口腔鱗狀細胞癌中VEGF與Ki-67的表達及意義

安義 張椽

（1貴州醫科大學第二附屬醫院口腔科 貴州 凱里 556000）

（2貴州醫科大學第二附屬醫院病理科 貴州 凱里 556000）

口腔鱗狀細胞癌（Oral Squamous Cell Carcinoma，OSCC）是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤之一，約占口腔癌總數的80%以上。由于口腔癌具有早期廣泛淋巴結轉移的特點,而且約有60%的患者處于癌癥的第Ⅲ和Ⅳ期,其生存率很低，目前的臨床診斷和先進的治療方法均不能有效地提高患者的生存率，其5年生存率并不理想，影響患者的生活質量和健康[1-2]。探討OSCC的發病機制，對腫瘤標記物的研究，可以有助于早期診斷與防治，但在OSCC中這兩種因子的表達和意義鮮有報道。本研究采用EnVision法檢測VEGF與Ki-67在OSCC中的表達情況，旨在探討其在OSCC中發生、發展的相關性及與病理組織學分級和淋巴結轉移存在之間的關系，探討兩因子之間的相關性，為OSCC的診斷和治療提供幫助。

1.材料與方法

1.1 標本來源

收集貴州醫科大學第二附屬醫院2015—2018年間手術切除的30例口腔鱗癌組織存檔蠟塊及20例正常粘膜組織標本。男性19例，女性11例；年齡31～83歲，中位年齡60歲；有淋巴結轉移10例，無淋巴結轉移20例。標本均為首次病例，參照WHO《頭頸部腫瘤病理學和遺傳學》（2006年版）中對口腔鱗狀細胞癌的診斷標準[3]進行復閱、診斷并分組。術前均未接受化療或放療等治療。

1.2 試劑與方法

兔抗人VEGF單克隆抗體（ZA-0580）、兔抗人Ki-67單克隆抗體（ZA-0502）、PV-6001免疫組化檢測試劑盒(兔kit)、DAB顯色試劑盒和APES膠均采自北京中杉金橋生物有限公司。實驗方法簡述如下：每例標本均經10%中性甲醛固定，石蠟包埋，連續組織切片4μm厚，采用免疫組化EnVision法，按照試劑盒說明書操作步驟進行。

1.3 結果判定

VEGF中細胞質、細胞膜出現棕黃色顆粒者判定為陽性細胞，Ki-67中細胞核呈棕黃色顆粒者判定為陽性細胞。陽性結果判定根據Bee-sley和Mclaren分級方法[4]，按陽性細胞所占百分比并參考著色強度確定分級。用PBS作空白對照，用已知陽性OSCC切片作陽性對照。

1.4 統計學分析及處理

采用SPSS17.0統計軟件分析處理，率用卡方檢驗，兩者之間的相關性采用Spearman等級相關檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義判斷。

2.結果

本組30例OSCC，男性病例中VEGF表達陽性13（68.4%）例，Ki-67陽性表達14（73.7%）例；女性病例中VEGF表達陽性8（72.7%）例，Ki-67陽性表達9（81.8%）例。以中位年齡為界，分為“≤60歲組”和“＞60歲組”兩組。≤60歲組有15例，VEGF表達陽性10（66.7%）例，Ki-67陽性表達12（80.0%）例；＞60歲組有15例，VEGF表達陽性12（80.0%）例，Ki-67陽性表達11（73.3%）例。按組織分化程度分組，高分化組14例，中、低分化組16例，VEGF陽性率分別為42.9%（6/14）和75.0%（12/16），而高分化組和中低分化組Ki-67的陽性表達率分別為50.0%(7/14)和81.3%（13/16）。按是否有淋巴結轉移分為有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組，其中10例發生淋巴結轉移的OSCC組織7例VEGF表達陽性，8例Ki-67表達陽性，陽性率分別為70.0%和80.0%；而20例未發生淋巴結轉移的OSCC組織中，VEGF和Ki-67表達陽性病例分別為12例和15例，陽性率分別為60.0%和75.0%。（表）

3.討論

VEGF是一種高度特異性的有絲分裂原，刺激血管生成，導致纖維蛋白的降解，其作用非常廣泛，與腫瘤的生長、浸潤、轉移和預后之間具有密切的關系。目前發現的主要受體有VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。普遍共識是VEGF以旁分泌的方式調節腫瘤的血管形成，但也有證據表明，可能存在VEGF的自分泌機制，從而對腫瘤細胞分化產生調節作用，對腫瘤細胞的凋亡發揮抑制作用，腫瘤細胞生成增多，由它介導的腫瘤內皮細胞增殖和腫瘤微血管的生成促進了腫瘤的侵襲和轉移[5]。肖欣[6]研究VEGF和MMP-9在口腔扁平苔蘚（OLP）和OSCC中的表達情況，明顯高于在NOM中的表達，且在OSCC中表達更高，呈現逐漸增高的趨勢,提示VEGF可能與OLP的癌變存在密切聯系。顧玉州等[7]研究結果表明，VEGF在OSCC中表達率為71.25%,其陽性表達與腫瘤的頸部淋巴結轉移情況及五年生存率有關(P＜0.05)。本研究中，VEGF在OSCC中的表達率為70%，與有關文獻基本一致，且提示OSCC組織中腫瘤血管明顯增多，以滿足腫瘤過度增生的需要[8-9]。Ki-67是Gerders等從霍杰金氏病L-428細胞株的粗提核成分接種小鼠制備而來的單克隆抗體，其功能目前認為與細胞有絲分裂有關[10-11]，其表達水平與腫瘤惡性程度之間關系密切，可反映腫瘤細胞的增殖活性，與腫瘤的發展、轉移和預后高度相關。何偉[12]等研究Ki-67在NOM和OSCC中的陽性表達率分別為30.0%和79.2%，其在口腔鱗癌組織中的表達與腫瘤的臨床分期、分化程度、有無淋巴結轉移有關。在本研究中Ki-67的陽性表達率為75.0%，其表達差異具有統計學意義（P＜0.05），這與文獻報道的表達情況基本一致。本研究發現兩者之間無顯著性差異，這與Valkovic等的研究結果相符合，表明腫瘤新生血管形成和腫瘤細胞增殖并不是一直相互依賴的兩個過程。李培等[13]研究了Ki-67、VEGF和P16蛋白表達強度同PYM誘導化療敏感性的關系發現其均呈現高表達，表達程度越高，其細胞增殖越活躍，處于增殖狀態的細胞越多，因此對放療越敏感，PYM誘導化療的療效越好。

綜合分析本實驗研究，VEGF和Ki-67表達陽性的狀態與腫瘤的分期及淋巴結轉移因素密切相關，兩者表達具有正相關性。通過檢測VEGF和Ki-67的表達，對臨床治療與預后有間接指導意義，但VEGF和Ki-67之間相互促進的關系及機制有待于進一步研究證實。

表 OSCC中VEGF和Ki-67的表達與臨床病理特征的關系