手足口病腸道病毒核酸與血清學(xué)檢測的臨床診斷價(jià)值分析

吳雙雙 陳東 周俊 趙仕勇 吳亦棟?

手足口病是由腸道病毒引起的傳染疾病，好發(fā)于兒童，尤其＜3歲年齡發(fā)病率最高。臨床主要表現(xiàn)為發(fā)熱、口腔和四肢末端的斑丘疹、皰疹，重者可出現(xiàn)腦膜炎、腦炎、腦脊髓炎和循環(huán)障礙等。手足口病由多種腸道病毒引起，經(jīng)糞口途徑和呼吸道飛沫傳播。手足口病感染的主要病原體為腸道病毒71型（EV71）和柯薩奇病毒A組16型（CA16）［1］。作者收集本院手足口病患者的標(biāo)本，目的在于對手足口病進(jìn)行病原學(xué)檢測并對主要病原體進(jìn)行分型，以便更好地了解本病的病原學(xué)特征，有助于本病的預(yù)防，診斷和治療。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2016年6月至2017年5月本院手足口病患者1127例，其中男688例，女439例。手足口病診斷標(biāo)準(zhǔn)參照我國衛(wèi)生部頒發(fā)的《手足口病診斷指南》［2］。

1.2 方法 （1）試劑與儀器：手足口腸道病毒核酸檢測試劑來源于江蘇碩世生物科技有限公司；手足口腸道病毒抗體檢測試劑來源于北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司。所使用的儀器為ABI-7500 FastDX全自動熒光實(shí)時定量PCR儀。（2）檢驗(yàn)方法：①手足口病毒核酸檢測：采用實(shí)時熒光定量PCR法檢測核酸中的腸道病毒通用型，EV71和CA16。②手足口病毒抗體檢測：采用捕獲法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)原理對EV71和CA16 IgM抗體進(jìn)行檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，病毒核酸檢測結(jié)果與血清學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行Kappa一致性檢測。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 核酸和抗體檢測結(jié)果 男女性患者腸道病毒核酸檢測構(gòu)成比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.408，P=0.816）。男女性患者腸道病毒抗體檢測的構(gòu)成比無顯著性差別（χ2=0.155，P=0.694）。見表 1、2。

表1 患者腸道病毒核酸檢測結(jié)果［n（%）］

表2 患者腸道病毒抗體檢測結(jié)果［n（%）］

2.2 手足口腸道病毒核酸與手足口腸道病毒血清學(xué)檢測結(jié)果一致性的分析 對手足口腸道病毒EV71與手足口腸道病毒EV71血清學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行Kappa一致性檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)兩者有較好的一致性，Kappa=0.704，見表3。對手足口腸道病毒CA16與手足口腸道病毒CA16血清學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行Kappa一致性檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)兩者一致性較差，Kappa=0.241，見表4。

表3 EV71腸道病毒核酸與腸道病毒血清學(xué)檢測結(jié)果比較（n）

表4 CA16腸道病毒核酸與腸道病毒血清學(xué)檢測結(jié)果比較（n）

3 討論

引起手足口病的病毒有20多種，其中以EV71和CA16為主，但腸道病毒型別比例在不斷變化，寧波檢測結(jié)果EV71為63.7%，CA16為24.0%，其他腸道病毒為12.3%。上海檢測結(jié)果EV71為30.6%，CA16為8.8%，CA6為31.9%。重慶檢測結(jié)果EV71為4.7%，CA16為1.5%，CA6為67.2%，其他腸道病毒為26.6%［3］。本資料1127例手足口病腸道病毒陽性結(jié)果核酸檢測顯示EV71為25.8%，CA16為8.4%，其他腸道病毒為57.5%；抗體檢測顯示EV71為32.7%，CA16為7.1%。所以需要進(jìn)行長期全面的檢測，以達(dá)到對疾病的預(yù)防和控制。

本資料EV71核酸與抗體檢測結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩者一致性較好，且血清學(xué)檢測的敏感性高于EV71核酸的檢測，將兩者聯(lián)合檢測能提高EV71的檢出率，而CA16核酸與抗體檢測結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)兩者的一致性較差，可能與通常EV71在發(fā)病1d便可檢測到抗體，3d后檢測率可＞90%；而CA16在發(fā)病4d后可檢測到，并在發(fā)病7d后檢測率可達(dá)100%［4］。本資料還發(fā)現(xiàn)在EV71抗體和核酸檢測雙陽性的222份標(biāo)本中，CA16交叉反應(yīng)陽性率為7.2%。EV71-IgM抗體交叉反應(yīng)陽性率與文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)值接近［5］。樣本中檢測出現(xiàn)EV71－IgM和CA16－IgM雙抗體陽性結(jié)果，這是由于EV71與CA16基因水平同源性為77%，而氨基酸同源性為86%［6］。機(jī)體產(chǎn)生一種能識別這兩種病毒共同肽段的抗體，從而產(chǎn)生抗體，部分EV71與CA16存在的交叉反應(yīng)可以通過測量兩者在450nm處的吸光度的比值來判斷，另一部分通過與核酸檢測相結(jié)合可以成功判定是EV71還是CA16感染。 張欣等研究顯示［7］低年齡組感染其他EV的風(fēng)險(xiǎn)較大，本資料中患者以＜5歲為主，尤其以＜3歲患者占79.5%，故應(yīng)加強(qiáng)對嬰幼兒的監(jiān)管。

手足口病是嚴(yán)重影響兒童健康及生命的傳染病，較多報(bào)道，目前我國已有EV71疫苗，可保護(hù)90%由EV71引起的手足口病和80%由EV71引起的其他疾病如皰疹性咽峽炎或相關(guān)神經(jīng)癥狀［8］，但仍有較多問題亟待解決。EV71在各地流行的病毒株不同，抗原性和免疫原性存在一定差異，且不能排除存在流行毒株變異的可能性。因此聯(lián)合檢測以提高檢測率，并對非EV71、CA16的其他腸道病毒進(jìn)行全面檢測，對臨床診斷具有重大意義，最終達(dá)到預(yù)防感染和控制疾病流行的目的。