YAP、VGLL4蛋白在胃癌組織中的表達(dá)水平與胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系分析

鮑雙雙 陳國榮

(溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科 溫州 325000)

胃癌是臨床最為常見的一種消化道腫瘤，具有較高的發(fā)病率和死亡率，一旦發(fā)病，5年生存率不足30%。隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展及醫(yī)學(xué)水平的提升，越來越多研究者將胃癌預(yù)后及干預(yù)瞄準(zhǔn)異常表達(dá)的蛋白及蛋白基因[1]，多認(rèn)為YAP基因表達(dá)異常可導(dǎo)致Hippo-Yap調(diào)控障礙，繼而引起細(xì)胞增殖、凋亡和腫瘤[2]。轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白4(VGLL4)具有抑制YAP活性、控制腫瘤細(xì)胞生長的作用，為胃癌等惡性腫瘤臨床治療提供新思路[3]。為探討YAP、VGLL4蛋白在胃癌組織和癌旁組織中的表達(dá)水平及對腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的影響，筆者將我院治療的胃癌患者共117例納入研究，現(xiàn)將研究過程及結(jié)果匯報(bào)如下。

1 臨床資料與方法

1.1 臨床資料

選擇我院病理科存檔的胃癌組織及對應(yīng)癌旁組織標(biāo)本共117例納入研究，提供標(biāo)本的患者就診時間為2015年10月～2017年10月，117例中女性35例，男性82例；年齡范圍為32～86歲，平均年齡為(61.5±9.5)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)為：(1)患者入院后經(jīng)臨床診斷及輔助檢查確診為胃癌，且手術(shù)治療，術(shù)中組織送檢確診為胃癌，符合國際抗癌聯(lián)盟和我國胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)及臨床分期[4]；(2)取用標(biāo)本前得到患者或家屬的知情同意，簽署知情同意書，并報(bào)給本院倫理學(xué)會取得批準(zhǔn)；(3)患者資料完整，術(shù)后1年內(nèi)每2月隨訪1次，1年后每半年隨訪1次，包括電話隨訪和門診復(fù)查。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在可能影響YAP、VGLL4蛋白表達(dá)水平的其他疾病或惡性腫瘤，如食管癌、腎癌、大腸癌等；(2)轉(zhuǎn)移性胃癌者。

1.2 方法

病理科取得標(biāo)本后重新制備切片和進(jìn)行HE染色，切片厚度為4μm，審核和判斷切片組織學(xué)類型需要2名臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師進(jìn)行，避免人為誤差造成的研究結(jié)果偏差。免疫組織化學(xué)SP法操作時嚴(yán)格按照使用試劑的說明書操作要求進(jìn)行操作，其中YAP一抗稀釋比例為1∶100，VGLL4一抗稀釋比例為1∶200。所得結(jié)果用現(xiàn)有已知陽性組織切片進(jìn)行陽性結(jié)果對照，并使用PBS作為一抗代替品進(jìn)行陰性對照檢查。每張切片同時進(jìn)行HE染色。

1.3 觀察指標(biāo)

免疫組化結(jié)果判定方法如下：YAP、VGLL4蛋白著色部位為細(xì)胞核，少數(shù)標(biāo)本可見細(xì)胞漿著色，本研究采用著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞著色比例兩種方法判斷陽性結(jié)果。著色強(qiáng)度打分情況如下[5]：棕褐色為3分，棕黃色為2分，淡黃色為1分，無色為0分。陽性細(xì)胞著色比例結(jié)果分為5級[6]：陽性細(xì)胞百分比超過75%記為4分，陽性細(xì)胞百分比介于51%～75%為3分，陽性細(xì)胞百分比介于26%～50%為2分，陽性細(xì)胞百分比小于25%記為1分，未見陽性細(xì)胞記為0分。陽性、陰性判斷需將著色強(qiáng)度和數(shù)量積分所得結(jié)果相加，0分為-，2～3分為±，4～5分為+，6～7分為++，并將+、++結(jié)果視為陽性。高、低表達(dá)分組依據(jù)：若數(shù)量積分與著色強(qiáng)度積分結(jié)果不低于4分(≥4分)則視為高表達(dá)組，<4分則視為低表達(dá)組。收集患者一般臨床治療及病理參數(shù)，組織學(xué)分級依據(jù)新的胃癌組織學(xué)分型、分級-評分法，G1≤4分，G2為5～7分，G3≥8分；臨床分期方法為TNM分期。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析本研究收集的數(shù)據(jù)資料，計(jì)量資料組間分析用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，YAP、VGLL4蛋白表達(dá)水平相關(guān)性使用雙變量相關(guān)分析法分析，生存情況比較應(yīng)用Log-rank檢驗(yàn)分析，P<0.05表明差異存在統(tǒng)計(jì)意義。

2 結(jié)果

2.1 YAP、VGLL4蛋白免疫反應(yīng)定位及表達(dá)水平

YAP蛋白在癌組織和癌旁組織表達(dá)水平分別為89例(76.07%)、12例(10.26%)，VGLL4蛋白在癌組織和癌旁組織表達(dá)水平分別為46例(39.32%)、106例(90.60%)，YAP、VGLL4蛋白在癌組織和癌旁組織表達(dá)差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(VAP蛋白χ2=103.28，VGLL4χ2=67.59，P<0.05)。

2.2 YAP、VGLL4蛋白表達(dá)水平與臨床資料相關(guān)性

YAP、VGLL4蛋白表達(dá)水平與臨床一般資料相關(guān)研究見表1，YAP表達(dá)和VGLL4蛋白表達(dá)與癌組織分級、臨床分析、腫瘤侵襲性、淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，P<0.05；YAP、VGLL4蛋白表達(dá)與年齡、性別無顯著關(guān)系，P>0.05。

表1 YAP、VGLL4蛋白表達(dá)水平與臨床資料相關(guān)性

項(xiàng)目例數(shù)nYAP水平低表達(dá)n=28高表達(dá)n=89χ2PVGLL4水平低表達(dá)n=71高表達(dá)n=46χ2P<60歲511041≥60歲6618480.93>0.05302141250.13>0.05男822161女357280.42>0.05463625102.42>0.05G1～G2331815G384107423.66<0.05825632125.58<0.05TNM0～Ⅱ期332310TNMⅢ～Ⅳ期8457952.88<0.05528661839.94<0.05淋巴轉(zhuǎn)移412318淋巴無轉(zhuǎn)移7657135.87<0.05365354119.43<0.05有侵襲性49346無侵襲性68254314.69<0.053811333510.05<0.05腫瘤<3cm511536腫瘤≥3cm6613531.49>0.05302141250.13>0.05

2.3 YAP、VGLL4蛋白在癌組織中表達(dá)及與患者預(yù)后相關(guān)性

YAP蛋白高表達(dá)和低表達(dá)患者術(shù)后平均生存時間依次為(19.00±0.556)月、(36.00±2.940)月，低表達(dá)患者生存時間明顯高于高表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=58.25,P<0.05)；VGLL 4蛋白高表達(dá)和低表達(dá)患者術(shù)后平均生存時間依次為(26.00±2.861)月、(18.00±1.502)月，低表達(dá)患者生存時間明顯低于高表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=19.76,P<0.05)。YAP、VGLL4蛋白表達(dá)相關(guān)性分析見表2，兩者為負(fù)相關(guān)關(guān)系，P<0.05。

表2 YAP、VGLL4蛋白表達(dá)相關(guān)性分析

VGLL4水平例數(shù)YAP水平(n)低表達(dá)n=28高表達(dá)n=89rP低表達(dá)71863高表達(dá)4620260.386<0.05

3 討論

本研究通過對117例胃癌患者癌組織和癌旁組織研究，發(fā)現(xiàn)YAP、VGLL4蛋白表達(dá)與癌組織分級、臨床分析、腫瘤侵襲性、淋巴轉(zhuǎn)移均有關(guān)，且與患者預(yù)后相關(guān)。YAP蛋白在胃癌組織表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，與腫瘤惡性程度為正相關(guān)，表達(dá)水平越高侵襲、轉(zhuǎn)移能力越強(qiáng)，預(yù)后越差；VGLL4蛋白在胃癌組織中表達(dá)水平低于癌旁組織，與惡性程度表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)關(guān)系，可能為潛在的抑癌蛋白。臨床可在此基礎(chǔ)上深入研究，通過靶向治療、分析水平治療改善胃癌患者預(yù)后及生存質(zhì)量。

1 中華醫(yī)學(xué)會消化內(nèi)鏡學(xué)分會,中國抗癌協(xié)會腫瘤內(nèi)鏡專業(yè)委員會.中國早期胃癌篩查及內(nèi)鏡診治共識意見.中華消化雜志,2014,34(7):433～448.

2 孫秀娣,牧人,周有尚,等.中國胃癌死亡率20年變化情況分析及其發(fā)展趨勢預(yù)測.中華腫瘤雜志,2004,26(1):4～9.

3 徐進(jìn),王斌,陳珺,等.基質(zhì)金屬蛋白酶-11在胃癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2016,25(6):630～632.

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