皮靈搽劑質量標準研究＊

李祥，利新發，譚初寶

(江西省景德鎮市第六人民醫院，景德鎮 333000)

丙酸氯倍他索為腎上腺皮質激素類藥物，具有較強的抗炎、抗瘙癢和血管收縮作用，抗炎作用約為氫化可的松的112倍，特別適用于短期治療的頑固性皮膚病[1]。市場供應品種多制成單方或復方軟膏劑型，外用溶液型劑型較少。我院制劑室生產的皮靈搽劑（贛藥制字H20130003），以丙酸氯倍他索為主藥，主治慢性濕疹、神經性皮炎、銀屑病、扁平苔蘚、瘙癢癥、癢疹等，臨床應用多年，療效頗好。然而目前尚沒有皮靈搽劑標準的質量控制方法，近年來高效液相色譜色譜法 （Highperformance liquid chromatography，HPLC） 廣泛作為了各類藥物質量控制標準的常用方法，本研究參考相關文獻[2]，筆者采用HPLC法建立了皮靈搽劑中丙酸氯倍他索含量測定的方法，并對該制劑進行了穩定性考察，為皮靈搽劑的質量控制提供參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器 島津高效液相色譜儀、電子天平（FA1104型，上海舜宇恒平科學儀器有限公司）、紫外分光光度儀（UV-754型，上海電子光學技術研究所）、攪拌機（JB-3型，上海新偉儀表電器廠）。

1.2試藥 丙酸氯倍他索（天津天藥藥業股份有限公司）；乙醇（湖南九典制藥股份有限公司）；月桂氮酮（湖北科捷制藥有限公司）；甘油（南昌白云藥業有限公司）；丙酸氯倍他索對照品 （100302-200602，含量為99.5%），購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

2　方法與結果

2.1皮靈搽劑的制備 按處方比例，稱取丙酸氯倍他索溶于適量乙醇中使溶解，加入月桂氮卓酮和甘油，加乙醇使成1000ml，攪拌均勻，即得皮靈搽劑。

2.2丙酸氯倍他索的含量測定

2.2.1色譜條件 色譜柱：Diamonsil（R）C18柱（250×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-甲醇-0.05mol·L-1磷酸二氫鈉溶液 （用85%磷酸調節pH值到2.5）（475：100：425）； 流速：1ml·min-1； 檢測波長為240nm；進樣量：20μl。

2.2.2對照品溶液的配制 取丙酸氯倍他索對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含25μg的對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的配制 精密量取皮靈搽劑5ml（相當于丙酸氯倍他索1.25mg），置50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過即得供試品溶液。

2.2.4陰性樣品溶液的配制 取除丙酸氯倍他索的其他處方組分，按工藝制成陰性樣品，照“2.2.3”方法制備陰性樣品溶液。

2.2.5專屬性試驗 在“2.2.1”色譜條件下，對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液色譜圖見圖1。理論塔板數按丙酸氯倍他索峰計算不低于2000，處方中其他成分對主峰的測定無干擾。

圖1　高效液相色譜圖（A.丙酸氯倍他索對照品；B.供試品；C.陰性樣品）

2.2.6線性試驗 取丙酸氯倍他索對照品適量，精密稱定，分別用甲醇稀釋，配制以下一系列濃度的溶液：100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625μg·ml-1。精密吸取各濃度對照品溶液續濾液各20μl，照“2.2.1”項下色譜條件進行含量測定。以峰面積積分值（Y）為縱坐標，丙酸氯倍他索的濃度（X）為橫坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程：Y=40883.58 X+2835.76，r=0.9999；結果表明：丙酸氯倍他索在1.56μg·ml-1-100μg·ml-1范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.2.7重復性試驗 取同一批次樣品6份，按“2.2.3”方法制備供試品溶液，精密吸取 20μl，照“2.2.1”項下色譜條件下進行測定，結果丙酸氯倍他索的含量平均值為0.25mg·ml-1，RSD為1.46%，表明方法重復性良好。

2.2.8精密度試驗 取同一份供試品溶液，照“2.2.1”項下色譜條件下連續進樣6次，測定峰面積。丙酸氯倍他索的RSD為1.26%，表明該方法精密度良好。

2.2.9穩定性試驗 取同一批號的供試品溶液，照“2.2.1”項下色譜條件下分別于 0、1、2、4、8、12、24h進行測定，記錄峰面積。7次測定丙酸氯倍他索峰面積的RSD為1.92%，表明供試品溶液在24h內基本穩定。

2.2.10加樣回收率試驗 精密量取同一批皮靈搽劑樣品3ml、4ml、5ml各3份于50ml量瓶中， 共9份， 精密加入對照品母液 （0.1036mg·ml-1）2ml，照“2.2.3”方法制備供試品溶液，并照“2.2.1”項下色譜條件進行測定，計算丙酸氯倍他索的加樣回收率。結果平均回收率為99.06%，RSD=1.31%。表明回收率良好，該方法準確度高。結果見表1。

表1　加樣回收率試驗結果（n=9）

2.2.11樣品的含量測定 分別取3批次皮靈搽劑樣品，按“2.2.3”方法制備供試品溶液，并測定各批次樣品中丙酸氯倍他索的含量。結果見表2。

表2　樣品中丙酸氯倍他索含量測定結果（n=3）

2.3穩定性試驗

2.3.1影響因素試驗

2.3.1.1強光照射試驗樣品去除外包裝放在裝有日光燈的光照箱內，于照度為4500±500lx的條件下放置10d，于第5d和第10d取樣，觀察外觀性狀變化，并采用HPLC法測定含量。結果見表3。

2.3.1.2高溫試驗 樣品去除外包裝放在60℃的恒溫箱內，放置2d后，即發現瓶體變形膨脹，溶液由無色變為微黃色，故改在40℃條件下進行試驗，于第5d和第10d取樣，觀察外觀性狀變化，并采用HPLC法測定含量。結果見表3。

2.3.1.3高濕試驗 樣品去除外包裝放在25℃，相對濕度90%±5%的恒溫恒濕箱內，放置10d，于第5d和第10d取樣，觀察外觀性狀變化，并采用HPLC法測定含量。結果見表3。

表3　影響因素試驗考察結果

2.3.2加速試驗 本品模擬上市包裝放在40℃±2℃、相對濕度75%±5%的恒溫恒濕箱內，放置6個月，在試驗期間第1個月、2個月、3個月、6個月末分別取樣一次，觀察外觀性狀變化，并采用HPLC法測定含量。結果見表4。

2.3.3長期試驗 本品模擬上市包裝放在30℃±2℃、相對濕度（65±5）%的恒溫恒濕箱內，放置 12個月，在試驗期間第3個月、6個月、9個月、12個月末分別取樣1次，觀察外觀性狀變化，并采用HPLC法測定含量。結果見表5。

2.4安全性觀察 皮靈搽劑在我院臨床應用中，不良反應報告病例極為少見，偶見局部輕度灼燒感。曾有個別患者沒有遵從醫囑正確使用藥物，由于單位面積用量過大導致皮膚局部萎縮的不良反應發生，但是3個月后自行恢復正常。因此皮靈搽劑在臨床使用中的用藥安全性較高。

表4　加速試驗考察結果

表5　長期試驗考察結果

3　討論

慢性濕疹是皮膚科常見、多發類疾病，具有強烈瘙癢、反復發作的特點，患者皮膚呈現局限性肥厚或苔蘚樣變，臨床治療較為困難，嚴重影響患者的生活質量[3]。皮靈搽劑在我院皮膚科臨床應用多年，其主藥成分丙酸氯倍他索對于慢性濕疹、扁平苔蘚和神經性皮炎等非感染性炎癥性皮膚病，可以發揮局部抗炎治療作用；加入高效安全、無毒副作用的透皮吸收促進劑月桂氮酮，提高了丙酸氯倍他索對皮膚的滲透性[4]；甘油作為保濕劑，在皮膚涂抹搽劑后，保持濕潤環境，保護皮膚，降低敏感性。皮靈搽劑配制工藝簡單，易于規模生產，因此非常適合醫院制劑的開發與應用。

由于丙酸氯倍他索是皮靈搽劑的主要的測定指標成分，因而在皮靈搽劑質量標準的制訂中，建立丙酸氯倍他索的含量測定方法最為關鍵。參照相關文獻，丙酸氯倍他索的含量測定方法有HPLC法和雙波長系數倍率法等，其中采用HPLC法較多，但流動相選擇較為復雜[5-8]。我們的研究參照《中國藥典》中丙酸氯倍他索的含量測定的流動相配比，而且參照相關文獻[8]，發現如果用甲醇-磷酸二氫鉀溶液，待測成分可出現雙峰的色譜峰，這對結果的檢測會帶來不利影響，因而在本研究中采用了甲醇-磷酸二氫鈉溶液，且檢測條件為流速為1ml·min-1，檢測波長為 240nm，經對照品、供試品、陰性樣品色譜圖比較，結果顯示丙酸氯倍他索和制劑中的其它組分能達到基線分離，理論塔板數不低于2000。這些結果表明該法用于測定丙酸氯倍他索的含量不受干擾，專屬性強，準確度高。，此外，我們還通過影響因素試驗、加速試驗和長期試驗考察皮靈搽劑的穩定性，在強光、高溫、高濕等條件下試驗，其外觀性狀和含量等均無明顯變化；在長期試驗期間內，該制劑的外觀性狀和含量也均無明顯變化。因此，皮靈搽劑在試驗期間內基本穩定，暫定其有效期為一年。綜上，我們的研究表明HPLC法所建標準可用于皮靈搽劑質量標準的控制。