FGF2在胰腺癌中的表達(dá)及對胰腺癌PANC—1細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用和機(jī)制

孫敘秋 魯朔焱 張羽豐

摘要 目的：探討成纖維生長因子2（FGF2）在胰腺癌中的表達(dá)，以及FGF2對人胰腺癌細(xì)胞（PANC-1）的侵襲、轉(zhuǎn)移作用和機(jī)制。方法：收治胰腺導(dǎo)管腺（PDAC）癌患者60例，采集其胰腺導(dǎo)管細(xì)胞癌組織（PDAC）及癌變部位旁的正常胰腺組織（NP），測定FGF2。把體外培養(yǎng)的PANC-1分成FGF2組、FGF2+LY294002組、FGF2+AZD4547組、對照組。測定細(xì)胞支架蛋白（Pallad/n）及蛋白激酶B的蛋白、mRNA，并測定每組PANC-1細(xì)胞侵襲、遷移的能力。結(jié)果：PDAC組織的FGF2表達(dá)率80%，顯著高于癌變部位旁正常NP組織的11%（P< 0.05）；PDAC的FGF2的表達(dá)率和腫瘤分化程度、臨床的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈相關(guān)性（P<0.05）。FGF2組的Palladin及蛋白激酶B的蛋白、mRNA表達(dá)、侵襲細(xì)胞數(shù)量比其他組高（P<0.05）；FGF2+LY294002組、FGF2+AZD4547紐的侵襲細(xì)胞數(shù)量比FGF2組及對照組低（P<0.05）；FGF2組的細(xì)胞遷移率最高（P<0.05），F(xiàn)GF2+LY294002組、FGF2+AZD4547組的細(xì)胞遷移率比FGF2組及對照組低（P

關(guān)鍵詞 FGF2；PANC-1細(xì)胞：侵襲轉(zhuǎn)移；作用機(jī)制

資料與方法

2010年1月-2016年2月收治經(jīng)病理檢查確診并進(jìn)行手術(shù)切除的PDAC患者60例，并包含距癌變部位邊緣>2 cm的NP標(biāo)本18例，術(shù)前均未進(jìn)行化療、放療。其中男37例，女23例；年齡42～66歲，平均（54±12）歲；依照TNM分期I期、Ⅱ期24例，Ⅲ期、Ⅳ36例；依照UICC的分類標(biāo)準(zhǔn)高分化18例，中分化19例，低分化23例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移27例。全部標(biāo)本均行甲醛定型和石蠟包埋。本次研究通過倫理委員會批準(zhǔn)，研究對象均簽署知情同意書。

免疫1組化測定FGF2表達(dá)：標(biāo)本5 μm切片，HE染色和免疫1組化染色，PBS液為陰性對照，嚴(yán)格按照試劑盒說明書試驗(yàn)。FGF2陽性表達(dá)的定義為細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒，結(jié)果由2名病理醫(yī)師雙盲法判斷。光學(xué)高倍顯微鏡下選取5個視野，每個視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，依照染色面積及強(qiáng)度評分，染色面積> 50%為3分，26%～50%為2分，ll%～25%為1分，0～l0%為0分；染色強(qiáng)度3分為強(qiáng)，2分為中，1分為弱，0分為陰性。FGF2染色分級為染色面積+染色強(qiáng)度，>3分FGF2高表達(dá)，≤3分FCF2低表達(dá)。

細(xì)胞體外培養(yǎng)及參數(shù)測定：把PANC-1接種在RPMI 1640培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24 h，后分4組：FGF2組（在培養(yǎng)液中加入FCF2）、FGF2+ LY294002組（FCF2組+LY294002）、FCF2+AZD4547組（FCF2組+AZD4547）、對照組f在培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)）。4組均采用蛋白質(zhì)印跡法和反轉(zhuǎn)錄PCR法測定細(xì)胞支架蛋白（palladin）及蛋白激酶B的蛋白、mRNA，并通過細(xì)胞劃痕試驗(yàn)及Transwell小室細(xì)胞侵襲活性試驗(yàn)測定每組PANC-1細(xì)胞侵襲、遷移的能力。

結(jié)果

FCF2在PDAC組織及NC組織中的表達(dá)：FCF2在PDAC組織中為高度表達(dá)，主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，為深棕色的顆粒；FCF2在NC組織中染色淺，為低度表達(dá)。PDAC中FCF2低表達(dá)12例，高表達(dá)48例，高表達(dá)率80%（48/60）；NP中FGF2低表達(dá)者16例，高表達(dá)2例，高表達(dá)率11010 （2/18）。胰腺導(dǎo)管細(xì)胞癌組織中的FCF2高表達(dá)率顯著高于癌變部位旁的正常胰腺組織（P<0.05）。

FGF2在PDAC表達(dá)相關(guān)因素分析：X2檢驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)GF2的表達(dá)和腫瘤的分化程度、臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，P< 0.05；和患者的性別、年齡和癌變部位無關(guān)，P> 0.05。

蛋白質(zhì)印跡和反轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)果：蛋白質(zhì)印跡和反轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)果均顯示，F(xiàn)GF2+ LY294002組、 FGF2+ AZD4547組、對照組的p-Akt蛋白及Palladin蛋白微量表達(dá)，F(xiàn)GF2組p-Akt蛋白及Palladin蛋白表達(dá)明顯高于其他組（P<0.05）。

癌細(xì)胞侵襲、遷移試驗(yàn)結(jié)果：結(jié)果顯示，F(xiàn)CF2組侵襲細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞遷移率顯著高于另外3組（P<0.05）；且FCF2+LY294002組和FCF2+AZD4547組的侵襲細(xì)胞數(shù)母、細(xì)胞遷移率與對照組和FCF2組相比有所下降（P<0.05），見表l。

討論

胰腺癌重要的特性是早期侵襲和迅速轉(zhuǎn)移，促細(xì)胞生長因子與癌細(xì)胞的相互作用機(jī)制是近年來的研究重點(diǎn)，促細(xì)胞生長因子與其受體特異性結(jié)合活化胞內(nèi)信息通道，在調(diào)節(jié)細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展過程中有不可或缺的作用。FCF2作為重要的促生長因子，已被發(fā)現(xiàn)在乳腺癌、胃癌、甲狀腺癌等結(jié)構(gòu)內(nèi)有高表達(dá)，并且不正常的FCF2-FGF2R信息通道會推進(jìn)腫瘤細(xì)胞的發(fā)展[1]。但目前沒有關(guān)于FGF2在PDAC組織的表達(dá)及在PDAC發(fā)展中反應(yīng)機(jī)制的資料。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，單獨(dú)作用于FCF2時的表達(dá)與對照組相比顯著升高，而在給予PI3K/Akt信息通道抑制劑或FGFR2抑制劑后，Palladin及Akt的表達(dá)和對照組比較，無顯著變化，但相對于FGF2組而言顯著下降。基于此項(xiàng)研究，推測FGF2可能通過PI3K/Akt信息通道引發(fā)Akt磷酸化加強(qiáng)，從而激發(fā)Palladin的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動力，使其侵襲、遷移運(yùn)動加強(qiáng)。

綜上所述，F(xiàn)CF2在胰腺癌組織中呈現(xiàn)為高表達(dá)，與胰腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移呈現(xiàn)正相關(guān)，可能的作用機(jī)制為FCF2與其受體反應(yīng)，激活了PI3K/Akt通道，增強(qiáng)了Palladin的表達(dá)，從而推進(jìn)了PANC-1的侵襲轉(zhuǎn)移。

參考文獻(xiàn)

[1]李倩，李莉，郭淑芹，等.成纖維細(xì)胞生長因子2、成纖維細(xì)胞生長因子受體4蛋白在人甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及意義[J]解剖學(xué)報(bào)，2014，45（5）：675-681.