中藥黃芪中8種有機氯農藥殘留氣相色譜分析及其檢測結果研究

白春杰

（內蒙古通遼市食品藥品檢驗所，內蒙古　通遼　028000）

黃芪又可以稱為綿芪，屬于一種多年生草本植物，黃芪的主根較肥厚，莖直立，上部多分枝，高約50～100 cm[1]。黃芪的藥用價值沿用至今大概有兩千多年的歷史了，黃芪具有增強免疫、保肝利尿以及抗衰老等功能。黃芪是屬于抗菌類的藥物，但是由于藥用價值較大，導致長期大量的采取導致野生黃芪數量急劇減少。現如今的中藥黃芪大都是人為養殖的，在黃芪的生長過程中，藥農為了使其產量提高，大多數會采用農藥進行殺蟲，所以中藥中的農藥殘留問題日益嚴重。因殘留問題關系到中藥的安全用藥問題，在一定程度上阻礙了重要市場的發展[2]。在對黃芪的殺蟲過程中，大多數人會采用有機氯農藥，雖然殺蟲效果顯著，但是有機氯農藥有嚴重的神經毒性和臟器毒性，會對用藥者的身體造成損害，嚴重者會誘發癌癥危機生命。黃芪作為傳統的一種中藥材有扶正補氣的功效，還可以增強機體的免疫功能，應用較廣泛，所以中藥黃芪的安全性問題應該得到重視[3]。在本次的研究中，針對我省的中藥黃芪中8種有機氯農藥殘留氣象色譜分析并研究其檢測結果，研究報道如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料

1.1.1實驗材料從我區醫療機構及經營機構采購8份黃芪樣品，分別標記1～8號。有機氯農藥對照品溶液有六氯甲苯[α-BHC國家標準物質GBW（E）060081 08001、β-BHC國家標準物質GBW（E）060082 08001、δ-BHC國家標準物質GBW（E）060084 08001、七氯GBW（E）081455]，標示均為50μg/ml，艾氏劑GBW（E）081457 、DDT異構體[pp′-DDE國家標準物質GBW（E）060104 07002、pp′-DDD國家標準物質 GBW（E）060105 08001、pp′-DDT國家標準物質GBW（E）060102 08001]，標示均為50μg/ml，正己烷（天津市試劑一廠生產）、無水硫酸鈉（天津市耀華化學試劑有限公司生產）、濃硫酸（天津市試劑一廠生產）、二氯甲烷、丙酮（天津天力化學試劑有限公司）、石油醚（國藥集團化學試劑有限公司）均為分析純。

1.1.2實驗用儀器與設備本實驗所用的儀器為日本Inertsil公司生產的氣相色譜儀，63Ni ECD型電子捕獲檢測器。KQ5200DE超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）。彈性石英毛細管柱（30m×0.32mm×0.25μm）。HC-3018R高速離心機（安徽中科中佳科儀公司生產），旋轉蒸發器RE-52，電子天平：92SM-202A。

1.2方法

1.2.1進樣方法在檢測器溫度達到300℃、進樣口的溫度達到230℃的時候采用不分流進樣法進樣，初始程序升溫溫度為100℃，每分鐘升溫10℃直至升高至220℃，然后再每分鐘升溫8℃直至升至250℃，并保持250℃10 min[4]。高純氮氣的載氣速度為0.001 5 L/min，氮氣采用恒流模式進樣。毛細管柱尾吹流量流速為0.058 5L/min，進樣量為1μl。

1.2.2標準溶液的制備精密量取上述對照品溶液各1 ml，分置50 ml量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，搖勻，并以此作為儲備液，精密量取儲備液2.5 ml置10 ml量瓶中，并繼續用石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，制成0.25 mg/L的混合液，然后量取適量的混合液稀釋為5、10、20、50、100μg/L的梯度溶液。

1.2.3待測溶液的制備待測溶液制備方法參考《中國藥典》中的制備方法，首先取適量的中藥黃芪置入60℃烘箱干燥4～5 h，然后使用中藥粉碎機將黃芪粉碎，過3號篩。準確稱取2 g黃芪粉末于100 ml具塞錐形瓶中加水20 ml浸泡過夜，在黃芪浸泡液中精密加入40 ml丙酮，稱重后使用超聲儀超聲30 min，取出冷卻后稱重，使用丙酮補充損失重量，再加氯化鈉6 g，精密加入30 ml二氯甲烷，再次稱重后超聲20min，冷卻，此次使用二氯甲烷補充損失重量，迅速將有機相轉入100 ml具塞錐形瓶中，然后加入無水硫酸鈉，靜置4～5 h，準確量取30 ml溶液濃縮，加入丙酮濃縮3次再溶解，緩慢加入1ml硫酸后轉移至離心管離心10min（3000r/min），然后取上清液2 ml置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉蒸發儀，40℃將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1 ml待測[5]。

1.3觀察指標記錄標準品及待測液的濃度并繪制標準曲線圖。

記錄有機氯農藥標準品的保留時間以及最低檢測限。最低檢測限為最低檢測濃度與最低檢測量的比值。

觀察氣相色譜圖并計算黃芪中8種農藥的回收率并進行對比。

使用外標法定量測定，并計算回收率和精密度。

1.4統計學方法數據采集使用SPSS 18.0進行分析，計數資料以百分數和例數表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1標準曲線的繪制分別吸取一定量標準貯備液置5 ml量瓶中,用石油醚稀釋至刻度,搖勻，使混合農藥標準品溶液中各標準品濃度為：α-BHC：8×10-2 μg/ml，β-BHC：11.96 μg/ml，δ-BHC：0.952 μg/ml，七氯：1.40 μg/ml，艾氏劑：2.27μg/ml，pp′-DDE：0.980μg/ml，pp′-DDD：2.42μg/ml，pp′-DDT：0.270μg/ml。分別吸取一定體積的上述混合標準品溶液于5.0 ml容量瓶中,用石油醚進行一系列稀釋,取1.0μl進樣,得到標準曲線，其中r最大的是β-BHC，見表1。

2.2有機氯農藥標準品的保留時間及最低檢測限在本次的研究中，保留時間最長的農藥為pp′-DDT，農藥α-BHC的檢測濃度最低，見表2。

2.38種有機氯農藥氣相色譜圖使用配備了電子捕獲器的氣相色譜儀繪制8種有機氯農藥的氣相色譜圖，出峰時間最早的是α-BHC，最晚的是pp′-DDT，見圖1。

圖1　8種農藥標準品氣出峰順序相色譜圖Figure 1　Sequential chromatography of the peak gas output of 8 pesticides注：1.α-BHC,2.β-BHC,3.δ-BHC,4.七氯,5.艾氏劑,6.pp′-DDE,7.pp′-DDD,8.pp′-DDT

表1　8種有機氯農藥的標準曲線及線性范圍Table 1　The standard curve and linear range of 8 kinds of organochlorine pesticides

表2　8種有機氯農藥標準品的保留時間及最低檢測限Table 2　Retention time and minimum detection limit for 8 kinds of organochlorine pesticides standard

2.4精密度和回收率測定稱取黃芪并加入標準品溶液，用所添加的標準溶液為標準，使用外標法定量，計算黃芪的回收率和精密度，其中β-BHC的回收率最低，δ-BHC的精密度最大，見表3。

表3　8種回收率和精密度Table 3　8 kinds of recovery and precision

3　討論

黃芪是一種多年生草本植物，黃芪的藥用價值從被發現至今已有2千多年的歷史了，黃芪具有增強機體免疫能力的功能，黃芪還可以保肝利尿，具有抗衰老和抗應激的作用。黃芪的藥用價值主要體現在它的抗菌能力上，由于黃芪的藥用價值較大，現如今野生的黃芪數量急劇減少，市場上的黃芪大多是人工養殖的[6]。黃芪耐寒耐旱，但是怕熱怕澇，適合種植在土層深厚以及富含腐殖質的土壤。藥農為了使中藥的產量提高都會使用農藥來殺蟲，有機氯農藥是一種普遍使用的廣譜殺蟲劑，屬于一種神經毒物，有嚴重的神經毒性和臟器毒性，會對用藥者的身體造成損害，嚴重者會誘發癌癥危機生命[7]。以BHC和DDT為代表的有機氯農藥在我國使用較廣，雖然其毒性較大，大多數已經被禁用了，但是由于有機氯農藥的半衰期較長，迄今為止在我國中藥中檢出率仍舊非常高。在本次的研究中，主要使用氣象色譜分析的方法進行檢測，本實驗主要使用均質器進行黃芪的提取與分離，均質器是一種國外常用的提取樣品的儀器，本法通過均質器直接提取中藥黃芪中的農藥殘留，在離心以后取出上清液然后再加上石油醚再次提取并分離，反復3次左右，該方法與傳統的方法對比提高了提取的效率，而且減少了實驗過程的損失，操作步驟也大大的簡化了，因為在黃芪中有大量的脂溶性成分，所以在提取過程中要去除這些脂溶性成分，以免影響實驗結果的測定。在本次的研究中，保留時間最長的農藥為pp′-DDT，農藥α-BHC的檢測濃度最低。

有機氯農藥指的是用于防治植物病以及嚴重病蟲害的組成成分中含有氯元素的有機化合物，主要分為兩大類，分別為DDT以及BHC類，有機氯農藥在使用以后因其半衰期較長，所以在使用以后消失緩慢，有機氯農藥脂溶性較強，氯苯的結構較為穩定，在進入植物體內以后不易被植物體的酶降解，致使在生物體內殘留時間較長，所以在中藥上面的殘留將對人體造成極大的危害，在人使用了含有有機氯農藥的中藥后，不但無法起到治療疾病的作用反而會對人體造成極大的損害[8]。有機氯農藥主要是刺激人的神經中樞，慢性中毒者會表現出食欲不振以及惡心嘔吐等不良反應，有時還會出現小腦失調以及造血器官障礙等狀況，中度中毒患者會出現四肢酸痛、抽搐以及紫紺等臨床癥狀，重度中毒患者會出現休克等表現，若出現中毒情況應立即采取催吐等措施，情況嚴重者應該及時就醫，避免產生不可挽回的后果[9]。

現如今，對有機氯農藥的檢測大多采用氣相色譜法進行檢測，樣品中的DDT以及BHC經過提取凈化后使用氣相色譜法進行測定，電子捕獲檢測器對負電荷較強的化合物有比較高的靈敏度，所以可以通過氣相色譜法進行檢測。使用氣相色譜法進行檢測有機氯農藥殘留主要是采用電解質的作用，根據生物化學中的鹽析原理，使得農藥可以從水相進入到有機相，在本次的實驗中，主要是使用丙酮作為提取劑，在丙酮的萃取液中加入一些固體氯化鈉可以對農藥進行分離，然后加入二氯甲烷進行再分離。使用這一方法進行提取以及分離的優點，是不需要對樣品進行多次提取和分離，較方便。在樣品提取液中的水，經過無水硫酸鈉干燥以后并不會影響測定的最終結果。因為我國明確禁止使用有機氯農藥，所以對中藥中的有機氯農藥檢測顯得尤為重要，為我國的中藥安全用藥問題提供了保障。本研究中建立了對黃芪中的有機氯農藥殘留的毛細管氣象色譜分析測定的方法，對其他的中藥中的農藥殘留有較大的參考價值。

在本次的實驗中，通過氣象色譜分析結果可以看出，采集的樣品中有機氯農藥殘留量較低，均符合我國《中國藥典》的要求，大部分的農藥殘留量在我國藥典的限量以內，幾種農藥的殘留問題不同，與中藥的種植條件以及氣候條件等外部因素的影響有關，導致農藥的殘留量不同[10]。在本實驗中，農藥的凈化多采用磺化法進行，使用磺化法可以簡化操作過程，去掉了分液漏斗的操作過程，保障了實驗的安全性和準確性，在實驗過程中只需要加入濃硫酸磺化一次，即可達到凈化的目的。將農藥標準品稀釋成不同的濃度進行測定，保留時間最長的農藥為pp′-DDT，農藥α-BHC的檢測濃度最低，從pp′-DDT的保留時間較長可以看出pp′-DDT的半衰期較長且不易被酶解。中藥農藥殘留問題關系到安全用藥的問題，在現如今的社會中，安全用藥問題受到了越來越大的關注，自從1983年開始，我國已經明確的禁止使用有機氯農藥[11]，但是藥材的種植時間較長，尤其是黃芪，屬于一種多年生根類藥材，非常容易受到有機氯農藥的污染，黃芪屬于一種傳統的中藥材，有扶正補氣的功效，還可以增強機體的免疫功能，所以市場需求較大，安全性問題受到了極大地關注。

綜上所述，在對中藥黃芪中8種有機氯農藥的檢測中，使用氣相色譜分析法進行檢測，在檢測過程中不需要對黃芪溶液反復分離純化，精簡了實驗步驟，對其他此類中藥的農藥殘留問題有較大的參考價值，提高了我國中藥用藥的安全性，可以進行進一步的推廣。