片姜黃質量標準再評價研究

朱紅梅，劉　濤，韓　嘯

(成都大學 藥學與生物工程學院，四川 成都　610106)

0　引　言

片姜黃為姜科植物溫郁金的干燥根莖，主產于浙江溫州瑞安等地[1].片姜黃具有破血行氣，通經止痛之功效，臨床上常用于胸脅刺痛、胸痹心痛、痛經經閉、風濕肩臂疼痛、跌撲腫痛等癥治療[2].在《中國藥典》2015版一部中，片姜黃的現行標準僅包括性狀鑒別、薄層鑒別及揮發油的含量測定，而未對其中某個指標成分含量進行控制.相關研究表明，片姜黃中含有莪術醇、莪術酮、莪術二酮、吉馬酮與呋喃二烯等成分，且吉馬酮具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗炎等藥理作用[3-4].對此，本研究擬在片姜黃的現行質量標準中增加吉馬酮的含量測定，擬為其質量控制提供依據.

1　材料與儀器

1.1　材　料

實驗所用材料包括：片姜黃(批號，20170226、20171028、20171102)，分別購自北京同仁堂藥業有限公司與安國藥源商貿有限公司；吉馬酮對照品(批號，150810，HPLC>98%)，購自四川省維克奇生物科技有限公司；薄層層析硅膠G(批號，20151023)，購自青島海洋化工廠；羧甲基纖維素鈉(批號，20130821)、石油醚(30～60 ℃，批號，2016092201)、乙酸乙酯(批號，2016071501)、甲醇(批號，2017070501)，購自成都科隆化學品有限公司；HPLC用甲醇、乙腈為色譜純，水為怡寶純凈水，其余試劑均為分析純.

1.2　儀　器

實驗所用儀器包括：BS-6KH電子天平(上海友聲衡器有限公司)；BJ-150型高速多功能粉碎機(拜杰公司)；FA2004型分析電子天平(上海良平儀器儀表有限公司生產)；ichrom-5100型高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司)；KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HH-6型數顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司).

2　方法與結果

2.1　性狀鑒別

觀察發現：片姜黃呈長圓形或不規則的片狀，大小不一，長3～6 cm，寬1～3 cm，厚0.1～0.4 cm；外皮灰黃色，粗糙皺縮，有時可見環節及須根痕；切面黃白色至棕黃色，有一圓環紋及多數筋脈小點；質脆而堅實，斷面呈灰白色至棕黃色，略呈粉質；氣味特異，味微苦而辛涼.

2.2　薄層鑒別

取片姜黃粉末1 g，加石油醚(30 ℃～60 ℃)5 mL，振搖，約30 min，濾過，濾液轉移至5 mL量瓶中，加石油醚(30 ℃～60 ℃)至刻度，作為供試品溶液.另取片姜黃對照藥材，同法制成對照藥材溶液.

參照薄層色譜法[2]進行實驗，具體步驟為：吸取上述2種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30 ℃～60 ℃)—乙酸乙酯(17∶3)為展開劑展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，于100 ℃加熱至斑點顯色清晰，結果見圖1.

注：1、2，片姜黃對照藥材；3，樣品20170226；4，樣品20171028；5、6，樣品20171102

圖1片姜黃薄層鑒別色譜圖

由圖1可見，供試品溶液中與對照藥材色譜相應的位置上，顯現相同顏色的斑點.

2.3　揮發油含量測定

揮發油含量測定步驟為：取供試品適量(相當于含揮發油0.5～1.0 mL)，準確稱定(準確至0.01 g)，置燒瓶中，加水300～500 mL(或適量)與玻璃珠數粒，搖勻混合后，連接揮發油測定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使其充滿揮發油測定器的刻度部分并溢流入燒瓶時為止；然后置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸，并保持微沸約5 h，至測定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達刻度線0線上面5 mm處為止.放置1 h以上，再開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發油量，并計算供試品中揮發油的含量(%).實驗結果見表1.

表1　3批片姜黃揮發油含量測定結果

根據《藥典》2015版一部項下相關規定，確定本品含揮發油不得少于1.0%(mL/g).

2.4　吉馬酮含量測定

2.4.1色譜條件.

實驗色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈—水(60∶40)為流動相，檢測波長為215 nm，流速為1 mL/min.

2.4.2對照品溶液制備.

取吉馬酮對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含367.2 μg的對照品溶液.精密量取上述對照品溶液，配制成濃度分別為73.44 μg/mL、29.376 μg/mL、14.688 μg/mL、5.8275 μg/mL的對照品溶液.

2.4.3供試品溶液制備.

取片姜黃粉末約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25 mL甲醇，稱定，超聲處理30 min，放冷，稱定，用甲醇補足減少的質量，過濾，制得供試品溶液.

2.4.4線性關系考察.

分別吸取“2.4.2”項下5種對照品溶液，按照“2.4.1"項下色譜條件進樣，測定峰面積．以峰面積為縱坐標，吉馬酮進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為，y=2881.9x+11.709(R2=1).結果表明，吉馬酮在0.058～3.672 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系(見圖2).

圖2吉馬酮對照品線性關系圖

2.4.5精密度實驗.

精密量取吉馬酮對照品溶液10 μL，按照“2.4.1”項下色譜條件連續重復進樣6次，測定吉馬酮峰面積，計算其RSD為0.78%．結果表明，儀器的精密度良好.

2.4.6穩定性實驗.

稱取片姜黃適量(批號，20170226)，按照“2.4.3"項下方法制備供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、12、16 h時按“2.4.1"項下色譜條件進樣10 μL，測定吉馬酮峰面積，計算其RSD為2.60%.結果表明，供試品溶液在16 h內基本穩定.

2.4.7重復性實驗.

稱取同一批片姜黃適量(批號，20170226)，按照“2.4.3"項下方法制備方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.4.1"項下色譜條件各進樣10 μL，測定吉馬酮峰面積，計算其RSD為2.90%.結果表明，本方法具有良好的重復性.

2.4.8加樣回收實驗.

精密稱取已知含量的片姜黃(批號，20170226)，精密加入對照品溶液0.8 mL(367.2 μg/mL)，按照“2.4.3"項下方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.4.1"項下色譜條件各進樣10 μL，測定吉馬酮峰面積，計算得其平均回收率為94.8%、RSD為4.50%，結果見表2.結果表明，本方法回收率良好.

表2　加樣回收實驗

2.4.9吉馬酮含量測定及限量確定.

取3批片姜黃樣品(批號，20170226、20171028、20171102)，按照“2.4.3"項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1"項下色譜條件各進樣10 μL，測定吉馬酮含量，結果見表3、圖3.

表3　3批樣品中吉馬酮含量測定結果

圖3片姜黃HPLC色譜圖

根據實驗結果，本研究認為，可暫規定本品含吉馬酮(C15H22O)不得少于0.020%.

3　結　論

本研究根據《中國藥典》一部項下相關規定對3批片姜黃樣品進行性狀鑒別、薄層鑒別及揮發油的含量測定檢驗，樣品均合格.在此基礎上，本研究建立了高效液相色譜法直接測定片姜黃中吉馬酮含量的方法，通過方法學考察表明，線性關系、精密度、穩定性、重復性及加樣回收率均較好，同時測定了3批不同批次的片姜黃中吉馬酮的含量并規定其限度.實驗結果表明，該定量檢測方法可靠性較強，可為片姜黃中吉馬酮的分析提供可信的檢測手段，同時，也為其進一步的質量控制提供了依據.