高效液相色譜法親水作用模式在親水化合物分析中的應用研究

宣園園

在一般高校藥學與化工類儀器設施分析教育中，HPLC占有很大地位，這得益于于其在研究方面得到的廣泛應用效果。在傳統(tǒng)教學過程，會把HPLC法分成正反相以及離子對色譜法，能夠用來研究極性非極性、酸堿性等各種特性的親水物。實驗課程一般也圍繞這幾點選擇常用的親水物，該方式在藥物分析方面，使用的很少，還未引起足夠重視，本文對此展開了簡要分析。

儀器和試劑

儀器。Waterse2695液相sep設備并搭配2998pad測試儀，merck色輔助和電子天平秤。

試劑。胞嘧啶；乙腈是色譜級醋酸氨是分析純。

方法和結果

分析條件。流動相：- 0.01mol/L含量的乙腈醋酸氨液體，測量波長為 254納米，流速為每分鐘 0.8毫升，柱溫是 30攝氏度，樣本體積20μL。流動相通過 0.45μm小口濾膜過濾后應用。

（1）供試品液體。采集樣本25毫克，放于50毫升容器內，通過流動相超聲分解，并稀釋到刻度處，然后搖晃均勻。

（2）對比液體。采集供試品液體1毫升，放于100毫升容器內，通過流動相稀釋到刻度處，然后搖晃均勻，接著量取5毫升，放于50毫升容器內，通過流動相超聲分解，并稀釋到刻度處，然后搖晃均勻。

系統(tǒng)有效性測試。量取胞嘧啶對比品與尿嘧啶對比品分別5毫克，放于10毫升容器內，通過流動相稀釋到刻度處，搖晃均勻，采集20μL引入色譜儀。此外，采集對比液體，反復檢測五次，保存色譜圖。結果顯示，胞嘧啶和尿嘧啶主峰的脫離度是14.8，滿足要求。胞嘧啶主峰存留時間的RSD%是0.21%，峰范圍的RSD%是0.61%，平均理論板數(shù)超過12422，平均拖尾因子是1.14，色譜環(huán)境穩(wěn)定，精密性優(yōu)良。

專屬性測試。利用DAD測量儀，分別觀察了空白溶劑與供試品液體，在胞嘧啶主峰存留時間處190- 400納米范圍之內紫外光譜圖形，結果顯示，胞嘧啶基本雜質和主峰徹底脫離，分離度超過1.6，胞嘧啶主峰純度方向低于純度閾值，表示該方式的專屬性很好。

討論

測量波長的選取。精準采集供試品液體20μL置于液性色譜器內，使用DAD測量儀在190- 400nm之內進行掃描，結果顯示，胞嘧啶在250- 266納米之內有很大吸收，于254納米波長周邊吸取曲線改變比較平緩，根據(jù)其相關物質的吸取波長，所以選取254nm用來測試波長。

流動相選取。HILIC分析柱一般在硅膠或是聚合物前提下，鍵合中性基團，弱離子轉換，兩性離子等各種固定相，文章采取硅膠結合兩性離子，存留機制包含分析物和固定相表示親水層的配置功能及與固定相電荷的效應，所以對親水化合物與極性化合物的存留性質及反向分析柱大體相反。理論上，甲醛也能用來脫離親水分析柱，但甲醛存在的極性遠遠超過乙腈，在HILIC柱表面具有較強的洗脫水平，讓親水物，在柱表面的容量因子減小，不利于脫離，所以，本文選取乙腈觀察，并完善流動相的基本參數(shù)。實驗得知，伴隨流出液含量的增加，胞嘧啶存留時間隨之縮減，雜質之間的脫離度不斷降低，分析其原因可能是由于高鹽含量會削減固定相電荷和親水物的相互作用導致親水物的保留降低。HILIC柱和正向分析柱雷同，有機相比重增加，親水物保留時間增多，通常有機相比重，在保證在40- 95%之內最佳，太高會影響固定相物質的濕潤度和極性基團拓展，從而影響研究的重現(xiàn)性，太低就會導致極性基團的水解讓固定相喪失，降低色譜柱應用性能。通過測試，得知乙腈比重在80-90%范圍之內，胞嘧啶主峰存留時間為最佳，流速和柱溫的干擾與常規(guī)反相色譜柱相同，只是0.6毫米內徑的HILIC柱的最好流速為每分鐘0.5毫升，而以往反相色譜柱為每分鐘1毫升，統(tǒng)一分析時間與分離效果，流速確定為每分鐘0.8毫升。