染色法快速檢測面粉中蟲卵技術(shù)研究

◎ 莊義捷

（清遠(yuǎn)市糧食儲備庫，廣東 清遠(yuǎn) 511500）

面粉是麥類糧食的主要產(chǎn)品及重要中間產(chǎn)品，其加工、檢測、儲藏是關(guān)系民生發(fā)展的重要事務(wù)。面粉的檢測與儲藏并沒有相應(yīng)較為完善成熟的方法，以達(dá)到高效經(jīng)濟(jì)。在面粉的進(jìn)出口貿(mào)易中，面粉中昆蟲蟲卵的檢測是一項判斷面粉質(zhì)量好壞的指標(biāo)，建立一種快速檢測面粉中昆蟲蟲卵含量的方法是面粉產(chǎn)業(yè)中亟待解決的重要問題[1-2]，本課題對染色法快速檢測面粉中蟲卵進(jìn)行了深入研究。

1 材料與方法

1.1 供試蟲卵

選取面粉中常見害蟲赤擬谷盜作為蟲卵來源，文獻(xiàn)和實踐證明赤擬谷盜蟲卵不能通過80#篩子。選用單一面粉作為飼料，面粉先經(jīng)過80#篩子，篩去大于80#篩孔的面粉或面團(tuán)。挑選體表較為干凈的赤擬谷盜進(jìn)行飼養(yǎng)。經(jīng)過24 h就可以進(jìn)行蟲卵采集。收集后暫存于培養(yǎng)皿中，待用。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器名稱、型號和生產(chǎn)廠家見表1。

表1 主要儀器表

1.2.2 主要試劑

本研究所利用的主要試劑名稱、型號和生產(chǎn)廠家見表2。

表2 主要試劑表

1.2.3 試劑的配制

硫酸（1∶19）：取5 mL濃硫酸溶于95 mL蒸餾水中。置于玻璃瓶中保存。

0.1%溴甲酚綠：稱取溴甲酚綠0.1 g，溶于含有1.45 mL 0.1 mol/L氫氧化鈉溶液的蒸餾水溶劑中。置于棕色細(xì)口瓶中保存。

0.05%酸性品紅：稱取0.05 g酸性品紅，溶于99.95 mL蒸餾水中。置于棕色細(xì)口瓶中保存。

1.3 方法

1.3.1 蟲卵的采集和含蟲卵的測試樣品的準(zhǔn)備

人工飼養(yǎng)赤擬谷盜來獲取同一時間段產(chǎn)下的蟲卵，經(jīng)篩選后收集到專用容器中，待用。

FDA規(guī)定面粉蟲體碎片禁售水平為50 g面粉中75個昆蟲碎片，因此將7、14、28、56、112粒蟲卵分別加入5 g面粉中，作為待檢驗樣品。分析天平稱取5 g的面粉放在自封袋中，共稱取15個樣品，然后分別查取一定數(shù)量的害蟲蟲卵放在稱取好的5 g的面粉試樣中，混合均勻，每個蟲卵濃度準(zhǔn)備3個樣品，共需要準(zhǔn)備15個樣品。

1.3.2 試驗方法

準(zhǔn)確稱取5 g小麥粉，并在開始分別加入7、14、28、56、112粒赤擬谷盜的蟲卵。完全混合后的面粉樣品用80目篩網(wǎng)篩選并收集面粉殘留物與蟲卵。面粉顆粒包裹的蟲卵轉(zhuǎn)移到250 mL燒杯中，并用2～3 mL乙醇潤濕，加入5 mL稀硫酸（1∶19）后蓋上一培養(yǎng)皿，并保持10 min的蒸氣浴。產(chǎn)物通過布氏漏斗低壓抽濾。對于每一組，在無吸力的情況下加入10 mL染色劑。2～3 min后，通過輕微的吸力將染色劑透過濾紙。后將濾紙轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中，用雙目顯微鏡觀察，統(tǒng)計卵數(shù)。計算蟲卵檢測率。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)過染色試驗后，溴甲酚綠將蟲卵染成黃橙色，面粉染成褐綠色，如圖1所示。酸性品紅將蟲卵與面粉染成粉紅色，蟲卵外觀近似透明，面粉相對顏色更深，如圖2所示。

圖1 溴甲酚綠染色效果圖

圖2 酸性品紅染色效果圖

溴甲酚綠染色結(jié)果見表3，從表3可以看出，經(jīng)過染色試驗后，檢測發(fā)現(xiàn)的蟲卵數(shù)與實際蟲卵數(shù)有一定差距，均值約為75%。

表3 溴甲酚綠染色結(jié)果表

表4 酸性品紅染色結(jié)果表

3 討論

兩種染色劑效果接近，但都存在一定誤差。造成誤差的原因可能包括：①蟲卵在篩選過程中，卡在網(wǎng)眼或縫隙中，造成試驗結(jié)果偏低。②蟲卵經(jīng)過稀硫酸的浸泡，并經(jīng)過10 min的蒸氣浴，有部分蟲卵破裂，造成結(jié)果偏低。③蟲卵經(jīng)過低壓抽濾過程，部分蟲卵破裂，造成試驗結(jié)果偏低。

染色法可將蟲卵染色，便于進(jìn)行對比統(tǒng)計，但因為需要經(jīng)過篩網(wǎng)過濾，對于蟲卵直徑有較高要求；對于已知害蟲種類的，可以精確篩網(wǎng)尺寸，但對于不明確害蟲種類的情況下，篩網(wǎng)尺寸不好確定，進(jìn)而導(dǎo)致檢測進(jìn)行困難或檢測結(jié)果有較大偏差[3]。染色法可以用于面粉中常見害蟲蟲卵的檢測，但難以普及至全部害蟲蟲卵的檢測。

4 結(jié)論

染色法可以將蟲卵與面粉染成不同的顏色：溴甲酚綠將蟲卵染成黃橙色，面粉染成褐綠色；酸性品紅將蟲卵染成粉紅色，面粉染成深紅色。兩種染色劑檢測結(jié)果相近，都具有一定偏差；染色法對于已知害蟲種類的檢測可以有較為理想的結(jié)果，但對于不明確害蟲種類的蟲卵檢測可能因為篩網(wǎng)、蟲卵直徑偏差導(dǎo)致檢測結(jié)果有較大偏差。染色法可以用于面粉中常見害蟲蟲卵的檢測，但難以普及至全部害蟲蟲卵的檢測。

[1]吳亞萍.面粉中常見的蟲害及潛在蟲害的檢測[J].現(xiàn)代面粉工業(yè)，2010（1）：53-55.

[2]張茂海.淺析全自動酶聯(lián)免疫分析系統(tǒng)的發(fā)展趨勢[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（14）：1655-1656.

[3]朱光輝，葉恭銀，胡 萃.用磷鎢酸還原法測定棕尾別麻蠅幼蟲尿酸[C]//城市昆蟲學(xué)進(jìn)展—全國第六屆城市昆蟲學(xué)術(shù)討論會論文集，2001.