不同廠家鹽酸小檗胺片溶出度的比較研究

成都中醫藥大學，四川 成都 611137

鹽酸小檗胺(Berbamine Hydrochloride)是從小檗科植物甘肅小檗(BerberiskansuensisSchneid.)[1]同屬植物中分離得到的一種天然來源的化合物，是一種雙芐基異喹啉類生物堿，也是一種天然來源的鈣調素拮抗劑[1]，在臨床上常被用于治療各種原因引起的白細胞減少癥。前期研究表明，鹽酸小檗胺具有輔助鹽酸小檗堿降低四氧嘧啶小鼠空腹血糖的增效作用[2]，糖尿病患者發生青光眼[3]、白內障[4]的比例顯著增高，有研究表明鹽酸小檗胺具有青光眼視神經保護作用[3]，外用小檗胺滴眼液對糖尿病性白內障具有顯著的防治作用[5]，表明鹽酸小檗胺在治療糖尿病眼病的新藥研發方面具有重大的意義。

目前，鹽酸小檗胺上市劑型僅有片劑，有薄膜衣片、糖衣片兩種規格，其溶出行為可能因為包衣材料的差異而不同[6-7]，由于鹽酸小檗胺對青光眼視神經保護作用具有劑量依賴性[3]，與血藥濃度有關，在體外又與溶出度相關。但是，有關鹽酸小檗胺片的溶出度試驗卻鮮有報道，為了了解鹽酸小檗胺在胃腸道的溶出行為，預測其生物利用度，在前期對鹽酸小檗胺的溶解度和油水分配系數試驗結果的基礎上，本研究模擬體外胃、腸道環境，對鹽酸小檗胺片的溶出度進行測定，為鹽酸小檗胺片的包衣工藝選擇提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Rcz-6B3型藥物溶出度儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)；UV-1800型紫外可見分光光度計(上海美譜達儀器有限公司)；pHS-3C型酸度計(成都世紀方舟科技有限公司)；BSA124S型電子天平(北京賽多利斯科學儀器有限公司，d=0.1 mg)；BP121S十萬分之一電子天平(德國賽多利斯科學儀器有限公司, d=0.01 mg)；TDZ5-WS臺式低速離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司)；ULUP-I-10T超純水機(成都超純科技有限公司)。

1.2 試藥 胰蛋白酶(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20141203)；胃蛋白酶(如吉生物科技有限公司，批號：150622)；鹽酸小檗胺對照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批號：MUST- 2015011304，純度：98.55%)；氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、濃鹽酸等試劑均為分析純。

1.3 實驗原料 購買市售4個廠家生產的鹽酸小檗胺片，其來源信息見表1。

表1 鹽酸小檗胺片來源信息表

2 實驗方法

2.1 人工胃液和人工腸液的配制 根據《中國藥典》2015版四部通則0921“崩解時限檢查法”[8]118-119的方法配制實驗用相關溶出介質體外模擬的人工胃、腸液，根據說明使用相關試藥配制成人工胃液(加酶/不加酶)和人工腸液(加酶/不加酶)作為溶出介質，備用。

2.2 鹽酸小檗胺儲備液的配制 取鹽酸小檗胺對照品適量，精密稱定，加入甲醇并定容制成每1 mL溶液含鹽酸小檗胺4.02 mg的溶液，作為對照品儲備液。

2.3 標準曲線的繪制 分別吸取適量鹽酸小檗胺儲備液，分別用新配制的人工胃液(不加酶)和人工腸液(不加酶)制成濃度為12.06、16.08、24.12、32.16、40.20、44.22 μg/mL鹽酸小檗胺對照品溶液(人工胃液)和鹽酸小檗胺對照品溶液(人工腸液)，以相應的溶出介質作空白溶液，于282 nm波長[2]處測定其紫外吸光度。

2.4 溶出度的測定 根據《中國藥典》2015年版四部0931“溶出度與釋放度測定方法”的“槳法”[8]121-122進行鹽酸小檗胺的溶出度測定。按照藥典的規定，分別將新鮮配置并經過通過微孔濾膜-超聲的脫氣處理之后的人工胃、腸液(加酶/不加酶)四種溶液各1000 mL作為溶出介質，保持溶出度儀轉槳的運轉速度為50 r/min，溶出介質溫度設定為(37±0.5)℃，分別在試驗開始后5、10、15、20、25、30、40、50、60 min間隔內取樣4 mL(同時加入等量相應溶出介質)，立即經0.45 μm微孔濾膜濾過，以相應的溶出介質為空白溶劑，在282 nm處測定吸光度，分別計算4個批次鹽酸小檗胺片各個時間點的溶出百分數并繪制相應的累計溶出度。

2.5 不同廠家鹽酸小檗胺片在不同介質中的溶出曲線相似的評價 對不同廠家的鹽酸小檗胺片的溶出曲線進行相似因子擬合，當50≤f2≤100時，認為兩條溶出曲線相似，小于50則認為不相似[9]，計算公式為：

2.6 統計方法 主成分分析法(Principal Components Analysis，PCA)是在不丟掉原來主要信息的前提下，利用多個變量之間的關系，采用降維的思想將原來多個變量組合成少數幾個互不相關的新的綜合變量的統計方法。現主成分分析法已被廣泛應用于藥物色譜、光譜分析以及藥效學相關數據的處理分析之中[10-11]。分層聚類分析(Hierarchical Cluster Analysis，HCA)是以“物以類聚”為原則，將不同分組變量降維處理分類到不同的類，同類對象具有很大的相似性、不同類對象有很大的相異性[12]。因此，PCA和HCA可以很好地處理本文中的數據，挖掘出影響不同廠家溶出度結果的主要因素。

3 實驗結果

3.1 標準曲線的繪制 按照“2.3”項下操作，于282 nm波長處測定其不同濃度的鹽酸小檗胺對照品溶液的紫外吸光度，得到相應的回歸方程：在人工胃液中y=0.0547x，R=0.9999；在人工腸液中y=0.0546x+0.0015，R=0.9997。結果表明鹽酸小檗胺溶液在12.06～44.22 μg/mL范圍內吸光度與濃度線性關系良好，且兩條標準曲線具有等效性。

3.2 溶出度的測定 按照“2.4”項下操作，得到4個批次鹽酸小檗胺片各個時間點的相應的累計溶出度結果見表2、3和圖1、2。

時間/min溶出百分數/%XBAP-1XBAP-2XBAP-3XBAP-450.02±0.0610.60±5.260.00±0.0016.86±4.651011.92±4.1723.88±8.400.69±1.5138.54±3.421535.39±4.5233.68±3.5111.93±4.7944.27±1.112040.68±4.1339.59±3.1534.31±7.1445.52±1.742543.19±3.9940.25±1.3743.73±2.2145.01±1.633044.27±3.7540.52±1.4045.91±1.3646.21±2.564045.51±3.6640.72±1.2547.13±2.2145.36±1.415045.89±3.8840.69±1.1446.84±1.5945.45±1.706045.76±3.4240.83±1.7747.45±1.9845.71±2.20

時間/min溶出百分數/%XBAP-1XBAP-2XBAP-3XBAP-450.98±0.654.30±1.740.00±0.0020.76±5.04103.96±1.3821.41±4.380.00±0.0038.70±2.401523.25±8.7532.88±4.594.27±2.7242.51±1.162037.70±3.6440.34±3.4224.29±7.6043.32±1.492541.58±2.9043.50±2.8440.74±4.0343.30±1.273043.10±2.9643.92±1.3943.01±2.8843.28±1.134043.36±3.0243.79±0.3444.59±3.0942.19±1.235044.73±3.2244.09±2.1745.45±2.6442.41±1.366044.67±2.9246.55±6.1745.36±3.3142.81±0.66

3.3 不同廠家鹽酸小檗胺片在不同介質中的溶出曲線相似的評價 將表2、3的結果帶入f2的計算公式，得出4批鹽酸小檗胺片的溶出曲線相似因子擬合結果，見表4、5。

表4 不同廠家鹽酸小檗胺片在人工胃液中(不加酶)的溶出曲線相似因子擬合結果

表5 不同廠家鹽酸小檗胺片人工腸液中(不加酶)的溶出曲線相似因子擬合結果

由相似因子擬合結果可以看出，人工胃液(不加酶)和人工腸液(不加酶)中，同種包衣種類的鹽酸小檗胺片間的溶出曲線相似，例如糖衣片XBAP-1和XBAP-3，薄膜衣片XBAP-2和XBAP-4的溶出曲線相似；而不同種包衣種類的鹽酸小檗胺片間，糖衣片XBAP-3與薄膜衣片XBAP-2和XBAP-4、薄膜衣片XBAP-4與糖衣片XBAP-1和XBAP-3的溶出度曲線不相似。

3.4 主成分分析(PCA)和分層聚類分析(HCA)結果 在對表2、3的數據進行反正切標準化處理后，采用Unscrambler 9.7軟件，分別對四批鹽酸小檗胺片在兩種溶出介質中的溶出度進行PCA分析，結果如圖3、4、5和6所示。

4 討論

4.1 鹽酸小檗胺片溶出介質的確定 實驗前期的數據表明：鹽酸小檗胺片在溶出介質人工胃液(加酶)和人工胃液(不加酶)、人工腸液(加酶)和人工腸液(不加酶)中的溶出效果相差不大，因此本實驗在正式試驗階段均采用的是不加酶的人工胃液和人工腸液作為溶出介質。

4.2 鹽酸小檗胺片不同介質中的溶解度 由表2、3可以得出鹽酸小檗胺片在人工胃液(不加酶)人工腸液(不加酶)中的溶解度均在40%～50%之間，可能是因為片劑中的輔料和制備工藝的不同會在一定程度上影響溶出效果，另外，片劑中的水分和標示量也會一定程度上影響最終計算結果。國家藥品監督管理局藥品標準鹽酸小檗胺項下規定了本品干燥失重不得超過10%[13]，實驗時以檢驗符合規定的鹽酸小檗胺片投料，實際每片片劑中含有28 mg的鹽酸小檗胺按干燥失重折算后應為25.2 mg,以標示量的90%～110%折算[14]，鹽酸小檗胺片含量限度為每片片劑以鹽酸小檗胺計算不低于22.68 mg。

4.3 鹽酸小檗胺薄膜衣片和糖衣片的比較 溶出度的測定結果結合PCA和HCA的分析可以看出：在人工胃液(不加酶)中，糖衣片XBAP-1和XBAP-3與薄膜衣片XBAP-2和XBAP-4有不同的溶出行為，差異主要表現在前15 min的溶出，且糖衣片XBAP-3樣品間呈離散狀態；在人工腸液(不加酶)中，糖衣片XBAP-3與薄膜衣片XBAP-2和XBAP-4有不同的溶出行為，糖衣片XBAP-1介于兩者之間， 且樣品間呈離散狀態。所以，在相同的溶出條件下，鹽酸小檗胺薄膜衣片比鹽酸小檗胺糖衣片更加穩定，可見鹽酸小檗胺薄膜衣片規格的工藝較糖衣片更加合理。

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