“軟傷痛舒靈”擦劑對大鼠急鈍性損傷后血清CK、IL-6的影響

趙 航

（北京體育大學，北京 100084）

在體育運動過程中發生的各種損傷稱為運動損傷 。損傷后可出現疼痛、皮溫升高、關節活動障礙，甚至關腫脹、皮下出血等。這時肌纖維的撕裂、水腫，炎性細胞浸潤。傳統醫學認為，急鈍性損傷屬于“筋傷”的范疇，氣運血行不暢，主要是氣滯血瘀，脈絡不通 。血瘀則氣滯，氣滯則疼痛，瘀血不散則化熱，故治療以行氣止痛、活血化瘀為主 。本次實驗主要目的是制定并完善“軟傷痛舒靈”擦劑的配方，建立動物損傷模型，研究軟傷痛疏靈對軟組織損傷的修復作用，為該藥臨床治療急性軟組織損傷提供理論依據。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

“軟傷痛舒靈”擦劑對大鼠急鈍性損傷后血清CK、IL-6的影響。

1.2 研究材料

1.2.1 主要實驗儀器 軟組織損傷打擊器，G＆G T-500型電子天平，基本手術操作器械，血清CK全自動生化分析儀，BIO RAD 酶標儀，低溫高速離心機，5mL 真空采血管，Axygen 200ul 吸頭，5mL 離心管，500g砝碼。

1.2.2 主要材料和試劑 實驗試劑：5%水合氯醛 300mL，肌酸激酶（CK）試劑盒，IL-6 酶聯免疫（ELISA）試劑盒，軟傷痛舒靈原藥材，云南白藥氣霧劑。

實驗擦劑的配制和選用：本研究采用50%乙醇作為溶劑進行提取。制配流程如圖1。

1.3 研究方法

1.3.1 實驗對象 選用SD大鼠36只，SPF級，雄性，8周齡，體重270±10g，由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供。購入后適應性喂養1周。標準嚙齒類動物飼料喂養，自由飲食、飲水。鼠籠18個。造模后，按體重給每只大鼠編號，分為空白對照組、損傷模型組、云南白藥組、軟傷痛舒靈組，共4組，空白對照組6只大鼠，其余每組各10只。

1.3.2 造模方法 空白對照組不做處理，其余3組在造模前一天將右側后肢脫毛刀脫毛。造模采用自由落體打擊，俯臥固定于鼠板上，使腓腸肌暴露清楚。把500g砝碼從30cm高處自由下落，打擊 1次，造成鈍性損傷，形成模型，造模后右側后肢明顯腫脹，皮下淤血，可見跛行，無骨折顯示造模成功。

1.3.3 實驗給藥途徑、方法、劑量 造模后遵循RICE原則進行制動、冷敷等，24h后即開始對用藥組進行相應干預，損傷模型組用0.9%生理鹽水進行對照干預，云南白藥組、軟傷痛舒靈組2組相應的局部噴藥，3次/ d，空白對照組不做任何處理。3d后4組一起取材。采用腹腔注射水合氯醛麻醉大鼠，把腹腔靜脈暴露出來，每只分別取靜脈血50mL×2，靜置30min后，等血液凝固，再放入高速離心機內，離心以后，血清編號分裝，置于-20℃的冰箱中保存。

1.3.4 指標的觀察與監測 大鼠血清CK 的檢測：將低溫存放的血清置于常溫下解凍后用Max MAT 儀器，用濕式檢測方法測定。大鼠血清 IL-6 的檢測：采用ELISA 的夾心法測得，將待測樣本加入酶標板內進行檢測，標準樣品的濃度已知，同時先溫育生物素標記的抗體。大鼠血清白介素-6（IL-6）洗滌后，加入 HRP酶標記過的親和素。再將未結合的酶結合物清除掉，然后加入底物 A、B 兩種，使其與酶結合物發生顯色反應。樣品的濃度和顏色的深淺成比。再由 BIORAD 酶標儀測得。

1.3.5 統計學方法 所有數據采用SPSS軟件包進行處理，測定結果以`x±SD表示。

2 研究結果

從表1可以看出，損傷模型組是損傷后未作任何處理比空白對照組的血液CK更高，有顯著性差異（P＜0.05）。云南白藥組CK指標低于損傷模型組，且有明顯差異（P＜0.05）；軟傷痛舒靈組CK指標低于損傷模型組，且有顯著性差異（P＜0.01）；損傷模型組的IL-6數值均高于空白對照組，且存在顯著性差異（P＜0.01）；云南白藥組、軟傷痛舒靈組IL-6值均低于損傷模型組，且存在顯著性差異（分別為P＜0.01，P＜0.05）。

3 討 論

3.1 軟傷痛舒靈對骨骼肌損傷后血清CK的作用

CK 存在于動物的骨骼肌中，與肌肉收縮有直接關系。一直以來被作為骨骼肌損傷情況的重要生化指標之一 。在大鼠發生急鈍性損傷3天后，觀察血清CK變化：損傷模型組的CK值明顯高于空白對照組，說明了損傷情況發生。云南白藥組和軟傷痛舒靈組CK值都是低于損傷模型組，說明在骨骼肌損傷后及時給藥的兩組受到的干預，使血清CK未能繼續急劇上升。因此，軟傷痛舒靈可以降低骨骼肌急鈍性損傷后的血清CK水平，對骨骼肌損傷的愈合有一定促進作用。

3.2 軟傷痛舒靈對骨骼肌損傷后IL-6的作用

白細胞介素-6（IL-6）容易在急、慢性炎癥中出現。除了在骨骼肌的損傷中，在修復中也有重要作用，炎癥細胞、骨骼肌細胞都可以分泌IL-6 。在大鼠發生急鈍性損傷3d后，觀察到IL-6：損傷模型組的IL-6值明顯高于空白對照組。云南白藥組、軟傷痛舒靈組的血清 IL-6 含量均小于損傷模型組（分別是P＜0.01，P＜0.05），且接近正常水平，說明軟傷痛舒靈能有抑制骨骼肌急性損傷后血清IL-6 的升高。肌肉損傷后，刺激了機體細胞大量分泌和釋放 IL-6 等細胞因子，一定量值的IL-6能促進骨骼肌損傷的修復，軟傷痛舒靈抑制了炎性細胞，減緩了IL-6的大量釋放，對骨骼肌損傷修復有積極作用。

表1 血清CK、IL-6的測試結果 ±s

表1 血清CK、IL-6的測試結果 ±s

注：#表示與空白對照組相比，P＜0.05，##為P＜0.01；*表示與損傷模型組相比，P＜0.05，*為P＜0.01。

組別 只數CK（U/L）IL-6（μg/L）空白對照組損傷模型組云南白藥組軟傷痛舒靈組6 10 10 10 780.08±116.07 1154.99.51±299.55#830.79±68.26*843.03±73.54**26.12±4.96 32.17±1.07##27.70±1.35**28.24±1.78*

4 結 論

在損傷早期及時給予軟傷痛舒靈干預能加快大鼠急鈍性軟組織損傷的愈合，其原理可能是： 軟傷痛舒靈可以降低骨骼肌急鈍性損傷后的血清CK水平；軟傷痛舒靈抑制了炎性細胞，減緩了IL-6的大量釋放。