PEDV、TGEV與GRV混合感染的診斷

楊 勇

（貴州省安順市關嶺布依族苗族自縣畜牧服務中心，貴州 安順 561300）

在養豬生產中仔豬腹瀉病是常見的疾病，也是仔豬死亡的重要原因之一，發病豬臨床癥狀常為腹瀉、食欲廢絕、脫水、精神沉郁，且感染1周齡以內的哺乳仔豬死亡率最高達100%[1]。通常豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）和豬輪狀病毒（GRV/PoRV）是引起豬腹瀉病的3種主要病毒性病原，其在臨床上常單一感染或多重感染[2]。豬流行性腹瀉常發生于幼齡仔豬，水樣腹瀉，病豬常因脫水而死；豬傳染性胃腸炎發生于各年齡段豬，臨床癥狀各異，10日齡左右仔豬感染率及死亡率最高；豬輪狀病毒病在仔豬感染后常出現體內酸堿平衡紊亂，導致短暫或持久性腹瀉，種豬、育成豬則多呈隱性感染，不表現嚴重的臨床癥狀。因3種病毒臨床上常呈混合感染且均以腹瀉為主要特征，通過臨床癥狀難以確診，需實驗室檢測對其進行確診。

2017年11月初，貴州某豬場仔豬出現整窩持續性腹瀉，為確診病因，故送檢腹瀉病死仔豬2頭。現將檢測過程及結果報道如下。

1 流行情況及臨床癥狀

貴州省關嶺縣某豬場20日齡左右仔豬出現整窩持續性腹瀉，發病仔豬感染初期表現為水樣腹瀉、食欲減退、精神萎靡，部分仔豬腹瀉物呈灰黑色并有腥臭味，后期因脫水消瘦死亡。豬場曾用多種抗生素治療無效，故實驗室初步疑為病毒性腹瀉。

2 解剖觀察

將病死仔豬解剖后，觀察。可見小腸壁黏膜脫落而變薄，腸系膜淋巴結、腹股溝淋巴結腫大出血。剖檢結果見圖1。

3 病毒RT-PCR檢測

取其剖解病死仔豬的腸內容物液氮反復凍融3次后，用TaKa-Ra MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0核酸提取試劑盒提取樣本核酸保存備用。參照文獻[3]，分別設計針對PEDV、TGEV和GRV的RT-PCR三對特異性引物，委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

應用一步法RT-PCR試劑盒，以上述所提核酸作為模板分別對PoRV、PEDV和TGEV進 行RT-PCR擴增檢測。反應體系（共50.0 μL）：RNase Free H2O 12.0 μL，2×1 Step Buffer 25.0 μL，上、下游引物各 1.0 μL，Prime Script One Step Enzyme Mix 2.0 μL， 核 酸 模 板9.0 μL，反應程序為 50 ℃ 40 min ；94 ℃ 5 min ；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35個循環；72 ℃ 10 min。擴增產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測后，在凝膠成像系統中進行觀察，結果顯示，PEDV、TGEV和PoRV均呈陽性，結果見圖2。

4 討論

圖1 剖檢病變觀察

圖2 病原RT-PCR檢測結果

經檢測，確診了引起該起豬腹瀉的原因為PEDV、TGEV和GRV混合感染。天氣驟冷可能是導致該起病例流行的氣候因素。對于PEDV、TGEV和GRV混合感染的防治，應加強飼養管理，搞好環境衛生，保持豬舍清潔、干燥和溫暖，加強護理，嚴格做到全進全出；轉群后及時清理糞便及污染的墊料，全面做好消毒工作，可用漂白粉、2%的NaOH或5%～10%的石灰乳進行消毒。因病毒性疾病大多只能從疫苗角度進行免疫工作，所以可選用PEDV、TGEV和GRV的三聯苗對種豬進行疫苗免疫，在妊娠母豬產前3～4周進行接種，仔豬多數病毒感染的抵抗力主要來自母源抗體，需保證母豬在哺乳過程中的營養和泌乳量正常。對于PEDV、TGEV和GRV感染無特效治療藥物，當發生該類疫病時，應立即隔離發病仔豬，對腹瀉仔豬及時補充電解多維水、葡萄糖、諾氟沙星進行補液防止繼發感染。另有文獻報道可根據發病豬的體重取磺胺脒、鞣酸蛋白、復合維生素、維生素K3壓碎后，添加適量蜂蜜調勻，在病豬的舌面涂抹使其吞服，3次/d；采用中藥配方板藍根75 g、乳汁草50 g、地榆炭50 g和紅糖500 g加適量水煎成3 000 mL，2小時1次，每次20 mL，對GRV有較好療效，發病豬場可對癥治療。