麥胚凝集素修飾的長春瑞濱陽離子脂質體的處方優選及細胞毒性試驗

肖瑤 王鑫 符敏 劉晶晶 李學濤 程嵐

中圖分類號 R943 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）05-0611-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.05.09

摘 要 目的：制備麥胚凝集素（WGA）修飾的長春瑞濱（VRB）陽離子脂質體（WGA-VRB陽離子脂質體），優化處方并進行細胞毒性試驗。方法：以磷脂、膽固醇為輔料，以3β-[N-（N′ -N′ -二甲基氨基乙烷）-氨基甲酰基]膽固醇鹽酸鹽（DC-Chol）為陽離子材料，以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG2000）為長循環鏈，采用薄膜分散法及硫酸銨梯度法制備WGA-VRB陽離子脂質體。以包封率為指標，采用星點設計-響應面法優化處方中DC-Chol、膽固醇和VRB用量。測定所制VRB脂質體和WGA-VRB陽離子脂質體中VRB含量，比較二者和空白陽離子脂質體作用于人乳腺癌細胞MCF-7和人非小細胞肺癌細胞A549后對細胞存活率的影響。結果：5 mL WGA-VRB陽離子脂質體的最優處方為磷脂22 mg、膽固醇12 mg、DC-Chol 8 mg、VRB 0.5 mg，其包封率為（92.24±1.21）%（n=3），與預測值的相對誤差為5.3%。VRB脂質體和WGA-VRB陽離子脂質體中VRB含量分別為（96.01± 3.26）、（93.39±1.59） μg/mL（n=3）；與空白陽離子脂質體和VRB脂質體比較，WGA-VRB陽離子脂質體可明顯降低MCF-7、A549細胞的存活率（P<0.05）。結論：成功制得WGA-VRB陽離子脂質體，其對MCF-7、A549細胞存活的抑制作用強于VRB脂質體。

關鍵詞 麥胚凝集素；長春瑞濱；陽離子脂質體；處方優選；星點設計-響應面法；含量測定

ABSTRACT OBJECTIVE： To prepare Wheat germ agglutinin （WGA） modified vinorelbine （VRB） cationic liposomes （WGA-VRB cationic liposomes）， and to optimize the formulation and conduct cytotoxicity test. METHODS： Thin-film diffusion and ammonium sulfate gradient method were used to prepare WGA-VRB cationic liposomes using phospholipid and cholesterol as excipient， 3β-[N-（N′ -N′ -dimethyl aminoethane）-carbamoyl] cholesterol hydrochloride （DC-Chol） as cationic material， distearoyl phosphatidylethanolamine-polyethylene glycol 2000 （DSPE-PEG2000） as long cycle chain. Using encapsulation rate as index， central composite design-response surface methodology was used to optimize the amount of DC-Chol， cholesterol and VRB. The contents of VRB in VRB liposomes and WGA-VRB cationic liposomes were determined. The effects of them and blank cationic liposomes on survival rates of human breast cancer cell MCF-7 and human non-small cell lung cancer cells A549 were compared. RESULTS： The optimal formulation of 5 mL WGA-VRB cationic liposomes was as follows as phospholipid 22 mg， cholesterol 12 mg， DC-Chol 8 mg， VRB 0.5 mg. Encapsulation rate of the liposomes was （92.24±1.21）%（n=3）， relative error of which to predicted value was 5.3%. The contents of VRB in VRB liposomes and WGA-VRB cationic liposomes were （96.01±3.26），（93.39±1.59） μg/mL（n=3）. Compared with blank cationic liposomes and VRB liposomes， WGA-VRB cationic liposomes could significantly reduce survival rate of MCF-7 and A549. CONCLUSIONS： WGA-VRB cationic liposomes are prepared successfully. Inhibitory effect of WGA-VRB cationic liposomes on MCF-7 and A549 cell survival is stronger than that of VRB liposomes.

KEYWORDS Wheat germ agglutinin； Vinorelbine； Cationic liposomes； Formulation optimization； Central composite design- response surface methodology； Content determination

麥胚凝集素（WGA）是從小麥胚芽中提取的一種能與專一性糖結合、促進細胞凝集的二聚體蛋白質。研究表明將其與藥物或載體結合，可借助凝集素對癌細胞的親和作用增強抗癌活性[1]。脂質體是由磷脂雙分子層組成的類生物細胞膜結構，有降低藥物不良反應、提高藥物體內靶向性的優點[2]。但普通脂質體體內循環周期短、主動靶向性弱，限制了脂質體的進一步應用[3-4]。研究發現，與正常細胞相比，腫瘤細胞膜表面通常帶有較多的負電荷[5]。……