子宮內膜樣腺癌中CD74和細胞周期蛋白A1的表達及關聯性

梁曉紅 段廣庭 袁 穎

(青海省交通醫院婦科，青海 西寧 810001)

子宮內膜樣腺癌是子宮內膜上皮來源的腫瘤中最常見的類型。近年顯示其發病率有升高趨勢〔1〕。CD74是在小鼠及人類體內被發現，通過與CXC趨化因子受體、CD44和CD95等分子結合成為蛋白復合體介導下游分子通路，并在細胞組裝和肽類抗原遞呈方面發揮重要作用。近年研究顯示CD74在多種腫瘤中的表達升高〔2〕。細胞周期蛋白A1(CyclinA1)作為細胞周期正調控因子，在G1晚期到有絲分裂期均有表達，是維持正常細胞周期所必需的因子〔3,4〕。本實驗應用流式細胞術檢測子宮內膜樣腺癌術后組織中CD74和CyclinA1的表達，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 2015年1月至2017年6月青海省交通醫院經病理學確診為子宮內膜樣腺癌，并行手術根治的患者82例為觀察組，年齡40～83歲，平均62.7歲。納入均符合WHO新版的診斷標準。排除標準：①林奇綜合征；②先天性疾病；③伴有風濕免疫性疾病。34例子宮肌瘤行子宮全切的患者為對照組，留取術后的子宮內膜組織，其中增生期18例，分泌期16例，年齡41～60歲，平均47.3歲。兩組均留取術后新鮮組織，均應用70%的酒精固定保存。

1.2流式細胞術檢測CD74和CyclinA1的表達 CD74和CyclinA1蛋白均為濃縮液，先應用免疫組化方法進行預實驗，由顯微鏡觀察后選擇最理想的表達濃度用于正式實驗。CD74和CyclinA1的正式檢測應用流式細胞術。將酒精固定的組織剪成碎末，用銅網過濾后，制備成單細胞懸液(1×106/ml)。取1 ml單細胞懸液，分別加入CD74或CyclinA1一抗、磷酸鹽緩沖液(PBS)及異硫氰酸熒光素(FITC)-IgG二抗(均嚴格按實驗步驟操作)。流式細胞儀為美國BC公司生產，采用系統自帶軟件進行數據分析。

1.3結果分析 以熒光指數(FI)表示CD74或CyclinA1蛋白表達的半定量。FI=(腫瘤中蛋白表達的平均熒光強度-對照樣品平均熒光強度)/正常對照樣品平均熒光強度。

1.4統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行t、F檢驗、線性相關分析。

2 結 果

2.1CD74和CyclinA1在兩組中表達 兩組CD74和CyclinA1表達量差異有統計學意義(P<0.001)。見表1。

2.2CD74和CyclinA1表達在觀察組不同臨床病理特征中的比較 CD74和CyclinA1表達與腫瘤浸潤深度和增殖指數相關，CD74表達與腫瘤分化程度相關。見表2。

2.3觀察組中CD74和CyclinA1相關性 CD74和CyclinA1表達無明顯相關性(P>0.05)。

表1 CD74和CyclinA1在兩組中表達

表2 CD74和CyclinA1表達在觀察組不同臨床病理特征中的比較

3 討 論

子宮內膜樣腺癌是一種腺上皮腫瘤，由腺泡狀、乳頭狀或部分實性結構構成，缺乏子宮內膜漿液性癌的細胞核特征〔5〕。子宮內膜樣腺癌患者雌激素水平較高，平均年齡約63歲，90%的患者有一定程度的陰道排液，典型的病變特點為腺性或絨毛腺性結構，襯覆復層柱狀上皮，并伴有擁擠、復雜的分支結構，襯覆細胞一般為柱狀，相鄰細胞的頂部邊界平齊，所形成的腺腔輪廓光滑〔6〕。腫瘤細胞嗜酸性、顆粒狀，核可見輕到中度不典型性，核仁不明顯。腫瘤在生長和進展時可以表現出增殖相關蛋白的失調〔7〕。CD74是一種非多形性糖基化蛋白，分子量為31～45 kD，通過選擇性剪切及成熟mRNA經過選擇性翻譯起始密碼子產生了P33、P35、P41和P43這4種異型體蛋白〔8〕。P33是細胞內CD74蛋白的主要存在形式，其一級結構由胞內段、跨膜區及胞外段組成。研究認為CD74作為促炎細胞因子的受體，與促炎因子結合后啟動細胞下游信號級聯反應，促進腫瘤性病變形成〔9,10〕。CyclinA1是細胞周期家族的重要成員，屬于高度保守的Cyclin家族，具有組織特異性，可以結合轉錄因子E2F-1、P21家族蛋白等，CyclinA1可以與Cyclin依賴性蛋白質激酶2形成復合物，引起E2F-1的磷酸化，調節細胞周期〔11,12〕。

流式細胞術是新型檢測技術，組織制備單細胞懸液后應用抗體及熒光二抗標記，結果客觀，準確。本實驗結果提示CD74和CyclinA1二者對腫瘤的形成有明顯的促進作用，即二者類似癌基因樣的作用。CD74和CyclinA1二者參與腫瘤的浸潤過程及增殖過程。CD74和CyclinA1高表達使腫瘤細胞具有明顯的直接蔓延能力，同時使腫瘤細胞對肌層的侵襲破壞能力明顯增強，這可能是由于CyclinA1和細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)2結合后引起CyclinA1活化有關，同時引起CDK2磷酸化，進而抑制CDK2活性〔13,14〕。CyclinA1和CyclinB間也有相互作用，這可以引發Cyclin銷毀路徑并終止有絲分裂。CyclinA1在CyclinB之前也有相互作用，這可以引發Cyclin銷毀路徑并終止有絲分裂。也有觀點認為CyclinB可以誘導泛素介導的Cyclin家族成員的降解，CyclinA1可以阻止這種降解。這些作用均與促腫瘤作用密切相關〔15〕。CD74表達的變化使腫瘤浸潤模式發生改變，能引起細胞極性紊亂，使腫瘤細胞的形態更加彌漫，細胞體積更小，易于浸潤〔16〕。本結果提示CD74可以調節腫瘤性的分化過程，其表達升高可以使腫瘤細胞停滯在幼稚狀態。本實驗未發現CD74和CyclinA1的相關性，提示二者在子宮內膜樣腺癌中的作用可能是通過獨立的通路發揮的，其具體調控機制有待更多實驗證實。