199(CA199)應用廣泛[4]。本研究選擇血清淀粉樣蛋白A(SAA)作為參考，研究其在診斷肺癌中的應用，并通過對CEA、CA125、CA199、SCC、CYFRA21-1的測定，探究在肺癌診斷中其單一檢測和聯合檢測的應用價值，選取診斷價值高的指標，分析各項指標聯合SAA檢測在肺癌治療中的價值，為肺癌的早期診斷提供數據理論支持，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年4月至2016年5月本院收治的104例患者作為研究對象，分為肺癌組73例和肺部良性疾病組31例。肺癌組男50例，女23例；早期(Ⅰ和Ⅱ期)19例，中期(Ⅲ期)12例，晚期(Ⅳ期)42例；平均年齡(60.47±9.36)歲。所有肺癌患者具有完整可查的病歷資料，經細胞學或組織病理學檢測為原發性肺癌。肺部良性疾病組男18例，女13例；平均年齡(59.89±12.13)歲。另選取健康體檢者50例作為健康對照組，男29例，女21例；平均年齡(56.74±10.67)歲。各組研究對象的年齡、性別等一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2試劑與儀器

1.2.1試劑 CA199、CA125、SCC、CEA化學發光試劑盒由美國雅培公司提供。SAA酶聯免疫吸附試驗試劑盒ab100635由英國abcam公司提供。

1.2.2儀器 雅培全自動化學發光分析儀I2000由美國雅培公司提供；全自動酶標分析儀由美國Bio-Tek公司提供；-80 ℃超低溫冰箱由日本SANY公司提供；可調式微量移液器由德國Eppendorf公司提供。

1.3方法

1.3.1采集標本 (1)采集住院患者空腹靜脈血3 mL，3 000 r/min離心5 min，分離血清后當日檢測，具體操作嚴格按試劑盒說明書及科室標準操作程序進行。

1.3.2正常參考值 正常參考值由試劑盒提供，以此作為標準判定陽性：CA125>35 U/mL,SCC>1.5 ng/mL,CYFRA21-1>2.08 ng/mL,CEA>5 ng/mL,CA199>37 U/mL[5]。

1.3.3SAA測定 (1)留取標本,取所有入組對象空腹血，將其自然凝固10～20 min，使用3 000 r/min離心機離心20 min，取上清液2 mL保存于超低溫冰箱內，同樣方法收集治療后肺癌患者血清，診斷后統一檢測其血清SAA水平。(2)制備試驗試劑,將5×B稀釋液15 mL稀釋為1×75 mL溶液;將20×洗滌液搖勻至無結晶物，稀釋20×20 mL的濃縮液為1×400 mL的溶液;搖勻SAA溶液，加入100 μL稀釋液B，混合均勻;將800×辣根過氧化物酶(HRP)溶液搖勻。混合80 mL稀釋液B與100 μL HRP溶液，配成1×HRP溶液。(3)配制標準品,將SAA標準品搖勻，標記1～8個試管;制備0～300 ng/mL的標準品。(4)準備樣品,使用稀釋劑將所有樣品稀釋5倍后備用。(5)檢測SAA,加樣，在酶標板的16個孔中加入標準品，8個為重復孔，其余為標本孔，將100 μL標本加入標本孔中。加樣時盡量不觸及孔壁，加于酶標孔底部，輕晃搖勻;洗滌溫育，揭掉封板膜，甩干，每孔加1×洗滌液，30 s靜置后棄去，重復4次后拍干;加抗體：將血SAA用生物素標記，然后每孔加入1×檢測抗體100 μL，密封后輕輕振蕩搖勻;將液體棄置，將2步驟重復進行;加酶：每孔加100 μL 1×HRP,密封搖勻，進行45 min孵育;洗滌溫育：將液體棄置，重復2步驟;顯色：每孔中加100 μL的3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺二鹽酸底物，密封后避光震蕩30 min;終止：將50 μL終止液加入每孔，終止反應;測定：調零空白孔，加終止液15 min以內測量各孔吸光度。

1.4納入和排除標準

1.4.1納入標準 其他器官無原發癌；肺癌組病例經檢查確診；無免疫治療史，無放化療史；健康對照組無重要器官疾病，相關檢查正常。

1.4.2排除標準 資料不完整者；近期獻血者；妊娠期、月經期；脂血、溶血者；重度營養不良者；重要器官合并功能障礙者。

2 結 果

2.13組研究對象5種TM表達水平比較 見表1。肺癌組患者血清CA199、CEA、SCC、CYFRA21-1水平明顯高于健康對照組和肺部良性疾病組，差異均有統計學意義(P<0.05)。

表1 3組研究對象5種TM表達水平比較[中位數(最小值～最大值) ]

注:與肺部良性疾病組比較，*P<0.05；與健康對照組比較，#P<0.05

表2 5種TM診斷肺癌的特異度和敏感度的表達[%(n/n)]

注：與其他4項比較，*P<0.05；與單項指標比較，#P<0.05

2.25種TM診斷肺癌的特異度和敏感度 見表2。與其他4項指標比較，CA125診斷肺癌的特異度最低，敏感度最高，差異有統計學意義(P=0.011)；聯合檢測與單項檢測比較，敏感度明顯升高，差異有統計學意義(P=0.008)。

2.3肺癌不同分期5種TM血清表達水平比較 見表3。晚期肺癌患者CEA表達水平明顯高于中期和早期，差異均有統計學意義(P=0.001)；晚、中期肺癌患者CA199和CA125水平明顯高于早期，差異有統計學意義(P=0.027)；早、中、晚期肺癌患者SCC與CYFRA21-1水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。對癌癥分期與3種相關TM相關性進行分析，CA199(P<0.05,r=0.249)、CA125(P=0.05,r=0.216)、CEA(P<0.05,r=0.341)均呈正相關。

表3 肺癌不同分期5種TM血清表達水平比較[中位數(最小值～最大值) ]

注：與中期比較，*P<0.05；與早期比較，#P<0.05

2.4與肺癌不同分期有關的3種TM的敏感度比較 見表4。早期與中、晚期肺癌患者比較，CEA、CA199對于肺癌的診斷敏感度偏低，差異有統計學意義(P=0.032)，3項指標聯合檢測對肺癌診斷的敏感度有所升高，早期為52.63%，中期為75.00%，晚期為80.95%。

注:與中期比較，*P<0.05；與晚期比較，#P<0.05

2.5聯合檢測和單項檢測對肺癌診斷3項指標的價值 見表5。SAA、CYFRA21-1、CEA具有低敏感度、高特異度的特點，診斷肺癌的準確率由高到低排列為CYFRA21-1、SAA、CEA，單項檢測與聯合檢測比較，特異度、敏感度和準確率都有所不及，其中SAA聯合CYFRA21-1對肺癌診斷的特異度、敏感度和準確率最高。

表5 3項指標單項和聯合檢測的特異度、敏感度和準確率比較(%)

3 討 論

肺癌的病死率和發病率較高，且發病隱匿，早發現、早治療對于肺癌的治療有十分重要的意義。肺癌TM檢測在臨床檢測肺癌中應用廣泛，組合多樣化，但是尚無最優的標志物檢測群[6-8]。TM對腫瘤的檢出率越高，目前臨床認為對TM聯合檢測應控制在3種以內。在我國，SCC、CYFRA21-1、CA199、CA125及CEA聯合檢測應用廣泛[9-11]。近年來，在肺癌診療中CA199、CEA、CA125應用最多,可以認為肺部疾病患者，CEA升高則患者肺部發生病變的概率較大；但是CA199在診斷肺癌中存在假陽性率，對鑒別良性肺疾病和肺癌幾乎無幫助。SAA是一種急性時相反應蛋白，主要負責在血脂中運送高密度脂蛋白，肺癌患者SAA水平高于健康人群。

本文中肺癌組患者CEA水平明顯高于健康對照組和肺部良性疾病組，差異均有統計學意義(P<0.05)，對非肺癌特異度和敏感度的診斷分別為93.55%和35.62%。CEA水平的表達與肺癌分期比較表明，其水平越高患者病情越嚴重，CEA不適合于檢測早期肺癌[12]。CA125是一種高分子糖蛋白，微量表達于健康人血清中。健康對照組CA125表達水平最低，肺癌組最高，對肺癌診斷的特異度和敏感度分別為64.52%和60.27%。CA125單獨診斷肺癌特異度較差，雖然敏感度較高但是難以區分腫瘤性質，在臨床上需聯合其他標志物進行檢測。CA199存在于一些惡性腫瘤組織中，主要用于消化道腫瘤的診斷。肺癌組患者CA199血清表達水平最高，對肺癌診斷的特異度和敏感度分別為87.10%和35.62%，CA199在診斷肺癌中有十分重要的價值。

綜上所述，SAA、CA125、CEA、SCC、CYFRA21-1、CA199可以鑒別肺部良、惡性腫瘤；單項TM檢測對肺癌診斷的敏感度較低，聯合檢測可有效提高敏感度；CA199、CA125、CEA 3種TM均與癌癥分期呈正相關，其中CEA有最高的相關性；肺癌血清TM早期升高不明顯，具有較低敏感度，聯合檢測能夠提高早期肺癌的檢出率。SAA聯合CYFRA21-1診斷效果最好。

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