熒光染色法和KOH濕片法在診斷淺部真菌感染中的效果比較

陳卉

淺部皮膚真菌病是一種常見(jiàn)的真菌感染疾病，主要是因人體毛發(fā)、表皮、甲等受到真菌侵犯導(dǎo)致的[1]。淺部皮膚真菌病具有很強(qiáng)的傳染性，且病情容易反復(fù)發(fā)作，容易傳播，引起交叉感染，嚴(yán)重影響人類(lèi)健康安全[2]。目前，臨床主要通過(guò)免疫學(xué)檢查、分離培養(yǎng)、直接涂片鏡檢等多種方法檢測(cè)真菌，其中KOH濕片法因操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn)是傳統(tǒng)檢測(cè)的常用手段，但該種檢測(cè)方法敏感性較低，且容易出現(xiàn)主觀錯(cuò)誤，導(dǎo)致漏診[3]。我院采用熒光染色法診斷真菌感染，結(jié)果發(fā)現(xiàn)檢測(cè)效果良好。為進(jìn)一步探討分析淺部真菌感染的有效診斷方法，本文對(duì)比分析了我院皮膚科門(mén)診2018年1—5月收治的60例疑似真菌感染標(biāo)本，分別采用熒光染色法、KOH濕片法檢測(cè)的結(jié)果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院皮膚科門(mén)診2018年1—5月收治的60例疑似真菌感染標(biāo)本，60例可疑標(biāo)本中，感染部位位于手足部20例，體股部22例，頭面部8例，甲部10例。

1.2 方法

1.2.1 儀器及試劑 本次采用立特晰－真菌熒光染色液（一步法，安徽德萊康生物醫(yī)療科技有限公司），選用的試劑主要包括復(fù)染劑、10% KOH溶液（取KOH 10 g溶于100 ml純水中）、熒光素。顯微鏡選擇奧林巴斯CX31普通光學(xué)顯微鏡以及萊卡熒光顯微鏡。

1.2.2 取材 采用75%酒精對(duì)皮損部位進(jìn)行消毒，采用鈍頭刀片刮取適量皮損炎性活動(dòng)性邊緣的皮屑，頭癬取病發(fā)及附近鱗屑，趾甲、指甲取近端甲屑。采用酒精消毒后應(yīng)快速取材，分為兩份，分別放置于載玻片上。

1.2.3 檢測(cè)方法 （1）熒光染色法。取一滴染色液滴入標(biāo)本中，直至覆蓋或淹沒(méi)整個(gè)標(biāo)本，靜置幾秒。將蓋玻片蓋上，借助紙巾或者棉簽進(jìn)行壓片，將多余染液吸走，放置于熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察。（2）KOH濕片法。取一滴10% KOH溶液放置于載玻片上，將蓋玻片蓋上，點(diǎn)燃酒精燈加熱標(biāo)本使其溶解，放置于光學(xué)顯微鏡下觀察。如果標(biāo)本屬于趾甲、指甲或毛發(fā)，應(yīng)滴入一滴20% KOH溶液。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比分析兩種檢測(cè)方法的檢出特征，并對(duì)比兩種檢測(cè)方法對(duì)不同部位檢出陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本次選擇的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件為SPSS 18.0，檢出陽(yáng)性率等計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)通過(guò)（n，%）表示，組間數(shù)據(jù)對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩種檢測(cè)結(jié)果對(duì)比（n，%）

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測(cè)方法特征對(duì)比

熒光染色后，孢子、菌絲等真菌會(huì)被熒光標(biāo)記，鏡下可觀察到清晰的真菌輪廓，呈亮藍(lán)色，可觀察到孢子的出芽形態(tài)以及菌絲的典型橫隔結(jié)構(gòu)，便于識(shí)別。在熒光顯微鏡下，可觀察到暗黑色的背景、雜質(zhì)，背景和真菌熒光造成強(qiáng)烈的反差對(duì)比。KOH濕片法顯示背景雜亂，真菌與背景反差比較小，且真菌結(jié)構(gòu)不容易進(jìn)行分辨和判斷。

2.2 兩種檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

熒光染色法檢出手足部陽(yáng)性7例，體股部14例，頭面部6例，甲部7例；KOH濕片法檢出手足部陽(yáng)性4例，體股部11例，頭面部2例，甲部6例；熒光染色法檢出陽(yáng)性34例（56.7%），KOH濕片法檢出陽(yáng)性23例（38.3%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

3 討論

KOH是臨床上最早使用的一種直接鏡檢法，不僅操作簡(jiǎn)便，且無(wú)需特殊儀器[4]。但這種檢測(cè)方法缺點(diǎn)明顯，如背景較為雜亂，陽(yáng)性檢出率較低，漏診率較高，特別體現(xiàn)在甲屑標(biāo)本上[5]。而且孢子類(lèi)結(jié)構(gòu)容易和脂滴、氣泡相混淆，導(dǎo)致誤診[6]。熒光染色法中具有特殊的熒光素，可以特異性結(jié)合真菌細(xì)胞壁上的幾丁質(zhì)，且具有較高的親和力，只要十幾秒的時(shí)間即可完成反應(yīng)，因此檢測(cè)靈敏度較高，反應(yīng)也較快[7]。熒光顯微鏡設(shè)定的激發(fā)光波段特定為340～400 nm，在這種條件下，孢子、菌絲會(huì)被熒光標(biāo)記，且呈明亮的藍(lán)綠色，黑暗的背景下，真菌輪廓在強(qiáng)烈的反差對(duì)比下可清晰顯示，相對(duì)KOH濕片法而言，可更加清晰的觀察真菌形態(tài)結(jié)構(gòu)，辨識(shí)度大大提高。本次實(shí)驗(yàn)研究表明，熒光染色法檢出陽(yáng)性率高于KOH濕片法，這和陳銳君等[8]研究報(bào)道結(jié)果（淺部真菌感染患者采用熒光染色法診斷的陽(yáng)性檢出率高于KOH濕片法）基本相符。但需要注意的是，熒光染色法可對(duì)植物纖維素進(jìn)行標(biāo)記，玻片、空氣中包含少量纖維，可能在熒光顯微鏡下也會(huì)發(fā)出熒光，但一般情況下纖維形態(tài)不具備規(guī)則性，亮度、粗細(xì)、大小等也不同，應(yīng)重點(diǎn)觀察熒光是否具備典型的出芽結(jié)構(gòu)、真菌橫隔。

綜上所述，熒光染色法是一種快速、準(zhǔn)確的真菌檢測(cè)方法，在具備熒光顯微鏡的條件下，熒光染色法可用于皮膚科對(duì)真菌感染進(jìn)行早期診斷。