血清骨橋蛋白、細胞質(zhì)胸腺激酶和DKK1的肺癌診斷價值

高東奇 李青山 張晶晶 李富博 白璐

承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院南院腫瘤科（河北承德 067000）

肺癌是全世界常見的惡性腫瘤之一，其總的發(fā)病率和死亡率居惡性腫瘤首位，并呈逐年上升趨勢，嚴重威脅人類健康［1-2］。臨床上對肺部疾病患者一般進行影像學(xué)檢查，雖然能夠?qū)Ψ尾考膊〉脑\斷提供重要參考，但對于區(qū)分肺癌和肺良性疾病存在局限，主要是由于肺癌與肺良性疾病的早期癥狀相似，這導(dǎo)致肺癌早期診斷率較低，使患者錯過了最佳治療時機，致使肺癌患者預(yù)后不佳、死亡率升高等，故肺癌的早期診斷具有重要意義［3］。肺癌血清生物標志物檢查是一種有效的肺癌早期診斷手段，該方法具有簡單、快速、無創(chuàng)、低成本等優(yōu)點，但傳統(tǒng)標志物的靈敏度和特異性存在一定局限［4］，因此尋找新的標志物對于提高腫瘤診斷的敏感性具有極其重要的提示作用。血清骨橋蛋白（osteopontin，OPN）作為一類具有多種生物學(xué)功能的細胞因子，存在于不同的組織和細胞中，其在細胞趨化、黏附和遷移、免疫調(diào)節(jié)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、抑制細胞凋亡等過程中均發(fā)揮重要作用；細胞質(zhì)胸腺激酶（cytoplasm thymidine kinase，TK1）是DNA前體物質(zhì)合成的限速酶之一，可催化胸腺嘧啶核苷轉(zhuǎn)變成單磷酸胸腺嘧啶，與細胞增殖生長有著密切的聯(lián)系；DKK1（Dickkopf?1，DKK1）已經(jīng)證實在肺癌、大腸癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌等多種腫瘤組織以及血清樣本中異常表達。因此，本實驗通過采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和免疫印跡增強化學(xué)發(fā)光法檢測不同人群中血清中OPN、TK1和DKK1含量，并采用Logistic回歸和受試者工作特征曲線（ROC曲線）評價血清OPN、TK1和DKK1單獨或聯(lián)合檢測在肺癌早期診斷中的臨床應(yīng)用價值，及其區(qū)分肺良性疾病和肺癌的潛在價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2014年7月至2016年7月收治的80例肺癌患者（肺癌組）作為研究對象，所有肺癌患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，另選取80例肺良性疾病患者（肺良性疾病組）和60例健康人群（健康對照組）作為研究對象，所有研究對象均排除其他類型腫瘤、心、肝、腎等重要臟器疾病，并簽署知情同意書。肺癌組男53例，女27例，年齡31～69歲，中位年齡56歲，其中小細胞肺癌12例，腺癌38例，鱗癌27例，大細胞癌3例；肺良性疾病組男51例，女32例，年齡28～71歲，中位年齡54歲，其中炎性假瘤15例，結(jié)核瘤49例，錯構(gòu)瘤16例；健康對照組男38例，女22例，年齡27～65歲，中位年齡53歲，組別間性別比、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法 所有靜脈血樣本均于早晨空腹抽取，將血清于-20℃冰箱中保存待用，所有肺癌或肺良性疾病患者血液樣本均于治療前采集。ELISA法檢測血清OPN、DKK1含量，ELISA試劑盒由武漢伊萊瑞特生物科技有限公司提供，免疫印跡增強化學(xué)發(fā)光法檢測TK1含量，試劑盒由華瑞同康生物技術(shù)有限公司提供，操作步驟嚴格按照說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進行分析，數(shù)據(jù)以中位數(shù)及四分位數(shù)［M（P25，P75）］表示，兩組間比較采用Mann?WhitneyU檢驗。采用Logistic回歸模型計算個體預(yù)測概率值作為聯(lián)合診斷新變量，并建立ROC曲線，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清OPN、TK1和DKK1含量的比較 健康對照組和肺良性疾病組血清中OPN、TK1和DKK1含量差異無顯著性（P＞0.05）；與健康對照組或肺良性疾病組比較，肺癌患者血清中OPN、TK1和DKK1含量均顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2 OPN、TK1和DKK1的Logistic回歸分析 對肺良性疾病組和肺癌組結(jié)果進行Logistic回歸分析，結(jié)果表明，血清OPN、TK1和DKK1含量均與肺癌發(fā)生密切相關(guān)（P＜0.05），分析結(jié)果見表2。使用SPSS軟件聯(lián)合三者建立二元Logistic回歸模型，并聯(lián)合三者生成新變量—預(yù)測概率值，作為三者聯(lián)合區(qū)分肺良性疾病和肺癌的診斷指標。

2.3 ROC曲線分析結(jié)果 ROC曲線結(jié)果表明，血清OPN、TK1和DKK1均具有一定的肺癌診斷價值（P＜0.05），具有區(qū)分肺良性疾病和肺癌的能力，三者的診斷價值由高到低依次為DKKA、TK1和OPN，但三者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；以最大Youden指數(shù)作為準確度評價指標時，TK1的靈敏度較低，但其特異性最高，OPN和DKK1對應(yīng)的靈敏度和特異性比較接近。當以三者聯(lián)合生成的預(yù)測概率值作為新診斷指標時，三者聯(lián)合檢測對應(yīng)的ROC曲線下面積達0.906（0.860，0.951），顯著高于三者單獨檢測的診斷價值（P＜0.05），且同時提高靈敏度和特異性。見表3和圖1。

表2 OPN、TK1和DKK1的Logistic回歸分析Tab.2 Logistic regression analysis of OPN，TK1 and DKK1

表3 各肺癌診斷指標的ROC曲線結(jié)果分析Tab.3 The diagnostic indicators of lung cancer ROC curve analysis

圖1 各肺癌診斷指標的ROC曲線圖Fig.1 ROC curve of lung cancer diagnostic indicators

3 討論

目前肺癌確診的金標準為病理學(xué)檢查，但由于檢查設(shè)備受限、創(chuàng)傷大、成本高、患者順應(yīng)性差等缺陷，很難大范圍推廣應(yīng)用，導(dǎo)致肺癌患者被發(fā)現(xiàn)時多為中晚期，致使我國肺癌死亡率始終居高不下，因此，適合大范圍應(yīng)用的血清生物標志物檢查成為一種早期診斷肺癌的重要手段［5］。

OPN作為一種分泌型磷酸化糖蛋白，具有多種生物學(xué)活性，能夠促進細胞的趨化、黏附和遷移，與惡性腫瘤的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等過程密切相關(guān)［6］。OPN作為促進肺癌血管生成的一種細胞因子，在肺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中起著極其重要的作用［7］。OPN在正常人群血液中呈低表達，但在肺癌患者外周血中高表達，并且血清OPN表達水平與肺癌患者預(yù)后不佳［8］、臨床病理特征［9］呈高度正相關(guān)，并且對肝細胞癌［10］、卵巢癌［11］等具有一定的診斷價值，有望成為一種無創(chuàng)的肺癌篩查的生物標志物，但國內(nèi)關(guān)于其對肺癌診斷價值的研究鮮有報道。TK1是一種新型的細胞增殖特異性標志物，與細胞分裂增殖密切相關(guān)，是DNA合成期的特殊標志酶，與細胞增殖能力呈正相關(guān)，在健康人群血清中TK1表達極低，當機體發(fā)生惡性腫瘤時，細胞增殖速度異常增加，TK1含量明顯升高，該特點為其在早期肺癌診斷中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)［12-13］。臨床研究表明，血清TK1含量升高是肺癌預(yù)后不佳的重要因素，并且在肺癌化療前期TK1含量增加與治療失敗和較差的總體生存率高度相關(guān)［14］。研究表明，血清TK1在乳腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌等患者中異常升高，對于腫瘤檢測具有較高特異性，可有效提高其他腫瘤篩查指標的腫瘤檢出率。DKK1為一種分泌型糖蛋白，主要通過抑制Wnt信號通路影響細胞凋亡、腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移等，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用［15］。目前，血清DKK1檢測用于腫瘤篩查以肝細胞癌［16］和胰腺癌［17］的研究為主，有研究表明，肺癌患者血清中DKK1含量異常升高［18］，有望成為肺癌診斷的新的血清學(xué)指標，但國內(nèi)外關(guān)于評價血清DKK1對肺癌診斷價值的研究相對較少，缺乏足夠的人體研究數(shù)據(jù)支持，因此，本研究通過比較血清DKK1在健康人群、肺良性疾病患者和肺癌患者中的含量，并對其診斷價值進行評價，希望為應(yīng)用血清DKK1診斷肺癌提供參考。

本研究結(jié)果表明，肺癌患者血清中OPN、TK1和DKK1含量明顯高于健康人群或肺良性疾病患者，提示血清OPN、TK1和DKK1檢測具有篩查肺癌的可能性。由于健康人群和肺良性疾病患者之間各指標差異均無顯著性，且臨床早期區(qū)分肺良性疾病和肺癌的意義重大，故本文只針對肺良性疾病和肺癌的區(qū)分展開進一步探討。通過Logistic回歸對肺良性疾病和肺癌患者的數(shù)據(jù)進行分析，結(jié)果表明血清OPN、TK1和DKK1表達水平與肺癌發(fā)生關(guān)系密切，并進一步得出三者聯(lián)合的預(yù)測概率值，作為三者聯(lián)合區(qū)分肺良性疾病和肺癌的診斷指標。ROC曲線分析結(jié)果表明，血清OPN、TK1和DKK1單獨檢測均具有一定的肺癌診斷價值，其中TK1的特異性可高達92.77%，但靈敏度偏低，而聯(lián)合檢測的診斷價值顯著高于三者單獨診斷，并能夠同時提高肺癌診斷的靈敏度和特異性，靈敏度和特異性分別達到77.5%和93.98%，這可有效降低三者單獨診斷肺癌時發(fā)生誤診或漏診的情況。綜上所述，血清OPN、TK1和DKK均可用作臨床篩查肺癌的指標，且三者聯(lián)合檢測具有較高的臨床診斷價值，可以提高肺癌早期診斷的特異性和敏感性，對于區(qū)分肺癌和肺良性疾病具有重要價值。但是，這也是筆者早期粗淺的研究結(jié)果，目前也只是完成了對不足100例患者的檢測，還仍需要更大樣本量的數(shù)據(jù)來證實三者聯(lián)合檢測可以提高肺癌早期診斷的實用性及有效性。同時，由于受到本科室收治對象為肺病患者的局限性，未能與其他類型腫瘤進行對照研究，故筆者下一步將嘗試于其他腫瘤科室合作進行深入研究。