Naa10p和CEA在唾液中聯(lián)合檢測(cè)對(duì)口腔鱗癌的診斷價(jià)值

余芯樂(lè) 鄭軍 徐江 曾妍

口腔鱗狀細(xì)胞癌(Oral squamous cell carcinoma，OSCC)是口腔頜面部最常見(jiàn)的惡性腫瘤，雖然近年來(lái)口腔鱗癌的手術(shù)治療和放化療技術(shù)不斷提升，但患者5年存活率仍然不到50%［1］。癌胚抗原(Carcinoembryonicantigen，CEA)作為廣譜的腫瘤標(biāo)志物，常用于口腔鱗狀細(xì)胞癌的診斷、療效觀察等方面，但其特異度較低。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)N端α位乙酰基轉(zhuǎn)移酶10 蛋白(N-α-acetyltransferase 10 protein，Naa10p)在多種惡性腫瘤中高表達(dá)［2－5］，有可能作為新的腫瘤標(biāo)志物用于臨床。唾液因包括口腔黏膜脫落細(xì)胞及其分泌代謝產(chǎn)物而與口腔頜面部腫瘤密切相關(guān)。已有文獻(xiàn)報(bào)道，在口腔鱗癌患者唾液中可檢測(cè)出與口腔鱗癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物的改變［6－7］。本研究通過(guò)檢測(cè)口腔鱗癌患者唾液中Naa10p和CEA的表達(dá)水平，探討兩者聯(lián)合檢測(cè)在口腔鱗癌早期診斷中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2013～2016年新疆維吾爾自治區(qū)石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院口腔科及新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔科收治的60例口腔鱗癌患者為口腔鱗癌組，所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診。男性32例，女性28 例，年齡21～83 歲，平均(63.20±4.17) 歲。選取同期收治的30例癌前病變(扁平苔蘚、白斑、紅斑、慢性潰瘍長(zhǎng)期不愈)患者為癌前病變組，所有患者均經(jīng)臨床體征或活檢確診。男性16例，女性14例，年齡20～87歲，平均(61.43±2.79)歲。同期體檢的40例正常人為正常對(duì)照組，均經(jīng)口腔檢查確診無(wú)牙周粘膜疾病和全身檢查確診無(wú)系統(tǒng)性疾病。男性17例，女23例，年齡26～82歲，平均(60.57±3.85) 歲。3組資料在性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集

經(jīng)過(guò)患者同意采集唾液。采用吐唾法收集［8］，為減少食物殘?jiān)鼘?duì)唾液的影響，采集時(shí)間為晨9:00～10:00，采集前5 min漱口，留取未經(jīng)刺激的唾液1～2 ml，采集后室溫下1 000 r/min離心2 min，留取清亮唾液，立即加入蛋白酶抑制劑，分裝封口凍存于－80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 主要試劑 Naa10p ELISA試劑盒、DLNAA10-Hu ELISA試劑盒(Dldevelop公司，加拿大);Can Ag CEA EIA試劑盒(Can Ag Diagnostics公司，瑞典)。

1.3.2 檢測(cè)方法及判讀標(biāo)準(zhǔn) 嚴(yán)格按照 Naa10p、CEA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。以95%正常對(duì)照組唾液中Naa10p、CEA上限為臨界值，即 Naa10p＜83.75 pg/ml，CEA＜110μg/L為標(biāo)準(zhǔn)，凡超過(guò)上述兩臨界值的病例計(jì)為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以珋x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以百分率表示，比較采用χ2檢驗(yàn);繪制ROC曲線并進(jìn)行Logistic回歸，分析各指標(biāo)單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)乳腺癌的診斷價(jià)值，各指標(biāo)間ROC曲線下面積的比較采用Z檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 口腔鱗癌組、癌前病變組、正常對(duì)照組唾液中Naa10p、CEA 的表達(dá)

口腔鱗癌組、癌前病變組、正常對(duì)照組唾液中Naa10p、CEA表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均 ＜0.05)。口腔鱗癌組唾液中Naa10p、CEA表達(dá)均顯著高于癌前病變組和正常對(duì)照組(P＜0.05);癌前病變組唾液中Naa10p、CEA表達(dá)均顯著高于正常對(duì)照組(P ＜0.05)(表 1)。

2.2 唾液中 Naa10p、CEA單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)診斷口腔鱗癌的診斷價(jià)值評(píng)價(jià)

由表 2可見(jiàn)，單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物中，唾液中的Naa10p的靈敏度和特異度均優(yōu)于唾液中的CEA。與單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)相比較，唾液中的 Naa10p和CEA兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的特異度由74.28%到72.79%略有降低，但敏感性由70.00%明顯提高到92.50%，準(zhǔn)確度由72.00%明顯提高到84.62%。

表1 口腔鱗癌組、癌前病變組、正常對(duì)照組唾液中Naa10p、CEA的表達(dá)(珋x±s)Tab 1 Expression of Naa10p and CEA in saliva of the subjects with oral squamous cell carcinoma，precancerous lesion group and healthy controls(珋x±s)

表2 唾液中Naa10p、CEA單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)用于診斷口腔鱗癌的臨床診斷性能評(píng)價(jià)結(jié)果Tab 2 The efficiency of salivary Naa10p and CEA detection for the diagnosis of oral squamous cell carcinoma

2.3 口腔鱗癌組唾液中不同臨床分期Naa10p、CEA的檢測(cè)結(jié)果

由表 3可見(jiàn)，Ⅲ、Ⅳ期口腔鱗癌患者唾液中的Naa10p、CEA表達(dá)明顯高于Ⅰ、Ⅱ期口腔鱗癌患者(P＜0.05)。由表4可見(jiàn)，Ⅲ、Ⅳ期口腔鱗癌患者Naa10p檢測(cè)的陽(yáng)性率(88.88%)明顯高于Ⅰ、Ⅱ期口腔鱗癌患者(75.76%)。Ⅲ、Ⅳ期口腔鱗癌患者CEA檢測(cè)的陽(yáng)性率(81.48%)明顯高于Ⅰ、Ⅱ期口腔鱗癌患者(69.69%)。與單項(xiàng)檢測(cè)相比，Naa10p、CEA聯(lián)合檢測(cè)可明顯提高Ⅰ、Ⅱ期口腔鱗癌患者檢測(cè)的陽(yáng)性率(90.91%)(P ＜0.05)。

表3 口腔鱗癌組不同臨床分期唾液中Naa10p、CEA的表達(dá)(珋x±s)Tab 3 The expression of Naa10p and CEA in saliva of OSCC patients at different clinical stages(珋x±s)

表4 口腔鱗癌不同臨床分期唾液中Naa10p、CEA檢測(cè)的陽(yáng)性率［n(%)］Tab 4 The positive rate of Naa10p and CEA in saliva of OSCCpatients at different clinical stages ［n(%)］

2.4 唾液中Naa10p、CEA單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)ROC曲線分析

以病理學(xué)檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，將口腔鱗癌組60例及正常對(duì)照組40例唾液檢測(cè)的唾液中Naa10p、CEA的結(jié)果，通過(guò)SPSS17.0軟件繪制成ROC曲線。唾液中Naa10p檢測(cè)曲線下方面積為 0.822，95% 可信區(qū)間為(0.765－0.92)。唾液中CEA檢測(cè)曲線下方面積為0.736，95% 可信區(qū)間為(0.636 －0.837)。以 唾液中Naa10p、CEA為自變量，建立 Logistic回歸模型，Logit(P)= －6.871+0.022 × Naa10p+0.037 × CEA，通過(guò)模型中的概率值來(lái)擬合聯(lián)合檢測(cè)的 ROC曲線(圖1)。聯(lián)合檢測(cè)的 ROC曲線下面積為0.911，95%可信區(qū)間為0.852－0.969，聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線下面積均大于唾液中Naa10p、CEA單項(xiàng)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。

圖1 唾液中Naa10p、CEA單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)用于診斷口腔鱗癌的ROC曲線Fig 1 ROCcurves of Naa10p and CEA in saliva alone and in combination for the diagnosis of OSCC

3 討論

隨著醫(yī)療檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物的成分改變與局部組織細(xì)胞代謝密切相關(guān)，檢測(cè)腫瘤附近體液中的腫瘤標(biāo)志物較檢測(cè)外周血的陽(yáng)性率高［9］。尤其是對(duì)于口腔癌，唾液與其關(guān)系密切，且唾液所具有的無(wú)創(chuàng)取樣、檢測(cè)簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)也使操作更具有可行性。

Naa10p是 N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶(N-α-acetyltransferase，NAT)家族成員之一，其在多種腫瘤組織中高表達(dá)，參與細(xì)胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移、自噬等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程［10］。Midorikawa等［3］發(fā)現(xiàn)肝癌組織中，Naa10p 的表達(dá)與鱗狀上皮細(xì)胞分化呈正相關(guān)，細(xì)胞分化越成熟，Naa10p表達(dá)越強(qiáng)。Yu等［11］系統(tǒng)地檢測(cè)多種癌組織中的Naa10p蛋白水平，發(fā)現(xiàn)有52.3%癌組織具有Naa10p高表達(dá)，且Naa10p在腺上皮癌中陽(yáng)性率比鱗上皮癌中要低。本課題組研究［2］發(fā)現(xiàn)在 Naa10p在OSCC組織中高表達(dá)，并且其表達(dá)與OSCC患者的臨床分期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，分化程度和復(fù)發(fā)率相關(guān)，參與了口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。CEA是一種位于細(xì)胞表面的糖蛋白，目前已將其作為重要常規(guī)輔助指標(biāo)在臨床上廣泛應(yīng)用于診斷腫瘤，但由于CEA是廣譜標(biāo)志物，特異性較差，常與其它腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合應(yīng)用。本研究結(jié)果顯示，口腔鱗癌組唾液中的Naa10p和CEA表達(dá)均明顯高于癌前病變組和正常對(duì)照組，提示兩項(xiàng)指標(biāo)對(duì)輔助診斷口腔鱗癌均有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。并且兩項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率在口腔鱗癌組均高于癌前病變組，且口腔鱗癌組兩項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率高于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)陽(yáng)性率，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，提示兩項(xiàng)指標(biāo)均可用于口腔鱗癌的診斷及鑒別診斷，且兩指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可提高口腔鱗癌的檢出率。

唾液中Naa10p檢測(cè)口腔鱗癌的靈敏度、特異度及其他各項(xiàng)性能指標(biāo)均顯著優(yōu)于唾液中CEA的檢測(cè)，表明唾液中Naa10p可能比CEA更適合作為口腔鱗癌的腫瘤標(biāo)志物，但Naa10p單項(xiàng)檢測(cè)口腔鱗癌的靈敏度為75%仍然較低，說(shuō)明單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)在口腔鱗癌的早期診斷中仍具有局限性。與單項(xiàng)指標(biāo)Naa10p相比，唾液中Naa10p、CEA兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)口腔鱗癌的特異度雖有所降低，但靈敏度和準(zhǔn)確度均顯著提高，這表明聯(lián)合檢測(cè)對(duì)口腔鱗癌的早期篩查和診斷具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。另外，單項(xiàng)指標(biāo)中Naa10p的ROC曲線下面積大于CEA，說(shuō)明唾液中Naa10p對(duì)口腔鱗癌的診斷效能優(yōu)于唾液中CEA。而聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線下面積高于任一單項(xiàng)檢測(cè)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，亦提示聯(lián)合檢測(cè)的診斷性能優(yōu)于單項(xiàng)檢測(cè)。

此外，本研究還按臨床分期對(duì)60例口腔鱗癌患者進(jìn)行了分析。結(jié)果表明唾液中Naa10p、CEA的表達(dá)水平與口腔鱗癌患者的臨床分期情況密切相關(guān)。在早期診斷的靈敏度方面，單項(xiàng)檢測(cè)時(shí)，唾液中Naa10p、CEA均較低，但兩項(xiàng)聯(lián)合測(cè)定Ⅰ、Ⅱ期口腔鱗癌的陽(yáng)性率提高到90.91%，這表明聯(lián)合檢測(cè)可顯著提高Ⅰ、Ⅱ期口腔鱗癌患者診斷的陽(yáng)性率，有利于口腔鱗癌的早期診斷。

綜上所述，唾液中Naa10p和CEA聯(lián)合檢測(cè)有助于提高口腔鱗癌的診斷性能和早期檢出率，二者是口腔鱗癌早期診斷較為理想的標(biāo)志物組合，可為臨床醫(yī)師早期診斷口腔鱗癌提供一定的幫助。

［1］ Omar E.Current concepts and future of noninvasive procedures for diagnosing oral squamous cell carcinoma-a systematic review［J］.Head Face Med，2015，11:6.

［2］ Zeng Y，Zheng J，Zhao J，et al.High expression of Naa10p associates with lymph node metastasis and predicts favorable prognosis of oral squamous cell carcinoma［J］.Tumour Biol，2016，37(5):6719 －6728.

［3］ Ren T，Jiang B，Jin G，et al.Generation of novel monoclonal antibodies and their application for detecting ARD1 expression in colorectal cancer［J］.Cancer Lett，2008，264(1):83－92.

［4］ Wang Z，Wang Z，Guo J，et al.Inactivation of androgeninduced regulator ARD1 inhibits androgen receptor acetylation and prostate tumorigenesis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2012，109(8):3053－3058.

［5］ Lee CF，Ou DS，Lee SB，et al.hNaa10p contributes to tumorigenesis by facilitating DNMT1-mediated tumor suppressor gene silencing［J］.JClin Invest，2010，120(8):2920－2930.

［6］ Liao PH，Chang YC，Huang MF，et al.Mutation of p53 gene codon 63 in saliva as a molecular marker for oral squamous cell carcinomas［J］.Oral Oncol，2000，36(3):272－276.

［7］ Cheng B，Rhodus NL，Williams B，et al.Detection of apoptotic cells in whole saliva of patients with oral premalignant and malignant lesions:A preliminary study［J］.Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，2004，97(4):465－470.

［8］ 林琴，白潔，包振英，等.3～4歲兒童唾液蛋白含量的研究［J］.實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2007，23(4):568－570.

［9］ 湯釗酞.現(xiàn)代腫瘤學(xué)［M］.上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1993:76.

［10］ 閔力，曾妍，壽成超.乙酰轉(zhuǎn)移酶基因NAA10的生物學(xué)功能及其在腫瘤中的作用［J］.中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2013，29(10):902－909.

［11］ Yu M，Ma M，Huang C，et al.Correlation of expression of human arrest-defective-1(hARD1) protein with breast cancer［J］.Cancer Invest，2009，27(10):978 － 983.