氣相色譜法測定牛肉中的亞麻酸含量

席斌　陳效威　高雅琴

摘要：研究建立了肉制品中亞麻酸的氣相色譜檢測方法，樣品經氫氧化鉀-甲醇溶液甲酯化后用GC法分析，通過比對亞麻酸甲酯標準品氣相色譜，其保留時間為26.212 min，采用外標法進行定量。結果表明，建立的牛肉中亞麻酸的分析方法在0.01～10.00 mg/mL線性關系良好，相關系數為0.999 95，日內、日間精密度范圍分別為0.73%～1.08%和0.75%～1.01%，均小于15%，回收率為83.3%～95.79%，說明該方法靈敏度好、準確度高、線性好，可用于測定牛肉中的亞麻酸含量。

關鍵詞：氣相色譜法（GC）；牛肉；亞麻酸；亞麻酸甲酯

中圖分類號：O657.7+1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2018）09-0097-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.09.023

Determination of Linolenate in Beefs-Gas Chromatographic Method

XI Bin，CHEN Xiao-wei，GAO Ya-qin，LI Wei-hong，GUO Tian-fen，DU Tian-qing，YANG Xiao-ling

（Lanzhou Institute of Animal Husbandry and Pharmaceutical Science， Chinese Academy of Agricultural Sciences/Quality Safety Risk Assessment of Animal Products （Lanzhou），Ministry of Agriculture/Quality Supervising，Inspection and Testing Center for Animal Fiber，Fur，Leather and Products，Ministry of Agriculture，Lanzhou 730050，China）

Abstract： Linolenate was extracted with Isooctane from beefs，and methylified with KOH-CH3OH solution. Then content of methyl linolenate，which could be translated to the content of linolenate，was quantified with gas chromatographic. The retention time for methyl linolenate was 26.212 min. This method was appicable in a linear range of 0.01～10.00 mg/mL with the correlation coefficient at 0.999 95. The relative standard deviation（RSD） of intra-day and inter-day were 0.73%～1.08% and 0.75%～1.01%，which were less than 15%. The recovery rate was 83.3%～95.79%. The method gave high sensitivity，wide linearity，and specificity，which is suitable for determination of linolenate in beef.

Key words： gas chromatographic； beef； linolenate； methyl linolenate

脂肪酸含量及組成是評定營養價值的重要指標之一[1，2]，人體必需脂肪酸只有兩種，亞麻酸名列首位。亞麻酸作為人體必需不飽和脂肪酸，在醫藥、保健、食品市場需求量巨大。當人體攝入亞麻酸后，在酶的作用下，經過肝臟代謝生成EPA和DHA[3-5]。EPA和DHA對促進胎兒和嬰幼兒的大腦神經細胞發育有不可替代的作用，此外，亞麻酸還具有降血壓、降血脂、抑制過敏反應、抗血栓、抗癌以及對視覺功能和學習行為活動的促進作用等功效，是一種營養性和功能性極高的食用油脂[6-8]。

人們通過食物中獲取亞麻酸的主要途徑有兩種：一是植物源性的，如核桃、花生等干果；二是動物源性的，如含有豐富的亞麻酸代謝物的深海魚類等肉制品[9-12]，但是深海魚類資源貧乏且價格昂貴。

20世紀70年代，國內外才開始認知并接受亞麻酸的功能性營養價值，并逐漸開始進行研究。中國在2002年以后才逐步認識到亞麻酸對人體健康的重要性[13-16]。目前，對亞麻酸的研究主要集中在植物油脂中的脂肪酸，對動物中尤其是西北牛種肉制品中功能性營養物質亞麻酸的研究較少，尤其是肉制品中氣相色譜法（Gas chromatography，簡稱GC）直接用于肉制品中亞麻酸的檢測并不多見。因此，本研究運用GC法對西北內陸地區牛肉中的亞麻酸進行檢測分析，旨在建立牛肉等肉制品中亞麻酸的氣相色譜分析方法，為以后攝取分析亞麻酸提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

亞麻酸甲酯標準品（Sigma公司）；鹽酸（優級純，天津市凱信化學工業有限公司）；甲醇（色譜純，Bcl international trading ltd.co）；無水乙醇（分析純，天津市百世化工有限公司）；乙醚（洛陽昊華化學試劑有限公司）；石油醚（60～90 ℃，分析純，天津市百世化工有限公司）；異辛烷（色譜純，天津市凱信化學工業有限公司）；一水合硫酸氫鈉（分析純，天津市興復精細化工研究所）；無水硫酸鈉（分析純，萊陽市雙雙化工有限公司）；氫氧化鉀（分析純，天津市百世化工有限公司）。

Agilent 7890A氣相色譜儀（配有FID檢測器）（Agilent公司）；BUCHI Mixer B-400均質儀（BUCHI Labortechnik AG 9320 Flawil/Switzerland）；AB-105電子天平（Mettler Toledo Group）；HH-2數顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）。

牛肉樣品分別采于甘肅省康樂牛肉市場、蘭州市柏樹巷牛羊肉市場、平涼牛肉市場和平涼家養牛肉。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent J&W; 123-3233 （30 m×320 μm，0.5 μm）。載氣為氮氣；檢測器為氫火焰離子化檢測器（FID）；進樣口溫度為250 ℃，檢測器溫度為260 ℃。氫氣30 mL/min；空氣300 mL/min；進樣量2 μL，流速1.3 mL/min，平均速率20.806 cm/s。升溫程序：起始溫度150 ℃，保持運行2 min；4 ℃/min 到210 ℃，保持運行8 min；5 ℃/min 到220 ℃，保持運行5 min。

1.2.2 標準品溶液的配制 精確稱取亞麻酸甲酯標準品100.00 mg，異辛烷定容到10 mL容量瓶中，得到10 mg/mL的標準儲備液，置于-20 ℃冰箱備用。

1.2.3 樣品的制備 稱取牛肉試樣2.00 g，置于100 mL試管內，加8 mL水，混合均勻后加10 mL鹽酸，將大試管和內容物置于60 ℃水浴中加熱40～50 min。每隔5～10 min用玻璃棒攪拌一次，至試樣消化完全。加入10 mL乙醇，混合均勻，冷卻至室溫加入25 mL乙醚，劇烈振蕩1 min，再加入25 mL石油醚，振搖2 min，靜置分層，將有機溶劑層轉移到50 mL試管中，于60 ℃下將有機溶劑蒸干，保留脂肪[17-19]。

1.2.4 氫氧化鉀-甲醇溶液的配制 稱取13.1 g氫氧化鉀，溶于約80 mL甲醇中。冷卻至室溫，用甲醇定容至100 mL，加入5 g事先處理好的無水硫酸鈉，充分攪拌后過濾，保留濾液，備用。

1.2.5 亞麻酸甲酯的制備 稱取60.00 mg（精確到0.01 mg）經“1.2.3”方法提取的脂肪，置于10 mL具塞試管中，依次加入4 mL異辛烷、0.2 mL氫氧化鉀-甲醇溶液（2 mol/L），塞緊試管塞，劇烈振蕩2 min，至試管內混合溶液澄清。加入1 g一水合硫酸氫鈉，劇烈振蕩1 min，靜置，取上清液用0.45 μm微孔濾膜過濾后檢測。

1.2.6 數據處理 通過亞麻酸甲酯色譜峰的峰面積與標準品色譜峰的峰面積比較定量，按下述公式計算得出：

X=■

式中，X為試樣中亞麻酸的含量，mg/g；C為樣品中亞麻酸甲酯的含量，mg/mL；V為待測樣品最終定容體積，mL；m為稱樣量，g；D為稀釋因子。根據亞麻酸甲酯的含量直接得出亞麻酸的含量。

2 結果與分析

2.1 GC的定性與分離

采用“1.2.1”的色譜柱和色譜條件，對牛肉中的亞麻酸具有良好的分離效果，采用保留時間比對法確定亞麻酸甲酯的峰位置。由圖1可見，亞麻酸甲酯標準品的保留時間為26.212 min。

2.2 線性范圍

分別配制0.01、0.05、0.50、1.00、5.00、10.00 mg/mL的亞麻酸甲酯標準溶液，按上述試驗條件進樣，對亞麻酸甲酯標準品的GC吸收峰面積（Y）與待測樣品中濃度（X）進行線性回歸（圖2）。由圖2可知，在濃度為0.01～10.00 mg/mL時，亞麻酸甲酯的色譜吸收峰面積與待測樣品中亞麻酸甲酯濃度具有良好的線性關系。回歸方程為Y=1 569.200 07X+20.203 23，R2=0.999 95。

2.3 精密度

配制0.10、0.50和1.00 mg/mL 3個濃度的亞麻酸甲酯樣品溶液按“1.2.3”和“1.2.4”方法操作，每個樣品在同1 d內重復測定5次，計算相對標準偏差，得日內精密度；將每個樣品連續測定3 d，并計算相對標準偏差，得日間精密度。方法精密度和準確度的結果如表1所示。在本試驗中0.10、0.50和1.00 mg/mL三個不同濃度的日內、日間精密范圍分別為0.73%～1.08%和0.75%～1.01%，均小于15%，表明本試驗所建立的方法重復性良好，符合樣品的檢測要求。

2.4 回收率

本試驗中亞麻酸甲酯在牛肉中的回收率通過“1.2.3”和“1.2.4”的方法進行處理，0.10、0.50和1.00 mg/mL 3個不同濃度每個濃度平行測定3次，以測定亞麻酸甲酯的濃度與加入的標準品濃度的比值計算回收率。

按照回收率測定方法，本試驗中0.10、0.50和1.00 mg/mL 3個不同濃度亞麻酸甲酯在牛肉中的回收率在83.33%～95.79%（表2），其相對標準偏差為0.72%～0.91%，均小于1.12%，適合分析方法學的需要。

2.5 樣品測定結果

12種牛肉樣品中亞麻酸的含量測定結果見表3。由表3可知，家養牛肉中亞麻酸的含量明顯高于市賣牛肉，不同地區的牛肉中亞麻酸含量具有一定的差異，表明不同的飼糧以及飼養條件影響肉制品脂肪酸含量。

3 小結

亞麻酸作為人體必需不飽和脂肪酸，在醫藥、保健、食品市場需求量巨大。但亞麻酸迄今不能人工合成，只能依賴于有限的自然資源[19]。然而α-亞麻酸動植物自然資源因為含量問題無法滿足市場對高純度α-亞麻酸原料的需求。雖然通過一些工藝方法可以提純α-亞麻酸，但因成本、金屬殘留等客觀條件，限制了其推廣和應用。

通過運用建立的肉制品中亞麻酸的GC檢測方法得到的色譜圖可以看出，亞麻酸甲酯的峰形對稱，處理后的樣品雜質成分少，該方法靈敏度好、準確度高、線性好以及分離度好，說明本研究建立的試驗方法和色譜條件適合肉制品中亞麻酸的分析檢測。

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