BCL6共抑制因子樣蛋白1在老年非小細(xì)胞肺癌患者組織中表達(dá)及其對遠(yuǎn)期預(yù)后的影響

朱曉菡 田 杰

(鄭州鐵路職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 鄭州 451460)

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是常見的惡性腫瘤之一，占肺癌總數(shù)的80%～85%〔1〕。流行病學(xué)顯示，約75%的NSCLC老年患者發(fā)現(xiàn)時已處于中晚期，5年生存率很低〔2〕。上皮鈣黏素屬于鈣黏素家族，可介導(dǎo)同型細(xì)胞黏附。研究表明〔3〕，上皮鈣黏素表達(dá)的異常可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞上皮表型缺失。BCL6共抑制因子樣蛋白(BCORL)1是一種轉(zhuǎn)錄共抑制因子。BCORL1可以與C-末端結(jié)合蛋白協(xié)同或者結(jié)合啟動子區(qū)域特定位點抑制上皮鈣黏素基因轉(zhuǎn)錄〔4〕。本研究探討B(tài)CORL1在NSCLC組織中表達(dá)及其對老年患者遠(yuǎn)期預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 79例手術(shù)后NSCLC癌組織標(biāo)本及其癌旁組織標(biāo)本，收集時間2010年1月至2014年3月。年齡60～76歲，平均(66.4±5.5)歲，分化程度：高分化13例、中分化24例、低分化42例。

1.2納入、排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①實驗標(biāo)本均來源于手術(shù)切除標(biāo)本，術(shù)后實施病理學(xué)檢測確診為肺癌；②手術(shù)治療前無免疫治療、放射治療及化療史；③年齡<79歲；④本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①轉(zhuǎn)移性肺癌；②放化療治療史；③臨床資料缺失。

1.3檢測方法 采用免疫組化SP法檢測經(jīng)過石蠟包埋的組織切片中BCORL1蛋白表達(dá)，將臨床上收集的術(shù)后NSCLC癌組織及其癌旁組織標(biāo)本，二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化處理，使用10 mmol/L 檸檬酸鹽緩沖液(pH6.5)中孵育20 min，溫度為98℃進(jìn)行抗原修復(fù)。冷卻至室溫后，使用3%H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶，3%牛血清蛋白封閉1 h，將1∶100稀釋的兔抗人BCORL1多克隆抗體加入(武漢艾美捷科技有限公司)，4℃過夜。沖洗后滴加生物素標(biāo)記的驢抗兔IgG工作液(武漢艾美捷科技有限公司)，室溫孵育1 h，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育1 h。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色處理3～10 min，終止反應(yīng),雙蒸水充分洗滌。蘇木素復(fù)染1 min，脫色后顯微鏡下觀察。

1.4結(jié)果判斷 免疫染色后結(jié)果判定：BCORL1蛋白主要定位在細(xì)胞質(zhì)中，陽性染色的細(xì)胞質(zhì)中可見黃色、褐色的顆粒，①根據(jù)細(xì)胞質(zhì)染色程度進(jìn)行計分，無色0分、淡黃色1分、棕黃色2分、深褐色3分；②在一個視野內(nèi)根據(jù)陽性染色細(xì)胞所占比例進(jìn)行計分：≤10%(1分)、 11%～50%(2分)、 51%～75%(3分)、如果>75%(4分)，取染色程度積分與染色陽性的細(xì)胞比例積分進(jìn)行乘積計算，總分<3分(陰性)、總分≥3分(陽性)。總分<3分則判斷為“-”；為3～5分則判斷為“+”；為6～9分則判斷為“”；>9分則判斷為“”。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗和多因素分析。

2 結(jié) 果

2.1兩類組織標(biāo)本BCORL1蛋白表達(dá)率比較 癌組織中BCORL1蛋白陽性表達(dá)率(70.89%，+18例、31例、7例)明顯高于癌旁組織(25.32%，+19例、1例、0例；χ2=32.858，P<0.001)。

2.2癌組織標(biāo)本中BCORL1蛋白陽性表達(dá)率與老年患者臨床病理特征的關(guān)系 BCORL1蛋白陽性表達(dá)與NSCLC老年患者的年齡、性別、病灶直徑、病理學(xué)類型無關(guān)(P>0.05)；與TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.05)；見表1。

2.3隨訪情況及多因素分析 12～36個月隨訪觀察，BCORL1蛋白陽性表達(dá)者3年生存率〔21.42%(14/56)〕顯著低于陰性表達(dá)者〔47.83%(11/23)；χ2=5.505，P=0.019〕。采用Cox比例風(fēng)險回歸模型進(jìn)行分析，結(jié)果顯示分化程度減低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、BCORL1蛋白陽性表達(dá)是NSCLC老年患者不良預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05)；見表2。

表1 癌組織標(biāo)本中BCORL1蛋白陽性表達(dá)率與老年患者臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

表2 Cox多因素分析結(jié)果

3 討 論

肺癌根據(jù)病理學(xué)類型大體分為NSCLC和小細(xì)胞肺癌(SCLC)，兩者分別約占肺癌發(fā)病總數(shù)的80%和20%〔5〕。臨床上，由于NSCLC確診時多數(shù)老年患者已發(fā)展為晚期或局部晚期，不適合手術(shù)切除，此時需進(jìn)行全身的化療和放療。

轉(zhuǎn)移是腫瘤惡化的主要原因，腫瘤轉(zhuǎn)移是一個多種基因結(jié)構(gòu)和功能異常參與的多步驟復(fù)雜過程〔6〕。上皮鈣黏素屬于鈣黏素家族，主要分布于非神經(jīng)上皮組織。上皮鈣黏素可介導(dǎo)同型細(xì)胞黏附，參與胚胎發(fā)育及正常組織中上皮細(xì)胞層形成和維持〔7〕。Cui等〔8〕研究表明，上皮鈣黏素表達(dá)異常可能是腫瘤細(xì)胞上皮侵襲、轉(zhuǎn)移潛能增加的原因。Liu等〔9〕研究顯示，上皮鈣黏素還能抑制腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶，從而抑制腫瘤細(xì)胞中各種蛋白降解。上皮鈣黏素在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中可能具有多方面作用。Eberlein等〔10〕研究發(fā)現(xiàn)，在NSCLC中，上皮鈣黏素啟動子甲基化狀態(tài)與其基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)。

腫瘤發(fā)展過程涉及多種基因功能的概念，上游基因可能是下游基因改變的原因。BCORL1是近年來受到關(guān)注的一種轉(zhuǎn)錄共抑制因子，具有抑制上皮鈣黏素基因轉(zhuǎn)錄的作用。BCORL1通過結(jié)合啟動子區(qū)域特定位點抑制 E-cadherin基因轉(zhuǎn)錄，另外，BCORL1也可以與 C端結(jié)合蛋白(CtBP)協(xié)同作用〔11〕。研究顯示，BCORL1在正常組織中呈現(xiàn)低表達(dá)或表達(dá)缺失，僅僅在睪丸和前列腺組織中呈現(xiàn)高表達(dá)〔12〕。BCORL1在胃癌組織中具有較高表達(dá)，且與腫瘤惡化程度呈負(fù)相關(guān)〔13〕。此外，在肝細(xì)胞癌中BCORL1表達(dá)水平明顯高于癌旁組織〔14，15〕。免疫組化法具有精確定位和定性的特點，常用于腫瘤學(xué)的檢測。本研究提示BCORL1蛋白在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起重要作用。初步推測BCORL1在肺癌中可能是一個癌基因，能通過轉(zhuǎn)錄抑制上皮鈣黏素發(fā)揮促癌功能，但具體功能及精確的分子機(jī)制有待研究。本研究說明BCORL1與分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移協(xié)同影響NSCLC患者預(yù)后，BCORL1可能作為NSCLC 預(yù)后判斷的分子指標(biāo)，并可能成為其治療的潛在靶點。