阿托伐他汀對2型糖尿病患者單核細胞toll樣受體4表達和炎癥因子的影響

任麗君，張麥葉，高彬

(1.咸陽市第一人民醫院內分泌科，陜西 咸陽 712000；2.空軍軍醫大學西京醫院內分泌科，陜西 西安 710032；3.西安交通大學生命科學與技術學院，陜西 西安 710049)

隨著社會經濟的不斷發展，人們的生活水平得到了極大的提高，與此同時，人們的飲食結構了發生了巨大的改變，因此2型糖尿病在人群中的發病率呈現出逐年上升的趨勢，嚴重影響了患者的身體健康的生活質量，同時也造成了家庭和社會的重擔[1-2]。有關資料報道[3]，已確診的糖尿病患者發生心血管疾病的危險是正常人的3倍左右，且預后差。研究表明炎癥因子和糖尿病的發生發展密切關聯。也有研究表明[4]，toll樣受體4與介導先天免疫參與了糖尿病的炎性反應。阿托伐他汀可以具有降低、炎癥因子的濃度的效果，同時還可以提高細胞免疫力等作用。本研究通過對2型糖尿病患者予以阿托伐他汀藥物治療，比較此藥物對2型糖尿病患者的單核細胞toll樣受體4和炎癥因子水平的影響，旨在分析阿托伐他汀對糖尿病患者的抗炎作用。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2013年1月至2015年1月咸陽市第一人民醫院收治的60例2型糖尿病患者為觀察組，同期在進行健康體檢的60例正常人作為對照組。對照組包括男33例，女性27例，年齡(62.40±2.59)歲，年齡范圍為59～78歲?；颊叩募{入標準為[5]：(1)符合糖尿病的診斷標準及分類標準；且其他臨床癥狀不典型，主要表現為高血糖；(2)患者生活自理，沒有嚴重的并發癥；(3)所有患者均自愿配合本次調查。排除標準:(1)有嚴重的糖尿病并發癥，如酮癥酸中毒、嚴重糖尿病腎病等；(2)合并有嚴重甲亢、肺結核惡性腫瘤患者；(3)存在有精神病陽性家族史或個人史、有嚴重的認知功能障礙等無法配合護理指導的情況，或者不愿意隨訪的患者。本研究獲咸陽市第一人民醫院倫理委員會批準。將觀察組患者分為觀察Ⅰ組(n=30)和觀察Ⅱ組(n=30)，其中觀察Ⅰ組患者中包括男性18例，女性12例，年齡(62.40±2.59)歲，年齡范圍為59～78歲，病程(5.90±0.89)年，病程范圍為4～8年，使用胰島素劑量為(38.99±2.34) U·d-1，舒張壓(79.99±1.56) mmHg，收縮壓(140.10±2.44) mmHg，血肌酐(99.02±2.52) μmol·L-1; 觀察Ⅱ組患者中包括男性19例，女性11例，年齡(61.72±2.44)歲，年齡范圍為56～75歲，病程(5.21±0.79)年,病程范圍為4～8年，使用胰島素劑量為(39.1±2.50) U·d-1，舒張壓(78.41±1.33) mmHg，收縮壓(138.87±2.12) mmHg，血肌酐(98.33 ±2.65) μmol·L-1。經比較，兩組患者的基線資料(性別、年齡、病程、血肌酐等)差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2方法觀察Ⅰ組患者予以常規的降糖治療，包括健康的飲食指導、生活方式指導、口服降糖藥(除二甲雙胍和胰島素增敏藥)、皮下注射胰島素等。觀察Ⅱ組患者在常規治療基礎上予以阿托伐他汀藥物(北京嘉林藥業股份有限公司，生產批號141148)20 mg，每天1次，晚間口服，連服3個月。

1.3TRL4的檢測方法靜脈采血1 mL于ED-TA抗凝管。取100 μL抗凝血，再將10 μL加到TRL4抗體，混勻后避光孵育30 min，再裂解紅細胞，離心后細胞沉淀即加0.5 mL PBS重懸，采用流式細胞儀檢測單核細胞toll樣受體4表達；采用半定量逆轉錄-聚合酶鏈式反應法(RT-PCR)檢測單核細胞TLR4 mRNA表達，采用DNAMAN軟件設計引物，由日本Takara生物技術有限公司合成。引物序列(上海申友公司合成)。擴增產物取每個反應體系10 μL于非變性聚丙烯酰胺凝膠中電泳,電泳結果與β-actin的電泳結果相對照,得出TLR4表達的相對強度。TRL4：上游CCATTTCAGCTCTGCCTTCAC 下游ACAACAATCACCTTTGGGCTTT。

1.4血清因子的檢測方法采用ELISA法分別測定血清超敏C-反應蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6) 、總膽固醇(TC)、 低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)等水平。試劑盒購于武漢生物工程有限公司，嚴格按照說明書進行操作。

1.5觀察指標采用流式細胞儀檢測單核細胞toll樣受體4表達；IL-6使用GC-911y計數儀測定，TNF-α與炎性反應密切相關，其濃度與病情的嚴重程度成正比，使用GC-911y計數儀測定，hs-CRP為肝臟合成，釋放到血液中，常于炎性反應期水平增高，其水平的高低直接影響疾病的發生，使用C反應蛋白測定試劑盒測定。同時，對患者的治療前后的血糖進行比較。其中血糖達標標準為：空腹血糖5～6 mmol·L-1，餐后2 h血糖6～8 mmol·L-1，糖化血紅蛋白6.5%～7.0%。

1.6統計學方法應用SPSS 21.0統計軟件包進行數據處理，兩組之間差異的比較使用t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1對照組和觀察組患者的單個核細胞TRL4mRNA和蛋白表達比較較對照組而言，觀察組的單個核細胞TRL4 mRNA和蛋白表達治療后明顯升高(P<0.05)，見表1。

表1 對照組和觀察組患者的單個核細胞TRL4 mRNA和蛋白表達比較

注：與對照組治療后比較

2.2觀察Ⅰ組和觀察Ⅱ組治療前后的TRL4mRNA和蛋白表達比較與治療前相比，治療后觀察Ⅰ組患者的單個核細胞TRL4 mRNA和蛋白表達差異無統計學意義(P>0.05)，而觀察Ⅱ組患者治療后的單個核細胞TRL4 mRNA和蛋白表達較治療前明顯降低，且更低于觀察Ⅰ組患者(P<0.05)，見表2。

表2 A組和B組治療前后的TRL4 mRNA和蛋白表達比較

注：與觀察Ⅰ組組治療后相比，aP<0.05

2.3觀察Ⅰ組和觀察Ⅱ組治療前后的炎癥因子水平比較與治療前相比，治療后觀察Ⅰ組患者的hs-CRP、 TNF-α、IL-6 、TC、 LDL-C差異無統計學意義(P>0.05)，而觀察Ⅱ組患者治療后的hs-CRP、 TNF-α、IL-6 、TC、 LDL-C較治療前明顯降低，且更低于觀察Ⅰ組患者(P<0.05)，見表3。

2.4觀察Ⅰ組和觀察Ⅱ組治療前后的血糖指標比較兩組治療前后的空腹血糖、餐后2 h血糖和糖化血紅蛋白情況差異有統計學意義(P<0.05)，兩組組間的比較也差異有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 觀察Ⅰ組和觀察Ⅱ組治療前后的血糖指標比較

2.5糖尿病疾病組相對表達與血清因子的相關性TRL4與病情活動的指標相關，見表5。

表5 糖尿病疾病組相對表達與血清因子的相關性

3 討論

2型糖尿病的發病分別有遺傳、肥胖、年齡和現代生活方式等幾大因素相關，該疾病的治療主要以控制血糖為主[6-7]。而目前，在臨床中已有研究證明[8]，炎癥亦在與2型糖尿病的發生和發展中起著重要的影響作用。其中，急性和慢性高血糖通過多種信號參與2型糖尿病患者機體的炎性反應[9]。所以，在對2型糖尿病患者進行有效的降糖治療外，再進行抗炎亦是治療此疾病的有效舉措之一。

表3 觀察Ⅰ組和觀察Ⅱ組治療前后的炎癥因子水平比較

注：與觀察Ⅰ組治療后相比，aP<0.05

相關文獻顯示[10]，單核細胞toll樣受體4信號通路和2型糖尿病的炎性反應具有相關性。因氧化應激，糖基化反應的存在，患者外周血中和外周血單核細胞中的TLR4配體增加，TLR4與之結合后，誘導炎癥因子的產生。炎癥的激活與TLR4高表達相關[11]。既往研究表明,2 型糖尿病患者TLR4表達增高,與血漿TNF-α呈正相關,Devaraj等[12]報道1型糖尿病大鼠，TLR4表達上調與炎癥因子增加密切相關。TLR4缺陷的大鼠鏈脲佐 菌素誘導發生糖尿病后,TLR 下游分子 MyD88,磷酸化 IRAK-1 蛋白,Trif,IRF3,和 NF-κB 活性明顯下降,血清炎癥因子IL-1β,IL-6, MCP-1) 和 TNF-α降低。可見降低TLR4表達和抑制TLR4信號通路可能會減輕2型糖尿病的炎性反應。陳海英等[13]的報道中顯示，2型糖尿病患者單細胞TLR4表達與血清炎癥因子CRP和TNF-α等相關。羅成等[14]的研究發現，糖尿病大鼠TLR4表達與炎癥因子亦具有相關性，TLR4缺陷的大鼠發生糖尿病后，其炎癥因子亦隨之降低。而在本研究發現，與健康的對照組相比，發生2型糖尿病患者的TRL4 mRNA和蛋白表達明顯上調，與以上文獻報道結果相似。由此說明了TLR4信號通路的激活和介導的炎性反應在2型糖尿病的機體中發揮了重要作用。

近年來，他汀類藥物被臨床中廣為使用。他汀類藥物降低糖尿病患者心血管風險不能單用血脂降低解釋。他汀類藥物具有調脂外的多向性作用，其臨床獲益可能與抗炎作用相關。有研究證明[15]，他汀類藥物可以降低健康人群的TRL4表達和下游信號分子，但其在糖尿病患者中能否發揮抗炎的效果和是否與抑制TRL4通路相關尚未確定。而在本研究中的結果顯示，通過阿托伐他汀進行治療的2型糖尿病患者的TRL4 mRNA和蛋白表達、CRP、TNF-α、IL-6、LDL-C等因子明顯降低，此外，本研究經相關性結果分析發現，TRL4與CRP、TNF-α、IL-6、LDL-C間具有相關性，這說明了阿托伐他汀在一定程度上降低糖尿病患者TRL4蛋白表達，進而降低TRL4通路激活介導的炎性介質產生，且可以起到有效的抗炎效果，同時，此發揮的作用和TRL4信號通路的抑制具有密切的關聯。所以，我們認為可將TRL4信號通路和炎癥因子作為評估2型糖尿病患者疾病情況和嚴重度以及療效的有利指標。同時，本研究中發現，阿托伐他汀可以以輔助調節患者的糖代謝和控制血糖，由表4可以看出，B組的血糖指標比A組和干預前的改善更為顯著。

綜上所述，阿托伐他汀的機制與TRL4及炎癥因子的釋放相關，這可能成為有效治療2型糖尿病治療作用的機制之一，且TRL4信號通路亦可能成為治療2型糖尿病的潛在靶點。